全 文 ：组织培养蛹草的近红外分析和形态观察报告
解放军 20 5 医院 ( 12 10 0 4 )
锦 州 医 学 院 ( 22 10 0 0 )
刘 迪 * 1
吴佩 杰 *2
摘要 用组 织培养法获得 2 种蛹草子座及 2 种 菌丝体粉末 , 并以冬 虫夏草为 参照 比较近红外光谱
特性 , 认为 野生 虫草与人工蛹草的 光语特性相 似 。 摘 除子 座后 的培养基也有相 似的 光谱特性 ; 污染杂
菌后 的 培养基其光谱特性 不 同。 同时 , 首次报告蛹 草新鲜组 织 不 加保护剂 , 在低温 冷藏后 5 个 月能 再
次形 成子 座 , 其外形 和 显微特征与歼 生蛹革一致 。
关键词 蛹草 , 北冬 虫夏草 ; 近红外光语
蛹 草 ( C o r d刀ce sP 0 il’ at ir s) 亦称蛹 虫
草 、北虫草 、 北冬 虫夏草 , 是虫草的另一个种 。
文献认为蛹草可 以代替虫草入药〔 ’ 〕。 蛹草性平
味甘 , 益肺 肾 , 补精髓 , 止血化痰〔 2〕。 野生蛹
草极为稀少 , 所以研究人工培养形成完整子座
的蛹草具有重要的药用价值和商品价值 。 蛹 草
所 含的虫草素 , 有抗病毒 、 抗肿瘤作用 「” , 弓〕 。
组织培养蛹草子座近红外分析及其再生子座的
显微观察国内外未见报道 , 本文就以上 2 点进
行探讨 如下 。
实验材料和方法
! 样品
冬 虫夏草 ( 9 号 , 青海产 , 长春中药厂主
任药师朱宏图馈赠 ) ; 蛹草不同子 座 ( 1 号 、 10
号 ) 及 培养基干品 ( 4号 、 16 号 ) ,蛹草标本经
中国科学院微生 物研究所鉴定 ; 宁心宝 ( 15 号 ,
锦州制 药二厂生产 )
2 人工蛹草的培养方法「5 」
在土 豆琼脂培养基上接种蛹草菌丝 , 25 ℃
培养 5一 7 d 长满管 。 在米饭培养基内加入蛋清
等蛋白成分 , 将斜 面菌种接种 1 周后 , 菌丝 布
满米饭 培养基表面 , 约 30 一 如 d后菌丝吃透培
养基 。 同时有桔黄色色素沉着 , 约 20 d左右扭
结形成子座 , 即为米饭培养基蛹草子座 l( 号 ) 。
将柞 蚕蛹 消毒后 , 无菌 条件下接种一级种 。
50 d左右形成子实体 , 为柞蚕蛹 虫草子座 ( 10
号 ) 。
3 沂红外宪谱分析
称取各种样品 10 9 , 用 M S 型碾磨机 (美 V
O 有限公司 ) 碾成粒度均匀一致的粉末状物 ,
装入样品盒中 , 上 51 A 型红外特性分析仪 (美
N E O T E C 仪器有限公 司 ) , 记入 电脑 。 本法
样品无损失 , 并可反复测定 。
4 显微观察
固体培养形成的子座未加任何保护剂直接
放 入零 下 20 ℃低温冰柜中 , 5 个 月后 自然复温
摘除子座 , 剩余培养基重新封好 , 经 20 d 后再
次形成子座 。 取其新鲜组织 , 固定于 B su in 氏
液中 , 常规石 蜡包埋 , 连续切片 (厚 5 一 6 林
m )
、
H
e m a t o叮 l i n 、 E o s i n ( H . E ) 染 色
(陈佛痴 , 1 9 8 0) , 光学显微 镜观察 。
结果与讨论
l 虫草 、 2种组织培养蛹草子座和宁心宝
的近 红外特征
51 A 型红外分析仪以近红外 光谱 ( 12 0 0 一
2 4 o o ln )照射到有机物体上 , 有机化合物吸收
各种波长 的红外线 , 显示其独特的吸收特征 。
本文 以虫草 ( 9 号 ) 作参照 , 比较柞蚕蛹 虫草
子座 ( 10 号 ) 、 米饭培养基蛹 虫草子 座 ( 1号 ) 、
宁心宝 ( 虫草发酵物 , 15 号 ) 。 结果 9 、 1 、 10
号光谱特征相似 。
新鲜人工蛹草有鲜蘑菇似的气味 , 干燥后
有清香味 。 虫草发酵物— 宁心宝 15 号不用打开胶囊就能 闻到不愉快的腥臭味 , 缺少 天然 虫
* 1 沈阳重型机 器厂职工医院 ; * 2 锦州市卫校 。
一 ~一— 一 - 一~ - - - 一 - - -一 - -一一 - - - ~ - - - 洲~ ~
草的清 香 气 味 , 并 在 5 9 70 一 s o 2 5 e m 一 , 处有
一个波峰 , 同时 在 4 4 60 一 42 4 1 e m 一 ` 处也有差
异 。 笔者认 为 : 市售虫草发酵 品带有腥 臭味 , 应
该在工艺上改进 。 目前国内从虫草 上分到 5 个
菌株 , 并进行深层发酵成为虫草代 用品 , 它们
能否形成子座应进一步探讨 。 本文所述蛹草 能
在不同培 养基上形成完整子座 , 所 以有较大开
发价值 。
2 蛹虫固体培养基的近红外特征
