全 文 ：Chinese Journal of New Drugs 2013，22(15)
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中国新药杂志 2013 年第 22 卷第 15 期
［基金项目］ 国家“重大新药创制”科技重大专项( 2009ZX09103-
388) ; 广东省科技计划项目( 2009A030100014)
［作者简介］ 李生梅，硕士研究生，主要从事复方中药新药开发研
究。联系电话: 13631478581，E-mail: lishengmei99@ yahoo． cn。
［通讯作者］ 林吉，男，研究员，主要从事复方新药开发研究。联系
电话: 13602793023，E-mail: linji88@ gzhtcm． edu． cn。
·重大新药创制专项巡礼·
反相高效液相色潽法测定巴豆中木兰花碱的含量
李生梅1，2，3，曾 宝1，3，林 吉1，3，吴安国1，3，赖小平1，3
(1 东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院，东莞 523808;2 广西梧州制药(集团)股份有限公司，
广西 543002;3 东莞广州中医药大学，广州 510006)
［摘要］ 目的:建立巴豆中木兰花碱的含量测定方法。方法:采用反相高效液相色潽法，Agilent Eclipse
XDB-C18色谱柱，以甲醇-0． 1%磷酸水溶液为流动相，柱温 30 ℃;体积流量 1． 0 mL·min
－1;检测波长 220 nm。
结果:木兰花碱在(0． 098 ～ 1． 223)μg范围内线性关系良好(r = 0． 999 7)，平均加样回收率为 99． 2%，RSD
为 3． 2%(n = 6)。结论:该法简便快速，准确实用，可用于巴豆药材的质量控制。
［关键词］ 巴豆;木兰花碱;反相高效液相色潽法;含量测定
［中图分类号］ R927． 2 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1003 － 3734(2013)15 － 1754 － 04
Determination of magnoflorine in Croton tiglium L． by RP-HPLC
LI Sheng-mei1，2，ZENG Bao1，3，LIN Ji1，3，WU An-guo1，3，LAI Xiao-ping1，3
(1 Dongguan Mathematical Engineering Academy of Chinese Medicine，Guangzhou University of
Chinese Medicine，Dongguan 523808，China;2 Guangxi Wuzhou Pharmaceutical(Group)Co．，Ltd．，
Guangxi 543002，China;3 Dongguan Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China)
［Abstract］ Objective:To develop an HPLC method for determination of magmoflorine in Croton tiglium L．
Methods:The HPLC conditions were as follows:Agilent Eclipse XDB-C18 column(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)was
used with methanol-0． 1% phosphoric acid solution as the mobile phase，the column temperature was 30℃，and the
flow rate was 1． 0 mL·min －1 ． The detection wavelength was set at 220 nm． Results:Magnoflorine had good linearity
in the range of 0． 098 ～ 1． 223 μg(r = 0． 999 7)． The average recovery was 99． 2% with RSD of 3． 2%(n = 6)．
Conclusion:The developed method is convenient，rapid and accurate with good repeatability，which is suitable to
control the quality of Croton tiglium L．
