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年第 3 期2016
TCVM
甘草为豆科多年生草本植物，别名美草、蜜甘（《本
经》）、蜜草（《别录》）、国老（陶弘景）、灵通（《记事珠》）等。
生甘草偏于清热解毒；蜜炙甘草为生甘草（片）用蜂蜜拌
匀，再炒至不黏手，取出摊晾，然后入药，蜜甘草偏于润肺
和中。中药炮制是根据中医药理论，依照辨证施治的用药
需要和药物自身性质以及调剂、制剂的不同要求而采取的
一项制药加工技术。目前，各地制备炙甘草饮片采用的方
法不尽相同，炮制工艺尚不规范，市场上存在着饮片质量
良莠不齐的现象，中药饮片的炮制缺乏标准操作规程的现
象还相当突出 [1-3]。加强炮制工艺规范化和饮片质量标准
化研究，是实现饮片生产产业化，提高中药饮片质量的重
要环节。古代有多种甘草的炮制方法，现在临床主要使用
生甘草片和炙甘草片。炙甘草的炮制方法主要是炒制法，
另外还有烘制法和微波法两种。笔者等采用 HPLC 法测定
甘草酸和甘草苷的含量，并对上述 3 种炙甘草的炮制方法
进行比较，探索炙甘草饮片规范化的质量标准及炮制工
艺。
1 材料
1.1 仪器
Waters 2695-2966 高效液相色谱仪（美国）；检测器：
PDA检测器；色谱柱：kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），
C18保护柱（大连依利特分析仪器有限公司）；B3200S－T 超
声震荡仪（必能信超声上海有限公司）；Millipore 纯水制备
系统；电子分析天平 AE240（十万分之一，瑞士，METTLER-
TOLEDO Co.）。
1.2 试剂
乙腈：HPLC 级，美国迪马（DIKMA）试剂公司，批号：
91015）；甲醇：HPLC 级，美国迪马（DIKMA）试剂公司，批
号：74812；水：Millipore water purification systems 制备；磷酸：
优级纯，北京益利精细化学品有限公司，批号：20101015。
1.3 药材
甘草（炙）：为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.，
购于甘肃中药饮片厂，产地：甘肃，批号：0910069M，药材
经甘肃中医药大学生药学教研室专家鉴定。
1.4 对照品
甘草次酸（中国食品药品检定研究院，批号：101105－
200911）；甘草苷（中国食品药品检定研究院，批号：100817－
200908）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
2.1.1 洗脱系统的选择 （1）甲醇-0.01％乙酸水梯度洗
脱；（2）乙腈-0.01 磷酸水梯度洗脱；（3）乙腈-0.05％磷酸
梯度洗脱。用甲醇-0.01％水与乙腈-水梯度洗脱系统对同
一样品进行分析，结果表明，甲醇-水梯度洗脱基线漂移较
重，色谱峰宽，峰形不好，出峰数目少，乙腈-水梯度洗脱
系统更好。用乙腈-水与乙腈-0.05％磷酸梯度洗脱系统对
同一样品进行分析，乙腈-0.05％磷酸梯度洗脱吸收峰数
目多，峰形好，更优于乙腈-水梯度洗脱系统。故流动相系
统选用乙腈－0.05％磷酸梯度洗脱。
2.1.2 检测波长确定 取样品溶液，分别在 210 nm、240 nm、
252 nm、276 nm处检测。结果表明，样品在 252 nm、276 nm
出出峰数目最多，甘草苷和甘草酸分别在 252 nm和 276 nm
处有最大吸收，且各峰响应值较高，基线稳定，故选之。
炮制对甘肃道地药材甘草中甘草苷和甘草酸含量的影响
李越峰，徐富菊，张泽国，曹 瑞，严兴科
（甘肃中医药大学，甘肃兰州 730000）
摘 要：目的：考察不同炮制方法对甘肃道地药材甘草中甘草苷和甘草酸含量的影响。方法：用 HPLC方法
