全 文 ：·研究报告·
野蘑菇担孢子萌发和菌丝细胞学观察研究＊
李荣春1 ,余　杨2 ,李林玉1 ,郝瑞芳1
(1.云南农业大学 食用菌研究所 ,云南昆明　650201;2.云南农业大学国际交流中心 ,云南 昆明　650201)
摘　要　野蘑菇(Agaricus arvensis Schaeff ex F r.)是欧洲近年来驯化成功的新食用菌种类 , 应用光学和电子
显微镜对野蘑菇的担孢子 、担孢子的萌发过程和单孢菌丝的细胞学特征进行了观察研究 , 为其物种生物学研
究积累资料。
关键词　野蘑菇;担孢子;萌发;显微观察
中图分类号　Q949.329.81;S646.1+1　　文献标识码　A　　文章编号　1005-7021(2004)03-0005-03
　　野蘑菇(Agaricus arvensis Schaeff ex Fr.)是
欧洲近年来驯化成功的新食用菌种类[ 1 , 2] , H.
Jahm 认为野蘑菇是世界优秀的食用菌种类之
一[ 2] ,在欧洲是人们采食的主要野生菌之一 ,在我
国也被广泛采食 ,同时是常用的药用菌 ,是“舒筋
散”的主要成分之一[ 3 ,4] 。为了对其进行生物学
特性的研究 ,为栽培技术和遗传育种提供背景科
学基础 ,本研究对野蘑菇的担孢子形态 、担孢子萌
发过程和单孢菌丝的细胞学特征进行了观察研
究 ,现报道如下 。
1　材料与方法
1.1　材料
担孢子　本研究所用菌株由英国国际园艺研
究中心提供 ,菌株编号 R1.2 ,收集者 Tim Elliot t ,
收集地英国西苏塞克斯郡 ,担孢子为由亲本 R1.2
菌株经人工栽培获得的孢子印上的担孢子。
1.2　方法
1.2.1　担孢子的扫描电镜观察　采用李荣春和
R.Noble[ 5]的方法。用粘有导电粘性碳膜的样品
台直接在孢子印上托印粘上担孢子 ,喷金后置于
剑桥 S200型扫描电子显微镜下观察 ,工作电压为
10 kV ,工作距离 10 mm 。在电镜下测量 50 个担
孢子的长轴和短轴 ,平均值即为担孢子的大小 。
1.2.2　担孢子的萌发　①培养:分别用 CYM ,
MEA和 10%CYM+CE[ 6]三种培养基 ,将担孢子
浓度为 1×103/mL 的担孢子悬浮液 1 滴接种到
9 cm直径的培养皿中 ,置 24 ℃恒温培养箱中培
养。②观察:培养 3 d后每天从培养箱中取出培
养皿直接置于菜司 Dialux20型研究显微镜下观察
并照相 。
1.2.3　单孢菌丝的细胞学观察　培养皿接种时
在培养基中斜插入已灭菌的盖玻片 ,接种块生长
后 ,菌丝逐渐向盖玻片生长并爬上盖玻片 ,但菌丝
爬上盖玻片 5 mm 后 ,取出盖玻片 ,采用描述的
Sonnenberg &Frische[ 7] 方法观察单孢菌丝的细
胞 ,即用 5 mg/L 浓度的荧光染色剂(Hoeschst
33258)在黑暗中染色 15 min ,然后置于研究显微
镜 Dialux20下进行显微荧光观察 、照相 。
2　结　果
2.1　担孢子的形态与大小
　　扫描电子显微镜观察发现 ,野蘑菇的担孢子
形态与双孢蘑菇的非常相似 ,呈一面下凹的椭圆
球形(图 1)。其下凹面的一端中央有一喙状突
起 ,担孢子的长轴为(7.03 ±0.22)μm , 短轴为
(4.83±0.19)μm 。
图 1　野蘑菇的担孢子
Fig.1　The spo res of house mushroom
2.2　担孢子的萌发
2.2.1　不同培养基对担孢子萌发率的影响　试
验表明 ,不同培养基对担孢子的萌发率具有很大
的影响 ,不同培养基的担孢子萌发率相差几倍(见
表 1)。
收稿日期:2003-11-24
作者简介:李荣春　男 ,教授。现主要从事食用菌的资源 、遗传育种和栽培技术研究和教学。
　　　　　＊云南省科技厅 2002科技攻关项目(2002NG11)
5微生物学杂志 2004年 5月 第 24卷第 3期　JOURNAL OF MICROBIOLOGY May 2004 Vol.24 No.3
　表 1　不同培养基对担孢子萌发率的影响
　Table 1　Effect of different media on spores
　　　　　germinat ing
培养基 萌发率/ %
CYM　　　　 8.25
M EA　　　　 13.13
10%CYM+CE 57.54
2.2.2　担孢子的萌发　担孢子萌发的过程是先
从萌发孔形成管状突起 ,突起向一个方向逐渐伸
长形成管状菌丝结构(图 2),随后在突起的另一
方向也伸长形成两端都同时进行伸长生长的管状
菌丝结构(图 3);当两端伸长的菌丝生长到约
200 μm 长时 ,菌丝除两端继续生长外 ,开始形成
分枝 ,有的分枝深入到培养基中 ,有的在培养基表
面(图 4),最后菌丝在不断生长的同时不断分枝 ,
生长形成肉眼可见的幼小菌落(菌丝体)(图 5),
完成萌发过程 。
图 2　担孢子开始萌发　　　　　　　　　　　　　图 3　菌丝两端开始生长
　　　　　Fig.2　Spores germinating　　　　　　　　　　　　Fig.3　Hyphal grow ing
图 4　菌丝开始分枝生长 　　　　　　　　　　　　　图 5　幼小菌落
　　　　Fig .4　Hyphal ramifying and g row ing　　　　　　　　Fig.5　Younger mycelium
2.3　单孢菌丝的细胞学观察
图 6　菌丝的荧光显微结构
Fig.6　Fluo rescent microstructure of hyphal
　　在显微镜下从担孢子萌发的培养皿中小心地
挑起幼小的单孢菌落转入新的具有培养基的培养
皿中培养获得单孢菌株。然后按前述的方法进行
细胞学观察研究发现:经荧光染色剂染色后 ,菌丝
细胞壁 、细胞核和部分细胞器发出明显的荧光。
野蘑菇的菌丝是不具有锁状联合 、多细胞 、成树枝
状多分枝的丝状体 。菌丝顶端的菌丝细胞壁薄 ,
原生质浓厚 ,细胞器丰富 ,菌丝细小 ,直径仅为 4
～ 7 μm ,老菌丝的细胞壁厚 ,原生质稀薄 ,菌丝较
粗 ,直径为 7 ～ 10 μm 。菌丝细胞的细胞核多数 ,
常为 5 ～ 10 个 ,50个细胞细胞核的平均数为 6.8
个(图 6)。
3　讨　论
3.1　野蘑菇的担孢子形态与同属的双孢蘑菇的
非常近似 ,具有相似的形态结构特征。
3.2　不同培养基对担孢子的萌发影响很大。在
添加了堆肥浸体物的培养基中担孢子的萌发率较
高 ,10%CYM +CE 培养基上担孢子的萌发率是