［Key words］ Croton tiglium L．;magmoflorine;RP-HPLC;detetmination
巴豆为大戟科植物巴豆的干燥成熟种子，主产
于四川及福建、湖北、湖南、广东、广西等地。性辛，
热;有大毒，归胃、大肠经。内服泻下寒积，逐水消
肿，祛痰利咽，外用蚀疮，可用于恶疮疥癣［1］。对于
巴豆的研究以前更多关注的是其剧毒成分巴豆油，
然而近年来，学者开始研究其非油部位，并取得可喜
结果。大量研究表明巴豆非油部位中的巴豆生物碱
类成分具有显著的抗癌抗肿瘤作用，如巴豆生物碱
对人宫颈癌 Hela 细胞有增殖抑制和诱导癌细胞凋
亡的作用［2］;能改变人胃癌细胞形态，诱导人胃癌
细胞 SGC-7901 凋亡［3］;抑制人骨肉瘤细胞有丝分
裂，从而诱导人骨肉瘤细胞凋亡［4］等等。但是对巴
豆总生物碱的具体化学成分作者未见相关报道。有
关巴豆总生物碱活性部位的化学成分及其含量测定
的研究，对于进一步阐明药效物质基础和作用机制
显得十分必要和迫切。为此，本研究建立高效液相
色谱方法，测定从巴豆总生物碱中分离鉴定得到的
一个重要游离生物碱———木兰花碱的含量。木兰花
碱是重要的活性物质成分，可抑制 HERG 钾通道蛋
白表达［5］，其药理作用值得深入研究。运用所建立
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的高效液相色谱法测定不同产地 9 批次巴豆药材中
木兰花碱的含量，一方面有助于对巴豆总生物碱的
进一步研究，另一方面也可为巴豆的药材质量控制
提供实验依据。
仪器与试药
LC － 20AT 高效液相色谱仪、SIL － 20A 自动进
样器、SPD － M20A 二极阵列管检测器、CTO － 20A
柱温箱、Shimadzu LC Solution色谱工作站(日本 Shi-
madzu公司) ;Sartorius BSA224S － CW 电子分析天
平(赛多利斯科学仪器北京有限公司) ;VGT －
2013QTD超声仪。
木兰花碱(广州中医药大学新药开发研究中
心，经高效液相色谱面积归一化法测定纯度 ＞
98%) ;9 批次巴豆药材分别购自四川、广西、云南等
三个主产区，所购药材经本研究中心赖小平研究员
鉴定为大戟科植物巴豆 Croton tiglium L． 的成熟果
实。色谱用甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均
为分析纯。
方法与结果
1 色谱条件
色谱柱为 Agilent Eclipse XDB-C18柱(250 mm ×
4． 6 mm，5 μm)。流动相(A)为甲醇，流动相(B)为
0． 1%磷酸，梯度洗脱，洗脱程序:0 ～ 10 min，5% A;
10 ～ 28 min，5% A ～ 61% A;28 ～ 35 min，61% A ～
91%A。流速 1． 0 mL·min －1;柱温 30 ℃;检测波长
220 nm;进样量 10 μL，每次进样检测前用初始流动
相平衡至少 10 min。
2 对照品溶液的制备
精密称取木兰花碱对照品 4． 89 mg，用水溶解
并定容至 10 mL，摇匀，精密吸取 2． 5 mL 定容至 25
mL，制成含 0． 048 9 mg·mL －1木兰花碱的对照品溶
液，4 ℃保存备用。
3 供试品溶液的制备
精密称取巴豆种子药材粉末(打粉过 2 号筛)
约 0． 5 g，乙醚索氏提取 3 h 去油后，药渣置锥形瓶
中，10 倍量 10%乙醇超声提取 3 次，每次 40 min，离
心过滤，合并滤液并定容到 100 mL;过 0． 45 μm 微
孔滤膜，即得供试品溶液。
4 线性关系考察
精密吸取 0． 489 mg·mL －1的木兰花碱对照品溶
液 1，2，5 mL 分别定容至 10 mL，配制成 0． 048 9，
0. 097 8，0． 244 5 mg·mL －1系列木兰花碱对照品溶
液。吸取浓度为 0． 048 9 mg·mL －1的木兰花碱溶液
2，6，10 μL，浓度 0． 097 8 mg·mL －1溶液 8 和 10 μL，
浓度 0． 244 5 mg·mL －1溶液 5 μL注入高效液相色谱
仪，按“1”项条件测定，色谱图见图 1。以进样量
(X，μg)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标进行线性方
程回归，回归方程为:Y = 5． 00 × 109X + 6． 85 × 104
(r = 0． 999 7) ，木兰花碱在 0． 098 ～ 1． 223 μg线性关
系良好。
1 木兰花碱
图 1 木兰花碱对照品的 RP-HPLC图谱
5 精密度考察
吸取质量浓度为 0． 048 9 mg·mL －1的对照品溶