梯度洗脱，色谱条件为：Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流速 0.8 mL /min，柱温 28 ℃，流动相 A为乙腈；
流动相 B为磷酸水（pH值 3），时间为 25 min。结果：25%蜜炙甘草 60 ℃烘制 60 min（烘制法）炮制的炙甘草比其
他炮制方法所得到的甘草苷和甘草酸含量高，色谱图显示甘肃道地药材甘草经过炮制后峰数目减少，即甘草中成
分减少。结论：用 HPLC方法测定甘草中甘草苷和甘草酸的含量，操作简单可靠，重现性好，可作为甘肃道地药材
甘草质量控制的有效方法。
关键词：甘草；炮制；高效液相色谱；质量
中图分类号：S853.7 文献标志码：A 文章编号：1000-6354（2016）03-0050-04
DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2016.03.015
收稿日期：2016-01-14
基金项目：国家自然科学基金资助项目 (81460611)；教育部科
学技术研究重点基金资助项目（212186）；甘肃省自
然科学基金资助项目（2010：1010RJZA212；2014：
145RJZA076）；甘肃省财政厅高校基本科研业务费
专项基金资金项目（2013-2）；兰州市科技局项目
（2014-1-188）
作者简介：李越峰（1974-），女，副教授，主要从事中药炮制机理
研究，E-mail:lyfyxk@126.com
通讯作者：严兴科，男，教授、博士，博士生导师，长期从事中药
及复方有效成分及质量研究。
实
验
技
术
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2.1.3 色谱条件的确立 根据上述结果，最终确立的色谱
条件：色谱柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×25 0mm，5 μm）（大
连 Elite 公司）；流动相：乙腈-0.05%磷酸水梯度洗脱；检
测波长：252 nm、276 nm；流速：0.8 mL/min；柱温：28 ℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取甘草苷 0.500 4 mg、甘草酸 0.530 1 mg 2 种
对照品，分别置于 5 mL 容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻
度，备用。
2.3 供试品溶液的制备
2.3.1 炙甘草炒制法制备 称取生甘草片 10份，每各 20 g，
加炼蜜 5 g（炼蜜加水 1.5 mL），拌匀，闷透，置锅内文火炒
至色泽金黄，待不黏手时取出，冷却，粉碎过 60 目筛。
2.3.2 炙甘草烘制法制备 称取生甘草片 3份，每各 20 g，
加炼蜜 5 g（炼蜜加水 1.5 mL），拌匀，闷润 24 h，采用不同
温度烘制不同时间，取出，冷却，粉碎过 80 目筛。
2.3.3 炙甘草微波法制备 称取生甘草片 3 份各 20 g，加
炼蜜 5 g（炼蜜加水 1.5 mL），拌匀，闷润 24 h、450 W微波加
热不同时间（6、5.5、5 min），取出，放凉，粉碎过 80目筛。
2.3.4 供试品溶液制备 精密称取已过 80 目筛烘干至
恒重的蜜炙甘草或甘草药材粉末 0.5 g，置容量瓶中，精密
加入 70%甲醇 20 mL，超声提取 40 min，冷却，摇匀，滤过，
0.45 μm 滤膜过滤，精密量取续滤液 5 mL，置 100 mL 量
瓶中，用 25％乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.4 线性关系考察
各精密吸取上述对照品溶液，进样量分别为 2、4、6、8、
