全 文 ：表 3 方差分析结果
方差来源 离均差平方和 自由度 方差 F值 显著性
A 1． 535 2 0． 768 264． 83 ＊＊
B 0． 180 2 0． 090 31． 03 ＊＊
C 0． 003 2 0． 001 5 0． 52
D 0． 646 2 0． 323 111． 38 ＊＊
SSe2 0． 052 18 0． 002 9
注:F0． 05(2，18)= 3． 55，* P ＜ 0． 05;F0． 01(2，18)= 6． 01，＊＊P ＜
0． 01。
结构的薯蓣皂苷元作为定量检测龙葵甾体皂苷的对照品，测
定龙葵总皂苷的量，并以此为指标考察正交法优选提取龙葵
总皂苷的工艺，获得最佳工艺参数为 A2B2C1D2，即以 65%乙
醇为溶剂，溶剂用量 10 倍，提取温度 40 ℃，提取时间 40
min。
建立的香草醛-高氯酸显色定量测定龙葵总皂苷的分光
光度法，操作简便、精密度高、稳定性好，可用于准确地测定
龙葵中甾体类总皂苷的量。
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高效液相色谱法同时测定豨莶草中豨莶苷和奇壬醇
许凤清， 刘金旗* ， 王举涛， 黄金萍， 张 娟
(安徽中医学院药学院 /安徽省中药研究与开发重点实验室，安徽 合肥 230038)
收稿日期:2010-08-31
作者简介:许凤清(1979—) ，女，硕士，讲师，从事中药化学成分分离分析。E-mail:qingfx@ eyou． com
* 通信作者:刘金旗，教授，从事天然药物化学成分研究。Tel:(0551)5169227
摘要:目的 建立同时测定豨莶草中豨莶苷和奇壬醇的 HPLC分析方法。方法 色谱条件为 Phenomenex-C18柱(4． 6 mm
× 250 mm，5 μm) ，流动相:乙腈-甲醇-0． 05 mol /L KH2PO4(24 ∶ 6 ∶ 70) ，体积流量 1． 0 mL /min，检测波长 215 nm，柱温 30
℃。结果 豨莶苷在 0． 168 ～ 1． 68 μg(r = 0． 999 8)范围内、奇壬醇在 0． 266 ～ 2． 66 μg(r = 0． 999 9)范围内线性关系良
好，豨莶苷和奇壬醇平均回收率分别为 98． 44%、100． 58%，RSD分别为 2． 27%、2． 42%。结论 本法简便，准确，灵敏度
高，重现性好，可用于该药材及其制剂原料中豨莶苷和奇壬醇的同时测定。
关键词:豨莶草;豨莶苷;奇壬醇;HPLC
中图分类号:R284． 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2011)08-1444-03
豨莶草为常用中药，始载于唐代《新修本草》，《中国药
典》2010 年版收载菊科植物豨莶 Siegesbeckia orientalis L．、腺
梗豨莶 Siegesbeckia pubescens Makino．和毛梗豨莶 Siegesbeckia
glabrescens Makino．的地上干燥部分，具有祛风湿，利筋骨的
功能。临床上主要用于风湿痹痛、腰膝酸软、四肢麻痹、半身
不遂、风疹湿疮等症。近年来研究发现豨莶草在心血管系
统、抗炎、降压扩张血管、微循环系统、免疫系统以及抗早孕
方面均显示良好的活性［1-7］。其主要成分为二萜类化合物，
包括豨莶苷、奇壬醇、豨莶苷元、豨莶萜内酯等［8］，总萜类成
分定量测定采用紫外分光光度法［9］。目前，奇壬醇作为其定
量检测标准［10］，本实验通过 HPLC 法检测豨莶草中另一主
要活性物质豨莶苷来完善豨莶草的质量控制。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 高效液相色谱仪(岛津 LC-20AT) ;SPD-20A 紫
外检测器;N2010 色谱工作站;AS3120 型超声清洗器(Auto-
science公司) ;CP2115D电子天平(Sartorius公司)。
1． 2 试药 豨莶苷对照品(由安徽中医学院药学院天然药
化教研室［11］自制) ;奇壬醇对照品(中国药品生物制品检定
所 111726-200601) ;乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余
试剂均为分析纯。豨莶草分别收集和采购于安徽省各不同
中药材产地，由安徽中医学院中药资源教研室刘守金教授鉴
定。
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2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱为 Phenomenex C18柱(250 mm × 4． 6
