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刺五加叶亚慢性经口毒性试验研究



全 文 :刺五加叶亚慢性经口毒性试验研究
张晶莹1,宋昕恬1,孙兰1,孟令仪1,白雪松2,*
(1.吉林省疾病预防控制中心,吉林长春 130062;2.吉林医药学院营养教研室,吉林吉林 132013)
摘 要:评价刺五加叶的食用安全性。根据《食品安全性毒理学评价程序和检验方法》对刺五加叶进行 90 d喂养试
验。Wistar大鼠 80只,分为 4组,雌雄各半,分别给予实验组刺五加叶 8.0、6.0、4.0 g/kg BW,对照组给予正常饲料。
90 d后各组动物生长发育情况良好,给予刺五加叶对大鼠体重、食物利用率无明显影响,血常规、肝功能、肾功能、脏
器系数等指标未见异常。刺五加叶对大鼠血液生化、血液学等指标无明显影响,未引起大鼠肝脏、肾脏等主要器官组
织形态学改变。
关键词:刺五加叶;亚慢性经口毒性试验;大鼠
Study on the Toxicity of Subchronic Oral of Acanthopanax Leaves
ZHANG Jing-ying1,SONG Xin-tian1,SUN Lan1,MENG Ling-yi1,BAI Xue-song2,*
(1. Jilin Provincial Center for Disease Control and Prevention,Changchun 130062,Jilin,China;
2. Department of Nutrition,Jilin Medical College,Jilin 132013,Jilin,China)
Abstract:To investigate the toxicity of Acanthopanax leaves on rats, on the basis of Technical Standards for
Testing ﹠Assessments of Food, a ninety days feeding study of Acanthopanax leaves was conducted, 80 rats
were randomly divided into 4 groups, and each group consisted of 10 males and 10 females. The experimental
group were given Acanthopanax leaves 8.0,6.0,4.0 g/kg BW for 90-days, control group received normal feed.
The result showed that, after the challenge of Acanthopanax leaves, for 90-days, we detect no abnormality of
animal growth and development, weight, and food efficiency. Also Acanthopanax leaves, there was no adverse
effect of liver function, kidney function, and organ coefficients. Acanthopanax leaves at above mentioned doses
causes no pathological changed in rats liver and kidney, and no changes in serum biological indexes.
Key words:Acanthopanax leaves; subchronic oral toxicity test; rats
食品研究与开发
Food Research And Development
2015年 12月
第 36卷第 24期基础研究
DOI:10.3969/j.issn.1005-6521.2015.24.011
作者简介:张晶莹(1978—),女(汉),主管医师,硕士,主要从事食品
毒理学研究。
*通信作者:白雪松(1978—),男(满),副教授,硕士,主要从事预防
医学。
刺五加[Acanthopanax senticocus(Rupr:et Maxim.)
Harms]系五加科植物[1],是我国北方地区常用的药材之
一,主要入药部位为干燥根及根茎,其茎、叶也具有药
理活性[2-3]作用。随着人们对于刺五加研究不断的深
入,刺五加叶中的多种有效活性成分不断被开发出
来,具有深入研究的价值。为了满足新资源食品评审
的要求,根据《食品安全性毒理学评价程序和检验方
法》对大鼠进行了 90 d喂养试验。
1 材料和方法
1.1 试剂与仪器
刺五加叶,粉末状:由五常北秀健康产业有限公
司提供;SYSMEX-XT1800i型五分类血球计数仪:日本