10 μL，建立以成分含量为横坐标、峰面积为纵坐标的标准
曲线方程。结果表明甘草酸在 0.751-2.45 μg、甘草苷在
0.043-0.52 μg 范围内线性关系良好。
2.5 提取方法考察
分别采用萃取法（乙酸乙酯、正丁醇、氯仿）、超声提取
法（不同浓度、体积的溶剂及超声时间）、回流法，实验结
果表明，70％甲醇 20 mL、超声处理 40 min 所得样品出峰
数目适中，干扰峰少，分离度好，响应值高。
2.6 方法学考察
2.6.1 精密度试验 精密吸取对照品和供试品溶液各 10 μL，
分别注入液相色谱仪，各测定 6 次，对照品和供试品溶液
甘草苷峰面积的 RSD 分别为 0.66%和 0.73%；甘草酸峰面
积的 RSD分别为 0.48%和 0.61%（n=6），表明精密度良好。
2.6.2 重现性试验 按“2.3”方法，分别制备 6份样品供试
品溶液，各吸取 10 μL进样测定，测得甘草苷和甘草酸的平
均含量 RSD分别为 1.21%、1.05%，表明该方法重现性良好。
2.6.3 稳定性试验 取供试品溶液在上述色谱条件下，
分别在 0、6、12、24、36、72 h 各进样 10 μL，对照品和供试
品溶液甘草苷峰面积的 RSD 分别为 0.85%和 0.92%；甘草
酸峰面积的 RSD 分别为 1.05%和 1.12%（n=6），结果表明
供试品稳定性良好。
2.6.4 回收率试验 采用加样回收测定法。分别精密称取
已知含量的样品共 5份，分别加入一定量的甘草酸和甘草
苷对照品，按“2.3”项方法制备样品 6份，进样 10 μL，HPLC
测定，测得甘草苷和甘草酸的平均回收率分别为 98.45%、
98.34%。结果表明，本法回收率高。结果见表 1、表 2。
表 1 甘草苷回收率试验结果
Table 1 Recovery of liquirtin
表 2 甘草酸回收率试验结果
Table 2 Recovery of glycyrrhizin
2.7 不同炮制方法制备的炙甘草甘草苷和甘草酸含量测
定结果
结果见表 3。
表 3 不同炮制方法制备的炙甘草中甘草苷和甘草酸含量
（n=3）
Table 3 Content determination of honey -baked licorice
by different processing methods
2.8 不同炮制方法甘草甘草苷和甘草酸含量测定色谱图
结果见图 1-图 6。
实
验
技
术
样品中含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/％ 平均值/％ RSD/％
2.4627
2.4819
2.4471
2.4426
2.4532
2.50
2.50
2.50
2.50
2.50
4.8990
4.9394
4.9434
4.9438
4.8682
97.45
98.30
99.85
100.05
96.60
98.45 1.52
样品中含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/％ 平均值/％ RSD/％
0.1956
0.1971
0.1935
0.1932
0.1941
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
0.3901
0.3945
0.3871
0.3956
0.3896
97.25
98.70
96.80
101.20
97.75
98.34 1.78
样品 甘草苷/% 甘草酸/%
甘草25%蜜炙(炒制法)
甘草30%蜜炙(炒制法)
甘草25%蜜炙微波6min（微波法）
甘草25%蜜炙微波5.5min（微波法）
甘草25%蜜炙微波5min（微波法）
甘草25%蜜炙60℃烘制40min（烘制法）
甘草25%蜜炙60℃烘制60min（烘制法）
