全 文 ：dib le fungi2011（3）
注：表中数据为 3 次重复的平均值。
表 4 初始 pH 值对桑黄菌丝干重的影响
注：表中数据为 3 次重复的平均值。
丝产量最高，即最适起始 pH 为 6.5。
2.2 发酵罐培养初步试验 依据摇瓶发酵条件优化试验筛
选的最适条件初始 pH 6.5，接种量为 10%，装液量为 100 mL/
300 mL 三角瓶，旋转频率为 150 r/min，摆振幅度 Φ26（mm），
28℃恒温培养 7 d，进行了 10 L 发酵罐液体培养的初步试验，
试验重复 3 次，干菌丝产量（12.20±0.02） g /L 发酵液。
3 讨 论
3.1 通过试验得出桑黄菌最适发酵条件是初始 pH 6.5，接种量
为 10%，装液量为 100mL/300mL三角瓶，旋转频率为 150 r/min，
摆振幅度 Φ26 mm，28℃恒温培养 7 d，干菌丝体产量 12.51 g /L
发酵液。
3.2 试验发现桑黄菌具有限氧生长的生物学特性，发酵过程中
通气状况对菌丝的生长影响很大， 而装液量的多少将直接影响
培养基的通气状况。若装液量过小则通气量太大，菌丝会生长缓
慢，通气量过小，菌丝体生长需要的基本通气量不能保证，反而
影响菌球数量，使菌丝干重减少。 因此，桑黄菌深层液体发酵生
产菌丝体过程中对通气量的控制非常重要，直接影响生物产量。
3.3 10 L 发酵罐初步放大试验结果表明：桑黄菌发酵工艺是
装液量 60%，接种量 10%，温度 28℃，搅拌速度为 150 r/min，
通气量每分钟 1∶0.5（V∶V），培养时间 7 d，产量稳定，平均菌丝
干重 12.20 g/L。
参考文献
[1] 卯晓岚 .中国大型真菌 [M].河南 ：河南科技出版社 ，2000：465-
468，477.
[2] 黄年来.中国最有开发前景的主要药用真菌[J].食用菌，2005（1）：
38-42.
[3] 张万国.桑黄抗肝纤维化及其作用机理的研究[D].上海：第二军
医大学，2002.
表 3 培养时间对桑黄菌菌丝干重的影响
培养时间 /d 菌丝干重/（g·L-1）
显著水平
0.05 0.01
7 12.22 a A
8 12.01 b B
9 11.98 bc BC
10 11.96 c C
6 10.73 d D
5 10.00 e E
初始 pH值 菌丝干重/（g·L-1）
显著水平
0.05 0.01
6.5 12.51 a A
5.5 9.26 b B
7.5 9.24 b B
4.5 7.24 c C
8.5 7.19 d D
双孢蘑菇 [Agaricus bisporus（Lange）Singer]，简称蘑菇 [1]，
是世界上栽培历史最悠久、栽培面积最大、消费人群最广的菇
种之一。双孢蘑菇栽培发展较快。目前采用的多为固体菌种发
菌，菌种菌丝生长较弱，制备需时长，接种后发菌慢和生产周
期长，需投入大量的人力、物力、财力，栽培管理的难度大，生
物学转化率低。而利用液体菌种发酵培养菌丝体，具有菌种菌
丝生长快，纯度高，接入培养料后菌丝萌发快，污染少，生产周
期短，可以进行大规模产业化生产的特点。而目前对液体菌种
发酵研究不够深入， 为使双孢蘑菇液体发酵能够达到最佳效
益，还需要进行深入细致研究。研究通过单因子试验，对碳源、
氮源进行优化， 再通过正交试验进一步筛选出适合双孢蘑菇
菌丝生长的液体培养基配方， 旨在为双孢蘑菇液体菌种的生
产提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 供试材料 ①双孢蘑菇菌种：双孢蘑菇由吉林农业科技
学院食用菌实验室提供。 ②主要仪器：LRH-250 型生化培养