产;五分类试剂盒:由上海科华东菱诊断用品有限公
司提供;TBA-120FR全自动生化分析仪:日本东芝;生
化试剂盒:由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司
提供。
1.2 实验动物
健康 Wistar 大鼠,雌雄各 40 只,体重(70~85)g,
由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供,生产
许可证号:SCXK-(吉)2011-0004。本实验动物环境设
施合格证,吉动设字 10-1005,温度 20 ℃~22 ℃、湿度
43
55 %~65 %。
1.3 方法
动物购入后饲养 3 d,随机分为对照组及 3个受
试物组,每组雌雄各 10只。人体推荐量为每日 3.0 g,
即 3.0 g/60 kg BW,相当于 0.05 g/kg BW。最高剂量组以
成人日摄入量的 160倍计,即 8.0 g/kg BW,中剂量组
6.0 g/kg BW相当于成人摄入量的 120倍,低剂量组
4.0 g/kg BW,相当于成人摄入量的 80倍。将 3个试验
组受试物均匀掺入基础饲料中(采用逐渐扩大、充分
混匀、反复过筛的方法),含量依次为 10.0 %、8.0 %、
6.0 %。对照组喂饲正常基础饲料。大鼠饲料摄入量按
体重 8 %计算,由于高、中、低剂量组受试物的比例均
大于 5 %,故饲料中补充酪蛋白(由甘肃省临夏州华安
生物制品有限公司生产),具体方法如下:基础饲料蛋
白含量为 18.94 %,高剂量组样品占饲料比例 10.0 %,
超出最大规定量 5.0 %,则高剂量组饲料按 0.947 %比
例加入酪蛋白。中剂量组样品占饲料比例 8.0 %,超出
最大规定量 3.0 %,则中剂量组饲料按 0.568 %比例加
入酪蛋白;低剂量组样品占饲料比例 6.0 %,超出最大
规定量 1.0 %,则低剂量组饲料按 0.189 %的比例加入
酪蛋白。大鼠单笼喂养 90 d,自由饮食。
1.4 观察指标
1.4.1 一般观察指标
每天观察动物的表现、行为活动、中毒状况、死亡
情况。每周称一次体重、两次食物摄入量,计算食物周
利用率及总利用率。
1.4.2 血液学指标及血液生化指标
于试验中期尾静脉采血,进行血液学及血液生化
指标检测。血液学指标采用 SYSMEX-XT1800i进行检
测;血液生化指标采用 TBA-120FR全自动生化分析
仪进行检测:谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿
素(UREA)、肌酐(Cr)、血糖(Glu)、总蛋白(TP)、白蛋
白(Alb)、胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)。禁食 16 h后,于
试验第 91天称重,用 1 %戊巴比妥钠生理盐水溶液,
按 5.0 mL/kg BW腹腔注射麻醉后,下腔静脉采血,进
行血液学及血液生化指标检测。
1.4.3 病理检查
第 91 天进行大体解剖,组织病理检查(肝、肾、
脾、胃、十二指肠、睾丸或卵巢)。
1.5 数据统计
采用单因素方差分析,方差齐时,各组间两两比较
用 LSD方法,不齐时,各组间两两比较采用 Tamhane’s
方法。所有数据的统计处理均采用 SPSS11.5统计软件
进行。
2 实验结果
2.1 一般观察情况
整个实验过程中动物无死亡,无异常行为表现。
3个剂量组所有试验组动物在实验期内毛发光泽、黏膜
红润,活动自如,排泄物无异常,生长发育正常,体重、
进食量、食物利用率与对照组相比均无差异(P>0.05)。
2.2 血液学指标
90 d喂养试验中期和末期大鼠血常规检验结果
表明,各剂量组动物的白细胞(WBC)、淋巴细胞(LY)、
单核细胞(MO)和分叶细胞(GR)、红细胞(RBC)、血红
蛋白(Hgb)各项指标结果均在正常范围内,与对照组
比较无统计学差异(P>0.05)。
2.3 生化指标
由表 1、2可见,试验末期雄性高剂量组 ALb与对
照组比较,有统计学差异(P<0.05);雄性中剂量组 TG
与对照组比较,有统计学差异(P<0.05);雌性中剂量组
ALT与对照组比较,有统计学差异(P<0.05),但在本实
验室历史正常值范围内,其余各剂量组各项血液生化
指标试验中期及末期 ALT、AST、BUN、CR、GLU、TP、
ALB、CHO、TG与对照组比较,无统计学差异(P>0.05)。
表 1 刺五加叶 90 d喂养试验中期生化检测结果
Table 1 Acanthopanax leaves mid 90 d feeding study biochemical test results
性别 剂量组 动物数
ALT/
(U/L)
AST/
(U/L)
BUN/
(mmol/L)
Cr/
(μmol/L)
Glu/
(mmol/L)
TP/
(g/L)
Alb/
(g/L)
TC/
(mmol/L)
TG/
(mmol/L)