人工培育的蛹草可 以形成完整子座 , 发酵
虫草 为无定形粉 末 , 与传统 中药入药部位 不同 。
人工蛹草子座 比野生子座粗壮 、 高大 , 其色泽
和香味与野生蛹草 相似 , 所以有重要的药用价值
与商品价值 。 本文对上述摘除子座后的蛹虫草
米饭培养基 (编号 4) , 结果表明 , 1 号 (在米
饭培养基上形成的子座 )与虫草红 外光谱相似 ,
而摘取子座 后的培养基含有的成分与虫草 的光
谱特性也极 为相似 。 最近我们又进行了氨基酸 、
R N A
、
D N 了芍印虫草素的分析 , 结果表明培养
基中氨基酸组成 比例与虫草相似 , 但低于子座
中的含量 , 也低于虫草中的含量 。 核酸分析表
明 ,培养基中 R N A 比子座 中高 3 倍左右 , 因此
剩余培 养基可 以综合利用 。
3 杂菌 污染 的蛹 虫草培养基的光谱特征
在组织培养蛹草的过程中 , 有时会发生杂
菌污染 。 我们在 s e m x s e m x 4 e m 米饭培养基
上发现一块 曲霉污染约 cZ m x 3c m 左右 , 把整
块培养基干燥 、 碾磨 (编号 16 ) , 上机 作红外分
析 , 并与 9 号相 比 , 结果表明 , 只要含有少量
被污染 的培养基 , 就 会 在 5 9 7 0 ~ s o 25 e m 一`
处和 4 4 6。一 42 4 1 c m 一 `处 表 现 不 同的红外光谱
特征 。 我们认为 , 近红 外测定可快速鉴别蛹草
培 养物的纯度 ; 有污染 的成分不能混入药用成
分内 , 以免产生毒副作用 。
4 蛹草新鲜组织 的二茬子座
野生蛹草长约 0 . 8 ~ .7 O C m , 我们培养出的
子座长达 11 . Oc m , 亦呈桔黄色 , 比野生蛹草 粗
大 , 摘 除后能形成二茬子座 〔 “ 了。 我们首次观察
到低温冷藏 15 0 d后的新鲜组织也能形成二茬子
座 。 1 9 90 年 10 月 5 日将带有成熟子座的培养基
未加任何保护剂放入低温冰箱 ( 一 20 ℃ ) 中保
存 。 1 9 9 1年 3 月中旬 , 即 5 个月后取 出培养瓶 ,
摘除全部子座 , 仍将剩余培养基封盖好 , 置室
温 下 , 20 余 d 后观察 到它再次形成子座 。 但较
第一次子座纤细 , 长 3 . oc m 、 直径 l . s m m 。 制
作切片后观察到子囊壳在子座 外周表面无规则
排列 , 侧壁厚 ; 子囊壳内有无数个长条形的子
囊 。 该项观察提示 : ( 1 )蛹虫草培 养基可 以在低
温 下冷冻保藏 , 无保护剂时至少可冷藏 5个月 ,
比琼脂斜 面经济方便 , 其生活能力不变 ; ( 2) 蛹
草冷冻后在人工培养下形成二茬成熟子座 , 该观
察对菌种保存和再生子座有重要指导意义 ; ( 3)
蛹草所表现的耐低温 特性对今后耐低撮蛋 白的
研究有重要价值 。 ( 4) 人工育成再生子座的显微
特征与文献一致〔 “ 〕 , 为其开发利用提供 了依据 。
参 考 文 献
《全国中草药汇编 》 编写组 . 全国 中草药汇编 . 上册 , 北京 :
人民卫生 出版社 , 1 9 76 : 2 7 3一 27 4
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B f o l o g i c a l C h
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. 台湾那琦教授来京讲学 19 9 2年 8 月21 日 , 台湾台中市中国医药学院教授 、 台湾著名生药 、 `本草学家那琦先生
应邀来中国中医研究院中药研究所讲学 , 题 目为 “ 台湾中药研究 、 教育概况 ” 。他从 3 个方面介绍了台湾有关中
药的情况 : ( 1) 台湾中药研究环境 ; ( 2) 台湾中药教育 ; (3 ) 台湾药政管理 。 那琦先生的学术报告内容丰富 , 使聆听
者受益匪浅 。
那琦先生现已 7() 岁高龄 , 这次是他到台湾 45 年后第一次回大陆讲学 。在台湾的 45 余年间 ,那琦先生立志于中
医药研究 、教育工作 , 先后培养出六七千名学生 , 并撰写 了有关本草 、 生药 、 药学史等方面的论文专著 10 多篇
部 , 为台湾中医药事业的发展做出 了巨大贡献 。 仁中国中医研究院中药研究所 唐 晓军 〕
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中国药学杂志 19 92年第 27 卷第 n 期
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