甘草25%蜜炙80℃烘制40min（烘制法）
甘草25%蜜炙80℃烘制60min（烘制法）
甘草盐炙
甘草清炒
甘草醋炙
甘草酒炙
蜜炙甘草70%乙醇提取30min
蜜炙甘草70%乙醇提取40min
蜜炙甘草70%乙醇提取45min
蜜炙甘草50%乙醇提取40min
蜜炙甘草70%甲醇提取40min
蜜炙甘草50%甲醇提取40min
1.20
0.95
1.18
1.41
1.18
1.65
1.71
1.32
1.22
0.61
0.73
0.86
0.75
1.35
1.88
1.25
0.85
0.96
1.14
1.80
1.30
1.32
1.95
1.72
1.80
2.01
1.55
1.38
0.98
0.85
0.91
0.81
1.22
2.37
1.33
0.92
1.05
0.97
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图 1 甘草酸标品含量色谱图
Fig.1 HPLC chromatogram of standard glycyrrhizin
图 2 生甘草甘草酸含量色谱图
Fig.2 HPLC chromatogram of liquirtin in crude licorice
图 3 炙甘草甘草酸含量色谱图
Fig.3 HPLC chromatogram of glycyrrhizin in honey -
baked licorice
图 4 甘草苷标品含量色谱图
Fig.4 HPLC chromatogram of standard liquirtin
图 5 生甘草甘草苷含量色谱图
Fig.5 HPLC chromatogram of liquirtin in crude licorice
图 6 炙甘草甘草苷含量色谱图
Fig.6 HPLC chromatogram of liquirtin in honey -baked
licorice
3 讨论
3.1 在供试品溶液的制备方面，分别采用萃取法（乙酸乙
酯、正丁醇、氯仿）、超声提取法（不同浓度、体积的溶剂及
超声时间）、回流法，实验结果表明，70％甲醇 20 mL、超声
处理 40 min所得样品出峰数目适中，干扰峰少，分离度好，
响应值高。
在色谱条件方面，甲醇-水梯度洗脱与乙腈-0.05％磷
酸梯度洗脱吸收峰数目多，峰形好，更优于乙腈-水梯度洗
脱系统。故流动相系统选用乙腈-0.05％磷酸梯度洗脱；在
252 nm、276 nm出峰数目最多，甘草苷和甘草酸分别在 252 nm
和 276 nm 处有最大吸收，且各峰响应值较高，基线稳定。
3.2 用 HPLC 方法对甘草及炙甘草中甘草酸和甘草苷的
含量进行测定，精密度、重现性、稳定性良好，回收率高，
操作简单可靠，重现性好，可作为甘肃道地药材甘草质量
控制的有效方法。
3.3 炙甘草是甘草主要炮制品之一，也是药典收载的中
药品种。对于甘草的蜜炙，传统的炒制法费时费力，手工操
作的影响因素较多，不适合规模化生产。因此，本试验严格
按照甘草蜜制方法炒制法、烘制法、微波法制备炙甘草，并
与多批生甘草进行了甘草苷和甘草酸含量对比分析，通过
多次实验比较，甘草 25%蜜炙、60 ℃烘制 60 min（烘制法）
炮制的炙甘草比其他炮制方法所得到的甘草苷和甘草酸
含量都高，且经过反复实验，从色谱图可以发现甘肃道地
药材甘草经过炮制后峰的数目减少，甘草中成分减少，因
此，规范甘肃道地药材甘草的炮制过程，才能有效控制其
质量。
参考文献：
[1] 陈吉炎，陈 黎，安志斌，等.中药饮片质控乏力的原因
与对策[J].中药材，2003，26（1）：43-46.
[2] 富同义 .中药饮片质量亟待规范[J].中国新医药，2003，
2（4）：74.
[3] 孙 生，齐红梅，李秀霞 .中药饮片及其炮制品目前存
在的问题[J].天津药学，2001，13（2）：30-38.
