全 文 :福建畜牧兽医 第35卷 第3期 2013年
[S].北京:中国农业出版社,2010.
[2] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国
家标准化管理委员会.GB/T23744-2009饲料中 36种农
药多残留测定气相色谱-质谱法[S].北京:中国标准出
版社,2009.
蟛蜞菊(Wedelia chinensis),为菊科(compositae)
蟛蜞菊属(wedelia)植物,多年生草本,《中药大辞典》
记载:清热、解毒、祛癖、消肿,主治白喉、百日咳、痢
疾、痔疮、跌打损伤[1]。蟛蜞菊已作为草药在中国南
方民间被广泛应用,特别在福建和广东地区。其不仅
资源丰富,且富含萜类、生物碱、黄酮类物质等多种
生物活性成分,具有显著的抗炎、止咳、抑菌、保肝疗
效,安全方便,是一种良好的中草药资源[2-4]。
随着我国畜禽养殖业的发展,畜禽致病菌多重
感染、抗生素长期大量使用带来的畜禽产品安全问
题日益突出,如肠道菌群失衡、毒副作用、耐药性及
其传递转移等负效应。因此,探索与研制抗菌活性
高、毒性低、残留少的广谱饲料抗生素替代品,以提
高细菌多重感染性疾病的控制水平和畜禽产品的质
量安全已成为 21世纪健康养殖的重要课题。
研究证明,挥发油(essential oil)的活性成分具有
较强的表面活性和脂溶性,能迅速穿透病原微生物
的细胞膜,使其内容物流失,并能有效阻止线粒体内
的呼吸氧化过程,使病原微生物丧失能量供应而死
亡[5]。目前,挥发油也已作为饲料添加剂被应用于
畜牧生产中,围绕各种挥发油进行的试验也成为了
当前饲料添加剂研究的热点之一[6-7],但有关蟛蜞
菊挥发油作为抗生素替代品应用于饲料中的研究较
少。本研究以 4种病原菌为对象,研究了蟛蜞菊挥发
油的抑菌效果,为其作为饲料抗生素替代品的开发
利用提供了理论依据。
1 材料和方法
1.1 材料与设备
1.1.1 植物原材料 蟛蜞菊地上部分采自福建农林
大学。
1.1.2 供试菌种 大肠杆菌(Escherichia coli);金黄
色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus);葡萄球菌
(Staphylococcus sp.);沙门氏菌(Salmonella sp.)购于
中国药品生物制品检定所。
1.1.3 主要试验设备和药品 挥发油水蒸汽提取装
置,正茂玻璃仪器厂;LRH-150 生化培养箱,上海
一恒科技有限公司;SW-CJ-2FD型双人单面净化工
作台(洁净度 100 级),苏州净化设备有限公司;
蟛蜞菊挥发油成分体外抗菌活性研究
林曾欢 1 林碧芬 2* 黄志坚 3
(1.福清市畜牧兽医中心 福建福清 350300;2.福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福州 350013;
3.福建农林大学动物科学学院 福州 350002)
摘 要 试验旨在研究蟛蜞菊挥发油能否作为天然安全优质的抗生素替代品而广泛应用于畜禽生产。通过水蒸汽蒸馏法获得
蟛蜞菊挥发油,并研究测定其对畜禽养殖中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、葡萄球菌、沙门氏菌等常见致病菌的抑制效果。结果表
明,蟛蜞菊挥发油对 4种供试菌种都具有显著的抑制效果,且随着挥发油浓度的增大,其抑菌活性增强。
关键词 蟛蜞菊挥发油 抑菌活性
文献标识码:A 文章编号:1003-4331(2013)03-0003-02
Antimicrobial Activity of Essential Oil from Wedelia Chinensis in Vitro
Lin Zenghuan1 Lin Bifen2* Huang Zhijian3
(1.Animal Husbandry and Veterinary center of Fuqing,350300; 2.Institute of Animal Husbandry and Veterinary,Fujian Academy of
Agricultural Sciences,Fuzhou 350013; 3.College of Animal Science,Fujian Agriculture and Forestry University,Fuzhou 350002)
Abstract The experiment was conducted to study the essential Oil from Wedelia chinensis. whether as a natural security and high
quality alternative to antibiotics for livestock production. The essential oil was extracted from Wedelia chinensis. By steam distillation,
and then its antimicrobial activity was assayed. The result showed the essential oil of Wedelia chinensis had significant inhibitory
effect on 4 kinds of bacteria,when the concentration of the essential oil was higher,the antibacterial activity was enhanced.