雄 对照 10 30.3±3.5 91.4±8.2 6.00±0.89 57.9±3.5 6.30±0.76 57.9±2.2 33.8±1.7 1.87±0.16 0.56±0.08
高剂量 10 31.1±4.2 94.4±6.7 6.09±0.71 58.8±3.7 6.53±0.51 57.8±3.0 33.3±1.9 1.92±0.13 0.59±0.09
中剂量 10 30.2±4.6 94.1±7.5 6.21±0.92 57.6±2.8 6.21±0.96 56.7±3.1 33.0±1.4 1.86±0.14 0.57±0.10
低剂量 10 29.9±4.8 90.5±5.8 6.10±0.98 58.4±3.6 6.24±1.03 57.8±3.2 33.1±1.5 1.89±0.16 0.60±0.11
雌 对照 10 25.4±2.4 87.7±7.7 5.49±0.84 56.6±2.14 5.57±0.64 56.0±3.2 32.3±1.7 1.80±0.17 0.51±0.07
高剂量 10 25.5±2.9 85.2±7.8 5.27±0.71 54.6±2.6 5.53±0.64 56.8±4.3 32.1±2.5 1.83±0.14 0.52±0.08
中剂量 10 26.2±3.6 87.2±8.6 5.34±0.57 56.5±3.3 5.69±0.63 55.9±2.5 31.5±2.1 1.86±0.14 0.53±0.08
低剂量 10 26.1±3.5 85.6±6.1 5.60±0.81 55.9±3.1 5.33±0.62 55.6±3.5 31.9±2.1 1.81±0.13 0.52±0.08
张晶莹,等:刺五加叶亚慢性经口毒性试验研究 基础研究
44
性别 剂量组 动物数
ALT/
(U/L)
AST/
(U/L)
BUN/
(mmol/L)
Cr/
(μmol/L)
Glu/
(mmol/L)
TP/
(g/L)
Alb/
(g/L)
TC/
(mmol/L)
TG/
(mmol/L)
雄 对照 10 32.0±5.3 98.4±11.2 6.66±1.22 62.0±5.0 6.86±1.14 60.4±4.6 34.6±2.0 2.10±0.14 0.65±0.08
高剂量 10 34.3±4.1 106.4±12.7 7.04±0.83 65.7±4.1 7.39±1.73 62.6±2.5 37.0±2.1* 2.19±0.19 0.71±0.11
中剂量 10 33.5±5.2 103.5±8.5 6.98±0.97 63.1±0.46 7.18±1.44 63.7±4.8 36.0±2.7 2.07±0.23 0.75±0.09*
低剂量 10 34.9±4.4 102.8±6.9 6.76±0.96 64.3±5.1 7.40±1.42 61.8±5.0 36.4±3.1 2.23±0.19 0.68±0.06
雌 对照 10 28.1±4.9 90.8±9.5 6.01±0.73 58.1±6.9 6.08±1.15 57.9±4.9 34.0±3.0 1.95±0.15 0.60±0.09
高剂量 10 31.0±5.2 95.9±7.1 6.42±0.84 60.5±6.4 6.51±1.09 60.9±5.2 35.8±3.2 2.07±0.12 0.66±0.94
中剂量 10 32.4±3.0* 92.7±10.5 6.49±0.70 59.1±6.6 6.35±1.10 59.8±6.7 36.4±2.0 2.07±0.14 0.67±0.10
低剂量 10 29.2±4.4 94.4±10.1 6.28±1.12 58.9±5.8 6.23±1.42 58.6±5.7 35.5±2.8 2.03±0.12 0.60±0.13
2.4 病理学检查
刺五加叶 90 d喂养试验病理学检查结果见图 1。
切片镜检,肝脏:呈暗红色,质软,表面光滑、平
整,未见隆起及包块。镜下所见:对照组雌性 2例,雄
性 1例,高剂量组雌性 1例,雄性 1例可见肝小叶点状
坏死;对照组雌性 2例,雄性 3例,高剂量组雌性 1例,
雄性 3例可见肝小叶炎细胞浸润;其余被膜完整,无明
显异常病理改变。脾:镜下所见:高剂量组脾脏与对照
组比较,无明显差异。可清楚看到脾脏实质的红髓、白
髓及边缘区三部分,被膜及脾小梁未见纤维结缔组织
增生,淋巴滤泡未见反应性增生。肾脏:高剂量组与对
照组双侧肾脏等大似豆形,表面光滑平整,未见明显
增大与缩小。镜下观察:肾被膜光滑,肾小球在切片上
呈圆形,肾皮质区肾小球未见明显增大或萎缩、纤维
化、变性等,毛细血管袢未见坏死,肾小球毛细血管未
见扩张充血、管壁未见增厚。小管上皮完好,间质无炎
细胞浸润,为正常肾脏组织结构。其余动物肾脏一般
结构均未发现异常改变。胃:镜下主要观察胃黏膜。对
照组雌性 1例,雄性 2例,高剂量组雌性 2例,雄性 1
例可见胃固有层内少量嗜酸粒细胞浸润;余为正常胃
黏膜结构。十二指肠:镜下主要观察黏膜,高剂量组与