CYM 培养基的 8 倍左右 ,是MEA培养基的 4倍
多 ,可以看出野蘑菇的担孢子萌发与其草腐生的
营养生理特性密切相关。
3.3　野蘑菇的担孢子萌发仅有一个萌发孔 ,萌发
出的菌丝最早是形成与萌发孔垂直的两端都同时
进行伸长生长的管状菌丝结构 ,形成一条菌丝;随
后开始形成分枝 ,最后形成肉眼可见的幼小菌落。
3.4　细胞学研究表明野蘑菇的单孢菌丝是无锁
状联合 、具有多细胞核的多细胞树枝状分枝的丝
状体 ,这与 Sonnenberg &Fritsche[ 7] 的观察结果
是一致的 。
参　考　文　献
6 　　　　微　生　物　学　杂　志　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　24卷
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Study on Basidiospore Germination and Hyphal Cytology of Horse Mushroom
LI Rongchun1 , YU Yang2 ,LI Linyu1 ,HAO Ruifang1
(1.Inst.of Edible Fungi;2.Center of Int l Exchange;Yunnan Agri.Univ.Kunming 650201)
Abstract　Horse mushroom (Agaricus arvensis)is a successfully new domesticated edible fungus in Europe recent years.
Characteristics of basidiospore , its germination , and sing le-cell hyphal cytology were observed and studied using optical and elec-
tronic microscopes to accumulate its biological knowledge.
Keywords　horse mushroom (A.arvensis), basidiospo re, germination , micro scopic observation.
　　(上接 4页)
参　考　文　献
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Characteristic Analysis of Adhesion and Invasion Genes
in Leptospira interrogans
YANG Hongliang1 , LI Wenjun1 , JIANG Xucheng1 ,GUO Xiaokui2
(1.Dept.of Pathol.;2.Dept.of M icrob.& Parasi tol.Shanghai S ec.Med.Univ.Shanghai 200025)
Abstract　Based on the anno tation result of whole genome sequencing of adhesion and invasion related genes of Leptospira
interrogans serovar.icterohaemorrhagiae serotype lai and using on-line database of NCBI , Swisssprot/ TrEMBL , ProDom ,
Pfam , Tmpred , SignalP , ClustW detailed analysis on encoded protein structural domains , transmembrane regions , signal peptide of
four adhesion and invasion related genes , i.e.mce , invA , mviN , and atsE w ere carried out.Software of Bioedit , Mega2 was also
used to compare the multiple sequence of amino acid and to draw the phylogenetic tree.The results show ed that mce and mivN
are transmembrane protein , and invA and atsE are protein inside the thallus.Many microbes that pathogenic to mammals and
plants possess four adhesion and invasion related genes of mce , invA ,mviN and atsE , and their expressed protein play impor tant
role in the process of infection of the host , and there are higher similarities between adhesion and invasion related protein and pri-
mary structure.According to the bioinformatic results , it could infer that there are close relations between adhesion and invasion
related genes of L.interrogans serovar.icterohaemorrhagiae serotype lai and pa thogenicity of Leptospira spp.And their en-
coded protein might play impo rtant role in the pathogenic process.
Keywords　Leptospira , adhesion , invasion , bioinfo rmatics.
73期　　　　　　　　　　　　　　　李荣春等:野蘑菇担孢子萌发和菌丝细胞学观察研究