箱： 上海一恒科学仪器有限公司；SW-CJ-2FD 型双人单面净
化工作台：苏州净化设备有限公司；HYG-A 型摇床：江苏省太
仓市实验设备厂；LDZB-75B 型高压蒸汽灭菌器：上海申安医
疗器械厂；FA1004A 型电子天平： 上海精天电子仪器有限公
司；DHG-9240A 型电热鼓风干燥箱。 试剂：尿素（99%）、硝酸
铵（99%）、硫酸铵（99%）、蛋白胨（86%）、葡萄糖（99.9%）、蔗
糖 （99.9%）、麦芽糖 （99.9%）、山梨醇 （99.9% ）、可溶性淀粉
（98%）。 ③培养基：a.菌种活化培养基，马铃薯 20%，葡萄糖
2%，琼脂 2%，KH2PO4 0.1%，MgSO4·7H2O 0.1%，pH 值自然。液
双 孢 蘑 菇 液 体 培 养 基 的 优 化 研 究
王广耀 佟 彤 *
（吉林农业科技学院生物工程学院，吉林 132101）
摘 要 对不同碳、氮源对双孢蘑菇液体发酵菌丝体生物量影
响进行研究。单因子试验筛选出的最佳的碳源、氮源分别为蔗糖
和蛋白胨，通过正交试验进一步确定碳源、氮源以及无机盐的最
佳组合为：蔗糖 3.0%，蛋白胨 1.5%，MgSO4 0.1%，KH2PO4 0.1%。
关键词 双孢薪菇 菌丝生物量 液体发酵 碳源 氮源
文章编号 1000-8357（2011）03-0011-02
收稿日期：2010-11-27 一稿；2011-03-03 修改稿。
* 吉林农业科技学院生物工程学院 09 生物技术专升本学生。
e-mail：a1359624@163.com
深 层 发 酵
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dib le fungi 2011（3）
本刊常用计量单位符号
1 时间：d（天）、h（小时）、min（分）、s（秒）
2 长度：m（米）、cm（厘米）、mm（毫米）
3 面积：m2（平方米）、667 m2（亩）、hm2（公顷）
4 体积：m3（立方米）、L（升）、mL（毫升）
5 质量：t（吨）、kg（公斤）、g（克）、mg（毫克）
6 浓度：mg/L、mg/kg（ppm , 1×10-6）
体种子初培养基 ，马铃薯 20%，葡萄糖 2%，蛋白胨 0.5%，
MgSO4·7H2O 0.1%，KH2PO4 0.1%，pH 值自然。
1.2 碳、氮源供试培养基 碳源培养基：马铃薯 20%，葡萄糖
2%，KH2PO4 0.1%，MgSO4·7H2O 0.1%，以等量的蔗糖、麦芽糖、
玉米粉、山梨醇、可溶性淀粉代替碳源培养基中的葡萄糖。
氮源培养基： 马铃薯 20%， 蛋白胨 0.5%，KH2PO4 0.1%，
MgSO4·7H2O 0.1%，以等量的黄豆粉、麸皮、尿素、硝酸铵、硫
酸铵代替氮源培养基中的蛋白胨。
玉米粉、黄豆粉、麸皮均煮汁，4 层纱布过滤。
1.3 试验方法
1.3.1 供试菌种活化 在无菌条件下， 用接种耙从双孢蘑菇
试管菌种上切取大米粒大小的菌种块接种到试管菌种活化培
养基中央，25℃培养 15 d。
1.3.2 液体培养
1.3.2.1 液体菌种制备 250 mL三角瓶装供试培养基 100 mL，
1.47×105 Pa 灭菌 30 min，冷却后，在无菌条件下将活化斜面
菌种接到液体培养基中， 每支斜面试管接 2 瓶，25 ℃下静置
24 h，再置于 150 r/min 全温摇床中，25 ℃培养 7 d，得液体菌
种。
1.3.2.2 液体培养 液体菌种以 5%的接种量转接装有液体
培养基的新摇瓶，直接放在全温摇床中，25℃培养 5 d。
1.3.3 生物量的测定 发酵液过 40 目过筛，菌丝体经蒸馏水