液 10 μL，连续进样 5 次，按“1”项条件测定，记录木
兰花碱峰面积，考察精密度。结果 RSD为 0． 23%。
6 稳定性考察
取巴豆(批号:20100420)供试品溶液，按“1”项
条件分别于 0，2，4，6，9，12，24 h 测定，记录峰面积，
考察稳定性。结果巴豆样品中木兰花碱峰面积的
RSD为 0． 15%，供试品溶液在 24 h内稳定。
7 重复性考察
分别精密称取 6 份巴豆(批号:20100420)样品
各 0． 5 g，按照“3”项方法制备供试品溶液，按“1”项
条件进行测定，记录木兰花碱面积，平均木兰花碱质
量分数为 0． 184%，RSD为 2． 2%。
8 加样回收率
精密取已知含量的同一批巴豆(批号:20101118)
样品 6 份约 0． 25 g，分别精密加入一定体积“2”项下
0． 489 mg·mL －1木兰花碱对照品溶液，按照“3”项方
法制备供试品溶液，按“1”项条件进行测定，计算木
兰花碱的回收率，结果见表 1。平均加样回收率为
99． 2%，RSD为 3． 2%(n = 6)。
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表 1 木兰花碱加样回收率 n = 6
取样量 / g 样品中量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD /%
0． 249 3 0． 437 8 0． 391 2 0． 815 9 96． 67 99． 18 3． 19
0． 250 2 0． 439 4 0． 391 2 0． 817 5 96． 68
0． 249 4 0． 437 9 0． 391 2 0． 823 6 98． 59
0． 249 6 0． 438 3 0． 489 0 0． 912 5 96． 98
0． 250 2 0． 439 4 0． 489 0 0． 938 3 102． 03
0． 250 6 0． 440 1 0． 489 0 0． 949 1 104． 10
9 样品含量测定
对 9 批次巴豆样品，每批平行操作 3 次，按照
“3”项下方法处理后，取供试品溶液及对照品溶液
各 10 μL，依“1”项下条件测定，样品 RP-HPLC 图谱
见图 2，图中峰 1 基于 DAV检测器的色谱峰纯度检
测为 99． 97%，记录木兰花碱峰面积并计算质量浓
度，结果见表 2。从表 2 可知，3 个主产区的木兰花
碱质量浓度有一定差异，以四川产的巴豆含量较高，
云南产含量相对较低，最高 1． 84 mg·g －1，最低 1． 27
mg·g －1，平均含量 1． 53 mg·g －1。
1 木兰花碱
图 2 巴豆样品的 RP-HPLC图
表 2 9 批次样品中木兰花碱含量 n = 3
编号 样品批号 产地 来源 质量浓度 mg·g － 1
1 20100419 四川万县 成都五块石药市 1． 76
2 20100420 四川宜宾 四川宜宾县观音镇 1． 84
3 20101118 四川 云南向辉生物 1． 76
4 20101130 四川 安徽亳州药市 1． 59
5 20101205 四川 安徽亳州中药材总公司 1． 34
6 20101201 云南 广西玉林国际中药港 1． 27
7 20101206 云南 安徽亳州中药材总公司 1． 27
8 20101122 广西 河北安国同利中药 1． 34
9 20101204 广西 安徽亳州中药材总公司 1． 59
讨 论
本研究对于巴豆中木兰花碱的提取，采用了正
交设计法优选了不同浓度乙醇、不同提取时间、提取
次数和不同料液比对提取的影响，优选出了 10 倍量
10%乙醇超声提取 3 次，每次 40 min，尽可能的提取
目标成分。
巴豆生物碱因其显著的抗肿瘤抗癌活性，越来
越受到学者们的重视，但是对其化学成分研究甚少，
对其成分含量测定方法作者更未见有关报道。本研
究旨在建立一种准确、快速、专属性强的巴豆中木兰
花碱测定方法，经方法学考察证明该方法可作为巴
豆药材的质量控制方法。通过对 9 个批次巴豆药材
的测定，不同产地巴豆中木兰花碱的含量有一定差
异，总体来说四川产巴豆含量较高，云南产巴豆含量
相对较低。
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编辑:韩培 /接受日期:
檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴檴
2013 － 02 － 20
(上接第 1756 页)
［ 参 考 文 献 ］
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编辑:周卓 /接受日期:2013 － 05 － 28