mm，5 μm) ;流动相:乙腈-甲醇-0． 05 mol /L磷酸二氢钾水溶
液(24 ∶ 6 ∶ 70) ;体积流量:1． 0 mL /min;柱温:30 ℃;检测波
长:215 nm;进样量:20 μL。该色谱条件下豨莶苷、奇壬醇达
到基线分离，色谱图见图 1。
图 1 对照品(A)和亳州饮片厂豨莶草(B)HLPC图谱
1．奇壬醇 2．豨莶苷
2． 2 对照品溶液的制备 精密称取豨莶苷、奇壬醇对照品
1． 68 mg、2． 66 mg，分别置于 10 mL 量瓶，加甲醇稀释至刻
度，摇匀，分别精密吸取 5． 0 mL对照品溶液，置 10 mL量瓶，
甲醇稀释至刻度，得混合对照品溶液。豨莶苷质量浓度为
84 μg /mL，奇壬醇质量浓度为 133 μg /mL。
2． 3 供试品溶液的制备［12］ 精密称取豨莶草粉末 1 g，置
索氏提取器，加沸程 60 ～ 90 ℃的石油醚浸泡过夜，连续回流
5 h，冷却，取出滤纸筒，挥尽石油醚，转移到 100 mL 的烧瓶，
精密加入甲醇 50 mL，称质量，加热回流 2 h，放置至室温，再
次称质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，0． 45 μm微孔滤膜
滤过，续滤液作为供试品试液。
2． 4 线性关系考察 精密移取豨莶苷和奇壬醇混合对照品
贮备液 1、2、4、8、10、20 μL，按 2． 1 项色谱条件进行测定，记
录峰面积，以对照品进样质量 X(μg)为横坐标，峰面积 Y 为
纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。得豨莶苷回归方程
为 Y = 843 867X － 34 778，r = 0． 999 8，在 0． 084 ～ 1． 68 μg 范
围内呈良好的线 性 关 系;奇 壬 醇 回 归 方 程 为 Y =
1 615 648X + 8 592，r = 0． 999 9，在 0． 133 ～ 2． 66 μg 范围内
呈良好的线性关系。
2． 5 精密度试验 按 2． 3 项下方法制备的供试品溶液(亳
州饮片厂)重复进样 6 次，记录峰面积，测定豨莶苷、奇壬醇，
RSD值分别为 1． 20%、1． 05%，表明仪器精密度良好。
2． 6 稳定性试验考察 取豨莶草样品(亳州饮片厂)供试
品溶液，分别在 0、2、4、6、8、12 h 进样，按上述条件测定，记
录峰面积，测定豨莶苷、奇壬醇，RSD 分别为 1． 52%、
1． 64%，说明样品在 12 h内稳定。
2． 7 重复性试验 取豨莶草样品(亳州饮片厂) ，精密称定
6 份，置索氏提取器中，按照 2． 3 项下操作，测定豨莶苷、奇
壬醇，RSD 值分别为 1． 82%、2． 03%，表明方法的重复性较
好。
2． 8 加样回收试验 取已知豨莶苷和奇壬醇质量分数(分
别为 0． 357%、0． 053%)的亳州饮片厂豨莶草 0． 5 g，精密称
定。按照 2． 3 项下方法脱脂后，每 3 份为 1 组分别加入
80%、100%、120%量的豨莶苷和奇壬醇对照品后，按 2． 3 项
下方法制备供试品溶液，按上述的色谱条件测定，记录峰面
积，计算豨莶苷、奇壬醇的平均回收率和 RSD 分别为
98． 44%，2． 27%和 100． 58%，2． 42%。结果见表 1。
表 1 豨莶苷、奇壬醇加样回收试验结果 (n =9)
样品量 / g
豨莶苷
样品量 /mg 添加量 /mg 测得量 /mg 回收率 /%
奇壬醇
样品量 /mg 添加量 /mg 测得量 /mg 回收率 /%
0． 501 09 1． 788 9 1． 444 0 3． 169 3 95． 60 0． 265 6 0． 211 2 0． 479 4 101． 23
0． 504 78 1． 802 1 1． 444 0 3． 206 7 97． 27 0． 267 5 0． 211 2 0． 470 3 96． 02
0． 502 17 1． 792 8 1． 444 0 3． 230 1 99． 53 0． 266 2 0． 211 2 0． 483 2 102． 75
0． 501 31 1． 789 7 1． 805 0 3． 571 8 98． 73 0． 265 7 0． 264 0 0． 539 8 103． 84
0． 510 98 1． 788 5 1． 805 0 3． 639 4 102． 54 0． 265 5 0． 264 0 0． 524 3 98． 02
0． 503 76 1． 798 4 1． 805 0 3． 885 8 98． 06 0． 267 0 0． 264 0 0． 524 0 101． 15
0． 500 04 1． 785 1 2． 166 0 3． 872 1 96． 98 0． 265 0 0． 316 8 0． 584 2 100． 74