对照组十二指肠黏膜表面可见大小不一的肠黏膜,呈
叶片状,黏膜上皮呈高柱状,可见十二指肠肠腺,各层
结构的细胞未见异常,高剂量的十二指肠结构与对照
组比较无明显差异。睾丸:镜下观察:高剂量组与对照
表 2 刺五加叶 90 d喂养试验末期生化检测结果
Table 2 Acanthopanax leaves end 90 d feeding study biochemical test results
(A)高剂量组肝脏(a)对照组肝脏
(B)高剂量组脾脏(b)对照组脾脏
(C)高剂量组肾脏(c)对照组肾脏
(D)高剂量组胃(d)对照组胃
(E)高剂量组卵巢(e)对照组卵巢
(F)高剂量组睾丸(f)对照组睾丸
图 1 刺五加叶 90 d喂养试验病理学检查结果
Fig.1 Acanthopanax leaves 90 d feeding study pathology results
张晶莹,等:刺五加叶亚慢性经口毒性试验研究基础研究
45
组睾丸曲细精管结构清晰,各级生精细胞形态正常,
精子细胞清晰可见,支持细胞未见异常。睾丸间质未
见出血、坏死、钙化或精子肉芽肿形成。曲细精管内可
见精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞
和精子,为正常睾丸组织结构。卵巢:镜下观察:高剂
量组与对照组卵巢表面为扁平或立方细胞,皮质层内
可见许多发育不同阶段的卵泡,卵泡间为结缔组织,
髓质区由结缔组织组成,含较多血管,高剂量组的卵
巢与对照组相似,未见异常。
3 结论与讨论
近年来,随着刺五加叶的相关报道不断增多,对
刺五加叶中的化学成分和药理活性具有了较好的研
究[4-5],但对其安全性评价方面较少。本次研究,给予不
同剂量的刺五加叶进行 90 d喂养试验,期间动物的全
身情况良好,活动正常,无口鼻出血情况、拒食和其它
异常行为,生长发育良好。对体重、食物利用率均未见
明显影响。在实验中期、末期对大鼠血液学、肝肾功能
等指标进行了检测,均无明显影响。组织病理学检查
显示,除有少许常见自发病变,肝、肾、脾、胃、十二指
肠、睾丸、卵巢等主要器官无组织形态结构损伤,均未
观察到与喂养刺五加叶有关的组织病理学改变。为刺
五加叶进入新资源食品提供理论依据和参考品。
参考文献:
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收稿日期:2014-07-18
猪肉用复配嫩化剂配方的响应面优化
王绍顺1,张宁2,李静2,关拉力1,张冬冬1,钟莉1,阮美娟2,李文钊2,*
(1.中海油能源发展股份有限公司配餐服务分公司,天津 300452;2.天津科技大学食品工程与生物技术
学院,天津 300457)
摘 要:以熟制的猪里脊的嫩度、感官品质、维生素 B1含量为检测指标,通过计算权重得到影响肉品品质的综合指
数。在 Plackett Burman筛选、最陡爬坡试验的基础上,采用响应面试验优化复合嫩化剂配方。使用 Design Expert软件
对模型进行优化,以最高综合指数为优化目标,得到复合嫩化剂配方为:淀粉 13.70 %、食盐 1.2 %、柠檬酸 0.03 %、生
姜粉 0.54 %、木瓜蛋白酶 25 U/g。
关键词:嫩化;猪肉;嫩化剂;优化
The Response Surface Method Optimization of Pork Composite Tenderizer
WANG Shao-shun1,ZHANG Ning2,LI Jing2,GUAN La-li1,ZHANG Dong-dong1,
ZHONG Li1,RUAN Mei-juan2,LI Wen-zhao2,*
(1. Catering Services Branch,China National Offshore Oil Corporation(CNOOC)Energy Development Limited
by Share Ltd,Tianjin 300452,China;2. School of Food Engineering and Biological Technology,Tianjin
University of Science & Technology,Tianjin 300457,China)
Abstract:The comprehensive index affecting meat quality was acquired by weighting calculation based on
食品研究与开发
Food Research And Development
2015年 12月
第 36卷第 24期
DOI:10.3969/j.issn.1005-6521.2015.24.012
作者简介:王绍顺(1979—),男(汉),经济师,本科,研究方向:海上石油营养配餐安全作业生产管理。
*通信作者
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基础研究
46