Key words The essential oil of Wedelia chinensis antimicrobial activity
*通讯作者:林碧芬(1984-),女,实习研究员。研究方向:动物
营养添加剂。E-mail: Linbifen311@163.com。
3
福建畜牧兽医 第35卷 第3期 2013年
LDZX-30KBS型立式压力蒸汽灭菌器,上海申安医
疗器械厂;TGL-16G台式高速冷冻离心机,上海安
亭科技仪器厂;JEM—1010型透射电电子显微镜,日
本电子株式会社。乙醚、95%乙醇、氯化钠、硫酸钠等
均为分析纯。
1.1.4 培养基配制 肉汤培养基:肉汤培养基 1.1 g,
50 mL蒸馏水,121 ℃灭菌 30 min备用;琼脂培养
基:琼脂培养基 4.5 g,100 mL蒸馏水,121 ℃灭菌
30 min备用。
1.2 试验方法
1.2.1 蟛蜞菊挥发油的提取 准确称取 2 000.0 g
新鲜蟛蜞菊地上部分,切成 1~2 cm碎片,置于挥发
油水蒸汽提取装置中,按水蒸汽蒸馏法进行蒸馏
4 h,收集挥发油,经 NaCl饱和后用乙醚萃取 3次,
萃取液用无水硫酸钠干燥,过夜,蒸馏回收乙醚后冷
藏备用。
1.2.2 抑菌活性的测定
1)抑菌原液样品制备。取蟛蜞菊挥发油,用 95%
乙醇溶解稀释成含挥发油 50 mg/mL 的药液,滤菌
备用。
2)抑菌圈测定(滤纸片扩散法)。将直径为 6 mm
的圆滤纸片经高压灭菌后在 50 mg/mL的挥发油药
液中浸渍 10 min备用。将浓度为 l05 CFU/mL的各
试验菌悬液 0.2 mL在相应的固体培养基上均匀涂
布,制成含菌平板。取浸渍过的滤纸片贴于不同的
含菌平皿上,用稀释 10-4倍的庆大霉素作阳性对照,
用 95%乙醇作阴性对照,将各培养皿置于 37 ℃生
化培养箱中培养 24 h后。精确量取抑菌圈直径,结
果取 4次重复试验的平均值。
3)最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌溶度(MBC)
测定。将蟛蜞菊挥发油加到 2 mL 1.0 × 105 CFU/mL
各试验菌悬液中,使挥发油最终稀释浓度为 70、60、
50、40、30 mg/mL,同时设细菌对照组和空白对照组,
置于 37 ℃生化培养箱中培养 24 h后观察结果,以无
菌生长的最低浓作为该供试菌种的最小抑菌浓度。
从 MIC 试验无菌生长的试管中吸取 0.05 mL
液体加入到 0.15 mL肉汤培养基中混和均匀(通过
稀释法解除残留药物的抑菌作用),吸取 0.1 mL到
固体培养基中涂布均匀。将培养皿正面向上放入
37 ℃生化培养箱中培养约 0.5 h后,待表面干燥将
培养皿倒扣继续培养至 24 h,以完全无菌生长的最
低浓度作为该供试菌种的最低杀菌浓度。
2 结果与分析
由表 1可知,蟛蜞菊挥发油对 4种供试细菌都
有较好的抑制作用,表现出良好的广谱抗菌效果,其
中以对大肠杆菌的抑制作用最强。结果显示,蟛蜞菊
挥发油对沙门氏菌的最小抑菌浓度为 40 mg/mL,其
他的则为 50 mg/mL。根据文献(刘洋等,2009),蟛蜞
菊挥发油对供试菌种的 MIC都介于 7.81~250 g/L,
为中度敏感。
表 1 蟛蜞菊挥发油对 7种供试菌的抑菌圈和 MIC、MBC
3 讨 论
蟛蜞菊挥发油对常见的畜禽病原菌如大肠杆
菌、金黄色葡萄球菌、葡萄球菌和沙门氏菌都具有良
好的抑制效果,显示出广谱的抗菌效果。虽然与抗生
素相比,蟛蜞菊挥发油的抑菌效果较差,但是抗生素
在畜牧养殖生产中滥用造成的药物残留不仅严重影
响畜产品的质量,且导致多重耐药与交叉耐药性,更
严重威胁着人类的健康。而植物本身所具有的低毒、
低残留、低耐药性等特性是抗生素所不具备的。因
此,研究开发蟛蜞菊挥发油作为饲料添加剂具有一
定的生产意义,但是其具体抗菌成分和抗菌机制尚
未明确,需要进一步深入研究。
参考文献:
[1] 江苏新医学院.中药大辞典(下册)[M].上海:上海科技出
版社,2002:2701.
[2] 宋立人,洪恂,丁绪亮,等.现代中药学大辞典(上册)[M].
北京:人民卫生出版社,2001:2456-2457.
[3] 谢宗万.汉拉英对照中药材正名词典[M].北京:北京科
学技术出版社,2004:766.
[4] 梁方方,莫毅,赖志强,等.蟛蜞菊对小白鼠的急性毒性
试验[J].中国畜牧兽医,2009,36(3):223-225.
[5] 姚新生.天然药物化学[M].3版.北京:人民卫生出版社,
2002:245-246.
[6] Hayashi K,Imanishi N,Kashiwayama Y.Inhibitory effect
of cinnamaldehyde,derived from Cinnamomi cortex,on
the growth of influenza A/PR/8 virus in vitro and in vivo
[J].Antiviral Research,2007,74:1-8.
[7] Chung-Jen Chen,Martin Michaelis,Hseng-Kuang Hsu.
Toona sinensis Roem tender leaf Extract inhibits SARS
coronavirus replication[J].Journal of Ethnopharmacolo-
gy,2008,120:108-111.
(mm)
10 95%
MIC
(mg/mL)
MBC
(mg/mL)
13.25
11.50
11.00
11.00
18.00
17.50
17.75
17.50
6
6
6
6
50
40
50
50
70
60
60
60
4