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［责任编辑 仝燕］
网络出版地址:http:/ / www. cnki. net / kcms / detail /11. 3495. R. 20110221. 1128. 000. html
［收稿日期］ 20101211(001)
［第一作者］ 马育彪，硕士研究生，从事中药新制剂的研究，Tel:028-84616653，E-mail:369273877@ qq. com
［通讯作者］ * 何宇新，博士，副教授，硕士研究生导师，从事中药新制剂新剂型研究，Tel:028-87725898，E-mail:heyuxin66@ 126. com
无患子皂苷的大孔吸附树脂分离纯化工艺
马育彪1，2，何宇新1* ，彭镰心2，吴金伟1，米之金1
(1. 西华大学生物工程学院，成都 610039;2. 成都大学，成都 610106)
［摘要］ 目的:筛选适合分离纯化无患子总皂苷的大孔吸附树脂并确立纯化工艺参数。方法:以大孔吸附树脂对常春藤
皂苷元保留率为考察指标，选用 4 种型号的大孔吸附树脂进行纯化。结果:最佳条件是采用 D-101 型大孔吸附树脂，洗脱乙醇
体积分数为 50%，乙醇用量为 5 BV。结论:D-101 树脂在所确定的工艺条件下，可较好地分离纯化无患子皂苷。
［关键词］ 无患子;常春藤皂苷;大孔树脂;分离纯化;高效液相色谱
［中图分类号］ R283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)08-0023-03
Study on Isolation and Purification of Saponin from Sapindaceae
with Macroporous Resin
MA Yu-biao1，2，HE Yu-xin1* ，PENG Lian-xin，WU Jin-wei1，MI Zhi-jin1
(1. Xihua University of Biological Engineering Department，Chengdu 610039，China;
2. Chengdu University，Chengdu Sichuan 610106，China)
［Abstract］ Objective:To screen the suitable resin for purification of saponin from sapindaceae and to
establish the optimum technological parameters of purification. Method:According to the retention rate of the
hederagenin，four types of macroporous resin were used to purify the saponin from sapindaceae. Result:The best
conditions was:D-101 of macroporous resin;the concentration of ethanol eluate was 50%;the usage of ethanol was
5 BV. Conclusion:D-101 of macroporous resin showed good capability of isolation and purification of saponin from
sapindaceae.
［Key words］ sapindaceae;hederagenin;macroporous resin;isolation and purification;HPLC
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第 17 卷第 8 期
2011 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 8
Apr.，2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.08.001
无患子属无患子科无患子 Sapindus mukorossi
Gaerth，俗称油患子、肥珠子等，其果皮中含有的皂
苷具有多方面的作用，如可作为天然表面活性物质
用于天然洗发香波及各种洁肤护肤化妆品［1］，有良
好的气泡去污作用［2］，还具有抗菌、消炎、抗病毒、杀
虫等［3-5］多种生物活性。本文通过对大孔吸附树脂
富集纯化无患子苷工艺条件参数的研究，进一步探
索其合理的分离纯化工艺流程。
1 材料
无患子果实购自四川省成都市西南药都，经西
华大学杨文宇讲师鉴定为无患子科植物无患子 S.
mukorossi 的种子。常春藤皂苷元对照品(中国药品
生物制品检定所，批号 111733-200603)。超纯水，乙
腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
岛津 LC-20 高效液相色谱仪(LC-20AB 溶剂输
出泵，CBM-20Alite 系统控制器，Prominence SIL-
20AC 自动进样器，CTO-20A 柱温箱，SPD-20AV UV-
VIS 检测器，LC Solution 工作站);BS200S 电子天平
(北京塞多利斯天平有限公司)。
2 方法与结果
2. 1 常春藤皂苷含量测定