充分洗涤，80℃真空干燥至恒重，电子天平准确称重。
1.3.4 正交试验 根据试验中碳、 氮源单因素试验的结果，
选择较好的碳、氮源各一个和 MgSO4、 KH2PO4，设计 L9（34）正
交试验，配制 9 种培养基，每个试验组 3 次重复，取平均值，正
交试验的因素和水平见表 1。
2 结果与分析
2.1 不同碳源液体培养基中双孢蘑菇菌丝体生物量 由图 1
可知，在以蔗糖作碳源的液体培养基中，菌丝生物量最高，葡
萄糖次之，玉米粉最小。 选择蔗糖作为碳源进行正交试验。
2.2 不同氮源液体培养基中双孢蘑菇菌丝生物量的影响 从
图2可以看出，以蛋白胨作为氮源时，菌丝生物量最高，黄豆粉
次之，硝酸铵最小。 因此，选择蛋白胨作为氮源进行正交试验。
2.3 碳、氮源的正交试验 由表 2 的结果可以看出，各因素
的极差次序为蔗糖>蛋白胨> KH2PO4>MgSO4， 说明培养液中
蔗糖浓度对生物量影响最大，蛋白胨次之，而 MgSO4 影响最
小。 最适合培养基组合为 A3B2C3D3，即蔗糖 3.0%，蛋白胨 1%，
MgSO4 0.3%，KH2PO3 0.3%。使用此优化培养基进行验证试验，
菌丝生物量达到 2.072 g/100 mL。
3 结 论
根据液体培养基的原则和方法，采用单因子试验，优选出
适合双孢蘑菇液体培养的碳源是蔗糖，氮源是蛋白胨。
通过正交试验确定培养基最佳组合为：蔗糖 3.0%，蛋白
胨 1%，MgSO4 0.3%，KH2PO4 0.3%。
参考文献
[1] 毕志树，陈国良，黄年来，等.中国食用菌志[M].北京：中国林业出
版社，1991：173.
[2] 陈德明，黄建春.食用菌生产技术手册[M].上海：上海科学技术出
版社，2001：149.
表 1 正交试验的因素和水平
水平
A
蔗糖/%
B
蛋白胨/%
C
MgSO4/%
D
KH2PO4/%
1 1 0.5 0.1 0.1
2 2 1 0.2 0.2
3 3 1.5 0.3 0.3
图 1 不同碳源对双孢蘑菇菌丝生物量的影响
菌
丝
生
物
量
/（
g·
10
0
m
L-
1 ）
碳源
图 2 不同氮源对双孢菇菌丝生物量的影响
菌
丝
生
物
量
/（
g·
10
0
m
L-
1 ）
氮源
深 层 发 酵
葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 淀粉 玉米粉 山梨醇
2.0
1.5
1.0
0.5
0
1.302 1.290
1.663
1.142
0.315
0.52
黄豆粉 蛋白胨 麦麸 尿素 硝酸铵 硫酸铵
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0.631
0.774
0.334
0.223 0.204 0.230
表 2 双孢蘑菇配方正交试验表
序号 A B C D 生物量/（g·100 mL-1）
1 1 1 1 1 1.479
2 1 2 2 2 1.563
3 1 3 3 3 1.590
4 2 1 2 3 1.653
5 2 2 3 1 1.698
6 2 3 1 2 1.768
7 3 1 3 2 1.816
8 3 2 1 3 1.965
9 3 3 2 1 1.801
K1 4.632 4.948 5.017 4.978
K2 5.029 5.226 5.017 5.147
K3 5.582 5.159 5.104 5.208
R 0.317 0.093 0.029 0.077
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