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!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
研究发现阿魏倍半萜类化合物具有杀虫灭菌和杀灭钉
螺的作用，而且能明显抑制虫体能量代谢酶类的活性 [1-3]。
研究各个发育阶段血吸虫对阿魏倍半萜类化合物的敏感
性，对于优化用药方案，开发应用新疆阿魏及避免血吸虫
对化学杀虫剂产生耐药性具有重要意义[4-7]。笔者等通过对
感染血吸虫尾蚴后不同时间幼兔灌服阿魏倍半萜类化合
物，观察其对不同发育阶段虫体的影响，以探讨阿魏倍半萜
类化合物对不同发育阶段日本血吸虫的杀灭作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物 试验用动物中国白兔，购于荆州职业技术
学院实验兔场，由长江大学动物科学学院繁殖、提供，体质
量（0.5±0.1） kg，雌雄不限。
1.1.2 试验药物 阿魏有效成分的提取与不同剂型的制备，
按文献[7]方法进行。用 1%羧甲基纤维素钠（CMC）溶液将阿魏
倍半萜类粉剂配成 3%阿魏倍半萜类混悬液，给兔灌服。
1.1.3 试验虫种 感染幼兔用日本血吸虫尾蚴由长江大
学动物科学学院实验室感染钉螺逸出。
1.2 方法
1.2.1 试验分组与处理 将试验兔分为 11组，每组 10只，
分别为 10个实验组和 1个对照组。实验组分别在感染日本
血吸虫后 2 h，1、2、6、11、13、15、24、36、41 d按 500 mg/kg灌
胃给药阿魏倍半萜类混悬液，1 次/d，4 周后解剖幼兔，门
静脉灌注法收集虫体，计算减虫率，对照组感染血吸虫尾
蚴不给药。
1.2.2 日本血吸虫尾蚴感染幼兔 采用腹壁感染法，即
将幼兔固定，剪去腹部皮毛约 2 cm×2 cm，室温下用脱氯
水湿润，将计数好的载有尾蚴的盖玻片置于去毛皮肤上，
每兔感染日本血吸虫尾蚴（45±1）条，20 min后除去盖玻片。
1.3 虫体收集、计数
最后一组实验组灌药 4 周后解剖各组幼兔，收集虫体
阿魏倍半萜类对感染幼兔不同发育阶段血吸虫的影响
王思路，赵红梅
（长江大学动物科学学院，湖北荆州 434025）
摘 要：观察阿魏倍半萜类对感染幼兔体内不同发育阶段日本血吸虫童虫与成虫的影响，采用定量日本血
吸虫尾蚴感染幼兔，分别在感染后 2 h，1、2、6、11、13、15、24、36 d和 41 d，按 500 mg/kg灌胃给药阿魏倍半萜类，
1次/d，4周后解剖幼兔，门静脉灌注法收集虫体，计算减虫率。结果显示，阿魏倍半萜类对 1、2、6、11、13、15、24、36、
41日龄童虫或成虫的减虫率分别为 15.8%、17.0%、60.2%、50.2%、36.9%、31.3%、45.3%、57.0%、25.2%，其中以6-36日
龄虫对该药最敏感。结果表明，阿魏倍半萜类对幼兔体内日本血吸虫不同发育阶段均有杀灭作用，对 6-36日龄虫
体杀灭效果更为显著。
关键词：阿魏倍半萜类；日本血吸虫；敏感性
中图分类号：S857.3 文献标志码：A 文章编号：1000-6354（2016）03-0053-02
DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2016.03.016
收稿日期：2016-01-18
基金项目：长江大学新农村发展研究院开放基金项目（201411）资
助
作者简介：王思路（1988-），男，在读硕士研究生，E-mail:269643126
@qq.com
通讯作者：赵红梅（1965-），女，教授，博士，E-mail:zhmzhm555@
126.com
Effects of processing on the contents of glycyrrhizin and liquirtin in Radix Glycyrrhizae fromGansu
LI Yue-feng, XU Fu-ju, ZHANG Ze-guo, CAO rui, YAN Xing-ke
（Gansu University of Chinese Medicine, Lanzhou Gansu 730000, China）
Abstract：Objective: To determinate the contents of two active components in Radix Glycyrrhizae from Gansu for controlling
its quality．Methods: HPLC method was applied for quality assessment of licorice root．Column: Kromasil C18 column (4.6 mm×250 mm, 5
μm); flow-rate: 0.8 mL/min；column temperature: 28℃; mobile phase: acetonitrile (A) and H2O (acidified to pH=3 with phosphoric acid)
(B) for 25 min. Results: The contents of glycyrrhizin and liquirtin in honey-baked licorice were higher than other processed products.
HPLC showed that processing could decrease the contents and the number of components in licorice root. Conclusion: HPLC can be
used for content determination of Radix Glycyrrhizae from Gansu with high reliability, repeatability and simplicity．
Key words：Radix Glycyrrhizae; processing; HPLC; quality
实
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技
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