全 文 ：第 3 0卷
2〕 )2年 2月
分析化学 (兀 N I XHU X AUE )来稿摘登
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第 2期
250
超声提取一分光光度法测定刺五加叶中总皂普含量
郭明全 宋凤瑞 陈貌连 刘志强 刘淑莹 `
(中国科学院长春应用化学研究所 ,长春 1 30 0 2 2 )
1 引 言
刺五加系人参同科属植物 , 具有类似人参的功效 。 近年来研究表明 : 刺五加 叶也具有较好的药理活性 , 对心血管系
统疾病疗效显著 。 总皂昔为其主要药理活性成分 , 已 发现有 近 20 种 。 由于分离刺 五加皂昔标准品 的困难 , 刺五加 总皂
昔含量测定目前尚无药典方法 , 文献报道的也仅有薄层扫描等方法 。 但薄层扫描法操作较繁琐且线性范 围窄 。 本文用
分光光度法测定了不同提取方法提取的刺五加叶总皂昔 ,得到较好的结果 , 并观察到用超声法提取刺五加叶总 皂昔并与
常规提取方法相 比 , 总皂昔提取率有显著提高 。
2 实验部分
2
.
1 仪器与材料 S a rt o ir o B P lZ l D精密电子天平 (北京塞多利斯天平有限公司 ) ;印 10 紫外 一可见分光光度计 (安捷伦上
海分析仪器有 限公司 ) ; CS F一 I A 超声波发生器 (上海超声 波仪器厂 ) 。
刺五加叶 ( 白山正茂药业有限公司提供 ) ;齐墩果酸标准品 (中国药品生物制品检定所 ) ; 香兰素 、浓硫酸 、 甲醇 、 乙 醇
均为分析纯 。 水为去离子水 。
2
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2 实验方法 ( l) 标 准溶液及试剂的配制 精密称取齐墩果酸 14 , 7 mg 置于 10 mL 容量瓶中 , 加 甲醇定容 , 则标准溶
液浓度为 1 47 砂L ;香兰素配成 8% 乙醇溶液 ;硫酸配成 72 % ( VI V) 溶液 。 ( 2) 样 品溶液制备 分别称取刺五加叶 ( 已粉
碎 )l 0 9 于 3 只 2。 】〕mL 烧瓶中 , 各加 以犯毗 印% 乙醇 , 分别按下面 3 种方法提取 : ( a) 超声提取 :提取两次 , 每次 30 而 n ;
( b) 热回流提取 :提取 2 次 , 每次 l h ; (c) 浸提 :印℃提取 2 次 ,每次 l h 。 分别合并两次提取液并浓缩至约 10 眺 , 再用 石
油醚萃取至石 油醚层几乎无色 ,将下层蒸干成固体物 ,精确称取适量 (如 50 mg )于 50 mL 容量瓶中 , 加水定容 , 然后用水
饱和正丁醉萃取 4 次 , 分别合并 4 次萃取的正丁醇层 , 减压蒸干 ,残渣以甲醇溶解 , 移人 50 诚 容量瓶中 , 用甲醇定容 , 摇
匀 , 备用 。 ( 3) 标准 曲线及样品分析方法 用微量注射器精密移取齐墩果酸标准品溶液 20 汕 、 4O 泌 、印 泌、 80 汕 、 10 汕 ,
分别置于小试管中 ,挥干溶剂 ,分别加人 8 %香 兰素 乙醇溶液 0 . 5 ` , 72 % ( VI V) 硫酸 5 m L , 摇匀后于 60 ℃恒温水浴加热
or nl in
,立即取出置冰水浴中冷却 巧 田 jn ,反应混合物供测试用 , 以溶剂代标准溶液的同样操作制备液为空 白 。 分析样 品
时 ,精密吸取 50 汕样品溶液于试管中 , 与标准溶液同样操作制备液供侧试用 ,随行试剂空白 。
3 结果与讨论
3
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1 方 法原理 因刺五加叶中含有近 20 种皂昔 , 且性质相近 ,其单体分离纯化极为 困难 。 若选单体皂昔作标准品测总
皂昔含量可能性不大 ,对比文献报道的 已知皂昔结构 , 发现它们的皂昔元只有 3 种 :齐墩果酸 、 去 甲基齐墩果酸 、 经 甲基
齐墩果酸 ,其中齐墩果酸标准 品有商品 出售 ,并且齐墩果酸与香兰素一浓硫酸能发生显色反应 , 本文正是基于这一原理 ,
通过侧定总皂昔水解产物中齐墩果酸的含量来测定刺五加叶总皂昔含量 (另两种皂昔元的显色反应已根据文献的薄层
扫描结果作了相应校正 ) 。
3
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2 测定波长 的选择 在印10 紫外可见分光光度计上作波长扫描 , 结果表明 :标准溶液及样品溶液与香兰素一浓硫酸反
应生成的混合物在 537 . s nm 均显示最大吸收 。 因此 , 选 537 . 7 nl 作测定波长 。
3
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3 工作曲线线性考察 在 537 . 5 lun 处 , 测定标准系列 , 在所测试浓度范围 5 . 4 一 27 . 0 n l gl L 内有 良好的线性关系 , 回归
方程为 : A = 24 .的 l9 c( 以)L + 0 . 07 76 , 相关系数 r 二 0 .哭刃 4 。
3
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4 加样回收率实验 分别取 3 种样品各两份 , 其中一份加人一定量的齐墩果酸标准品溶液 ,并依 2 . 2 操作测 定 ,重复
4 次 , 样品 a 、 b 、 c 回收率分别为 101 . 32 % 、 102 . 14 % 、 98 . 92 % , 相对标准偏差 RS D 分别为 1 . 6 % 、 2 . 3% 、 1 . 7 % 。
3
.
5 样品分析 按 2 . 2 处理与测定 3 种不同方法提取刺五加叶得到的 固体物中总皂昔 的含量 , 测定 3 次 , 样品 a( 超声
提取 ) , b( 回流提取 ) , 。 (浸提 )提取物中总皂昔含量分别为 18 . 59 % 、 17 .肠 % 、 巧 . 91 % ; 3 次测量的相对标准偏差分别为 1 .
5 %
、
2
.
0%
、
1
.
8%
。 从测量结果中可看出超声法的提取率显然高于其它两种常规提取法 。
3
. ` 显色稳定性实验 80 面 n 内间隔一定时间分别测定标准系列 2 的吸光度值及样品 a 的吸光度值 。 、 20 、 4o 、印 、 50 nr in
时 , 标准系列 2 的吸光度值分别为 0 . 3 3 2 、 0 . 3 3 7 、 0 . 3 3 5 、 0 . 3 3 2 、 0 . 3 3 9 ;样品 a 的吸光度值分别为 0 ` 4 6 、 0 . 4 5 9 、 0 .肠 5 、 0 . 46 1 、
0
.
46 2
。 从以上结果中可看出 , 在 so 面 n 内 ,显色基本稳定 。
2 0 0 1一 3一2O 收稿 ; 2X(] 1朋扔 接受
本文系吉林省科委重点发展项 目资助课题 ( No . l创尧℃3 10一 2)