0． 499 84 1． 784 4 2． 166 0 3． 842 5 96． 39 0． 264 9 0． 316 8 0． 579 6 99． 34
0． 503 15 1． 796 3 2． 166 0 3． 981 4 100． 88 0． 266 7 0． 316 8 0． 590 3 102． 17
平均值 98． 44 100． 58
RSD /% 2． 27 2． 42
2． 9 样品测定 按 2． 3 项下方法制备样品溶液，分别进样
检测，并记录豨莶苷和奇壬醇峰面积，经计算，结果见表 2。
3 讨论
3． 1 在样品处理的过程中，程志宏等［12］曾采用石油醚脱脂
法处理豨莶草叶片中大量叶绿素，取得较好的效果;豨莶苷
分离工作中发现豨莶草中富含大量的盐，且豨莶苷在甲醇中
的溶解度不佳，本实验采用的样品处理方法达到 HPLC 样品
处理要求。同时考察了甲醇-水，乙腈-水，甲醇-磷酸盐，乙
腈-磷酸盐溶液等流动相，最终确定乙腈-甲醇-0． 05 mol /L
KH2PO4(24 ∶ 6 ∶ 70) ，体积流量为 1． 0 mL /min，分离效果良
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表 2 豨莶草中豨莶苷、奇壬醇的测定结果 (n =2)
收集地 样品 质量 / g
豨莶苷质量
分数 /%
奇壬醇质量
分数 /%
岳西石关 腺梗豨莶 1． 000 17 0． 378 0． 041
岳西姚河 腺梗豨莶 0． 999 86 0． 252 0． 032
大蜀山 豨莶 1． 000 05 0． 070 0． 141
亳州饮片厂 豨莶 1． 000 42 0． 357 0． 053
亳州 豨莶 1． 000 12 0． 379 0． 038
二附院药房 豨莶 1． 000 01 0． 061 0． 040
药植园 豨莶 1． 000 24 0． 056 0． 139
池州 豨莶 1． 000 06 0． 017 0． 057
岳西姚河 豨莶 1． 000 28 0． 106 0． 094
黄山汤口 豨莶 1． 000 12 0． 135 0． 009
岳西石关 豨莶 1． 000 15 0． 173 0． 119
好，豨莶苷、奇壬醇分别在 17 min、24 min 左右出峰，分析快
速准确，重复性好，回收率高，是测定豨莶草中有效成分的理
想方法。
3． 2 通过实验发现，安徽省各产地豨莶草中豨莶苷的质量
分数在 0． 017% ～ 0． 379%之间，平均质量分数为 0． 18%，奇
壬醇的质量分数在 0． 009% ～ 0． 141%之间，平均质量分数为
0． 067%，不同种类豨莶草中豨莶苷、奇壬醇质量分数变化并
无规律;不同产地豨莶草中二者质量分数相差也较大且不成
比例关系。
3． 3 豨莶苷是豨莶草中有效成分之一，质量分数较高，以葡
萄糖苷的形式存在于豨莶草植物体中，通过文献研究发现豨
莶苷仅为豨莶草所独有，专属性强。因此，建议在豨莶草的
质量标准中增加豨莶苷并结合奇壬醇共同控制豨莶草的质
量。
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延龄草脂肪酸类成分分析
吴 芳， 李 涛， 郭耀武
(陕西省食品药品检验所，陕西 西安 710061)
收稿日期:2010-07-27
基金项目:陕西省科学技术研究发展计划项目(2006K16-G7)
作者简介:吴 芳(1979—) ，女，主管药师，主要从事中药质量标准和化学成分研究。Tel:(029)85239848
摘要:目的 研究延龄草脂肪酸类成分及主要成分的测定。方法 采用 GC-MS 对延龄草脂肪酸类成分进行鉴定，主要
成分甲酯化后，采用 GC法定量测定。结果 延龄草脂肪酸类成分主要有 3 种;甲酯化后，主要成分亚油酸进样量在
0． 585 8 ～ 4． 184 μg范围内线性关系良好，r = 0． 999 9，平均加样回收率为 87． 6%(RSD 为 1． 75%)。结论 方法均简便
合理，可以用于延龄草药材脂肪酸类成分的鉴定和测定。
关键词:延龄草;脂肪酸;GC-MS
中图分类号:R284． 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2011)08-1446-03
延龄草(Trillium tschonoskii Maxim)为多年生草本植物，
属于国家保护的稀有植物品种，我国分布于西藏、云南、四
川、陕西、甘肃、湖北、安徽、浙江及福建部分地区。延龄草属
植物为传统名贵中药，其性味甘平，有降压、镇痛、溶血等功
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