2. 1. 1 色谱条件 UltimateTM XB-C18色谱柱(4. 6
mm × 250 mm，5 μm)，流动相乙腈-0. 05%磷酸(80 ∶
20)，检测波长 205 nm，流速 1. 0 mL·min － 1，进样量
10 μL，柱温 25 ℃。
2. 1. 2 对照品溶液的制备 精密称取常春藤皂苷
元对照品 14. 5 mg，置 25 mL 量瓶中，加甲醇溶解并
定容至刻度，摇匀，即得 0. 58 g·L － 1的对照品溶液。
2. 1. 3 线性关系考察 分别用标准溶液进样 6，8，
10，12，14 μL 进行测定，以峰面积为纵坐标，进样量
为横坐标绘制标准曲线。回归方程为 Y = 677 062X
+ 33 854(r = 0. 999 9)。表明常春藤皂苷苷在 3. 48
～ 8. 12 μg 线性关系很好。
2. 1. 4 供试品溶液的制备及测定 取样品溶液 1
mL，加甲醇 10 mL，75%盐酸 2 mL，加热回流 2 h，放
冷，加三氯甲烷萃取 2 次，每次 20 mL，合并三氯甲
烷层，蒸干，残渣用甲醇溶解并定至 10 mL 量瓶中，
摇匀，用微孔滤膜(0. 45 μm)过滤，即得供试品溶
液，分别精密吸取上述供试品溶液各 10 μL 注入色
谱仪，按上述色谱条件进行测定，计算常春藤皂
苷含量。
2. 2 吸附原液的制备 称取干燥药材适量，加水 8
图 1 无患子高效液相色谱
A. 对照品;B. 样品;1. 常春藤皂苷
倍量，提取 2 次，每次 1 h。考虑其吸水率为 85%，故
第 1 次提取前多加 0. 85 倍量的水，应加入 8. 85 倍
量的水。合并提取液，过滤，滤液浓缩定容(每 1 mL
滤液相当于 0. 5 g 药材)，作为吸附原液。
2. 3 吸附树脂的预处理 取市售树脂先用乙醇浸
泡溶胀 24 h，湿法装柱，用 95%乙醇洗脱，至流出液
加 5 倍量的纯水不变白色浑浊为止。再用大量的纯
水洗尽柱内乙醇，作为湿树脂，备用。
2. 4 洗脱率的计算 常春藤皂苷元洗脱率 = 乙醇
洗脱下的常春藤皂苷含量(mg)/上柱药液的常春藤
皂苷含量(mg)× 100%。
2. 5 吸附树脂的筛选 准确量取经预处理的 4 种
湿树脂 25 mL，湿法装柱。各上样 60 mL 原液，速度
0. 4 ～ 0. 5 mL·min － 1，然后以相同的速度依次用水和
50%乙醇洗脱(均至流出液无色)，收集乙醇洗脱
液，测定常春藤皂苷元含量，计算其提取率，确定树
脂类型。结果见表 1。
表 1 不同树脂类型的筛选
树脂类型 常春藤皂苷元的洗脱率 /%
D-100
D-101
AB-8
D-140
71. 09
81. 09
77. 28
65. 67
由表 4 可知，由上述试验结果可知:D-101 大孔
树脂分离纯化常春藤皂苷元提取率较高，故确定选
用 D-101 大孔树脂对无患子皂苷分离纯化工艺进行
研究。
2. 6 动态吸附试验
2. 6. 1 D-101 大孔树脂对常春藤皂苷元动态吸附
性能的考察 为了考察 D-101 大孔树脂对常春藤皂
苷元的动态吸附性能，确定 D-101 大孔树脂的样品
处理量，进行泄漏曲线的测定，取无患子水提取液，
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 8
Apr.，2011
加入 D-101 大孔树脂中，大孔树脂体积为 20 g，流速
控制为 2 BV·h － 1，分段收集，每收集 10 mL 立即测
定吸光度，共收集 900 mL，根据药液吸附流出体积
和流出液常春藤皂苷元质量浓度测定结果绘制泄漏
曲线，从而确定 D-101 大孔树脂的样品处理量。以
药液吸附流出体积为横坐标，以流出液常春藤皂苷
元浓度为纵坐标，绘制泄漏曲线，结果见图 2。由泄
漏曲线确定上样量为 3. 5 mL·g － 1(药液体积:树脂
质量)。
图 2 常春藤皂苷动态吸附泄漏曲线
2. 6. 2 洗脱剂的确定 本试验分别选择 40% 乙
醇，50%乙醇，60%乙醇作为洗脱剂，考察其吸附率，
结果常春藤皂苷元的解析率分别为 65. 75%，
78. 19%，73. 36%。50%乙醇的洗脱效果最好，洗脱
率达 78. 19%。因此确定选择 50 % 乙醇作为解
析剂。
2. 6. 3 洗脱液用量的考察 取吸附原液，上 D-101
大孔树脂中，先加水洗脱至基本无色，再用 50% 乙
醇洗脱，分段收集洗脱用乙醇，分别测定常春藤皂苷
元含量，直至洗脱液中几乎不含常春藤皂苷元为止，
以洗脱液乙醇用量为横坐标，收集液中常春藤皂苷
元的浓度为纵坐标绘制树脂解吸曲线，通过解吸曲
线确定洗脱剂乙醇用量，结果表明，乙醇用量为 5
BV 时，可基本将常春藤皂苷元洗脱下来，故确定洗
脱用乙醇量为 5 BV。结果见图 3。
图 3 常春藤皂苷树脂解析曲线
3 结论与讨论
本试验初步确定纯化最佳工艺为 D-101 大孔吸
附树脂纯化无患子中总皂苷成分，50% 乙醇，5 BV
量，2 BV·h － 1速度洗脱，收集。
饶厚曾等采用乙醇回流提取-正丁醇萃取分离
工艺［6 ］及微波萃取工艺［7 ］，魏凤玉等采用泡沫分
离法［8］得到了无患子皂苷，但存在所需溶剂量大，效
率低等问题。本试验采用水提取，大孔树脂分离纯
化无患子中总皂苷，提取分离效果较好，且成本较
低，适合工业放大生产。
文献中多用分光光度法测定总皂苷含量，本文
采用常春藤皂苷作为含量指标，采用高效液相色谱
法测定总皂苷含量，分离度良好。
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