全 文 ：ChinJClinPharmacol 　 291　
Vol.27No.4 April2011(SerialNo.138)
基础研究
FundamentalStudy覆盆子提取物对基质金属蛋白酶的体外抑制作用
InhibitingeffectofRubusChingiHuextractonmatrixmetaloproteaseinvitro
收稿日期:2011-01-01
修回日期:2011-03-18
作者简介:王艳春(1968-), 女 ,副主任药师 ,
主要从事医院药事管理及临床药学
研究
通讯作者:王艳春
Tel:(010)59520104
E-mail:wangyanchun1968@ 163.com
王艳春 ,李　芳 , 陶　蕾
(航空总医院 药剂科,北京　 100012)
WANGYan-chun, LIFang,
TAOLei
(DepartmentofPharmacy, Aviatation
GeneralHospital, Beijing100012 , Chi-
na)
摘要:目的　观察覆盆子提取物对基质金属蛋白酶(MMP-13)的抑制作用。方
法　制备覆盆子不同浓度水提物溶液 , 将基质金属蛋白酶 1 μL和不同浓度的覆
盆子提取物 1μL加入到缓冲溶液中 , 使终体积为 50 μL;对照组不加入覆盆子
水提物溶液;用荧光酶标仪检测荧光强度 , 计算出不同浓度覆盆子提取物对
MMP-13的抑制百分数。 结果　IC50 =0.04 μg· mL-1 , 覆盆子水提物浓度与
MMP-13活性抑制百分数呈正比关系。 结论　覆盆子水提物体外具有抑制
MMP-13活性的作用。
关键词:覆盆子;基质金属蛋白酶;酶活性
中图分类号:R285.5　　　文献标识码:A
文章编号:1001-6821(2011)04-0291-02
Abstract:Objective　ToobservetheinhibitingefectofRubusChingi
Huextractonmatrixmetaloprotease(MMP-13)invitro.Methods　
ObtaincrudeextractofRubusChingiHuviawaterextraction, weigh10
mgofthecrudeextracttodissolveindistiledwatertopreparewaterex-
tractsolutionofdiferentconcentrations.The1 μLofMMP-13 and1
μLdiferentconcentrationofRubusChingiHu(RCH)extractaddedto
48 μLofbufersolution, formingfinalvolumeof50 μL.Therewasnot
RCHextractincontrolgroup.Thefluorescenceintensitywasdetectedby
fluorescencemicroplate.TheinhibitingpercentageofRubusChingiHu
extractofdiferentconcentrationsonMMP-13 wascalculated.Results
　IC50 =0.04 μg· mL-1.Thepositivecorrelationbetweentheconcen-
trationofRubusChingiHuextractandthepercentageofinhibitingthe
activityofMMP-13.Conclusion　RubusChingiHuextracthadinhibi-
tingefectonactivityofMMP-13 invitro.
Keywords:RubusChingiHu;matrixmetaloproteinases;enzymaticac-
tivity
覆盆子(RubusChingiHu)为蔷薇科(Rosaceae)悬钩子属植物;
覆盆子因叶裂如掌 ,也称掌叶覆盆子 ,具有补肾固精 、助阳遗尿的功
效 ,除用于治疗阳痿早泄 、遗精 、肾虚遗尿等症外 ,尚用于食疗和保
健。目前国内主要将其作为保健品开发对象 ,研究其营养价值。尚
有研究其降血糖 、降脂的功效 。本文观察其体外对基质金属蛋白酶
(MMP-13)的抑制作用 ,探讨其可能的抗肿瘤作用机制 。
材料与方法
1　材料
DOI:10.13699/j.cnki.1001-6821.2011.04.003
292　 中 国 临 床 药 理 学 杂志　
第 27卷　第 4期　2011年 4月(总第 138期)　　　　
　　药品与试剂　覆盆子干燥饮片 10 g。酶反应缓
冲液(50 mmol· L-1 HEPES, 0.2 mol· L-1 NaCl, 10
mmol·L-1 CaCl2 , 20 μmol·L-1 ZnSO4 , 0.05% Brij-
35,调 pH7.5);荧光底物 DQ-gelatin,美国 Sigma公
司提供;其他试剂 ,均为国产分析纯 。
仪器　FLX800荧光酶标仪 ,美国百特公司产品 。
覆盆子粗提物制备　称取中药覆盆子 10 g,加蒸
馏水 100 mL,在 100 ℃水浴箱中加热 60 min;常温冷
却 ,再用循环水真空泵经 0.45μm的滤膜滤过 ,置冻干
瓶中低温冻干 ,得覆盆子粗提物 。
MMP-13表达 、纯化和复性　由吉林大学分子酶
学工程教育部重点实验室完成 。
2　实验方法
2.1　覆盆子水提物制备
称取覆盆子粗提物 10 mg,将其溶于蒸馏水中 ,制
成浓度为 0.1, 0.2, 0.5, 0.8, 1.0 mg·mL-1的水提物
溶液。
2.2　抑制活性的测定
将基质金属蛋白酶 1μL和不同浓度(0.10, 0.05,
0.025, 0.01, 0.005μg·mL-1)的覆盆子水提物 1μL,
加入到缓冲溶液中 ,使终体积为 50 μL,作为实验组;
对照组 ,不加入覆盆子溶液 。
将各组溶液加入 96孔酶标板中 , 37 ℃培养箱中
孵育 30 min,再加入含有 DQ-gelatin0.2 μg的缓冲
溶液 50 μL中 , 2组最终反应体系为 100 μL。
用荧光酶标仪进行检测 ,激发波长为 460 nm,发
射波长为 520 nm,检测 10 min。荧光强度的强弱变化
代表酶降解底物活力的大小。
2.3　抑制活性的计算
Vi:加入覆盆子水提物组的荧光强度变化;Vo:未
加入覆盆子水提物组的荧光强度变化 。抑制百分数
[ Inhibition(%)]的公式如下。
Inhibition(%)=1-Vi/Vo (1)
当抑制百分数为 50%时 ,为覆盆子提取物抑制酶
活性(IC50)。
2.4　数据处理
用 Origin7.0, Kc4软件处理 。
结　　果
1　不同浓度覆盆子水提物对 MMP-13的影响
MeanV为随时间变化的荧光强度的变化速率 ,
可以作为相对的底物降解速率 。根据式(1),可计算
出不同浓度覆盆子水提物对 MMP-13的抑制百分
数;并推测 MMP-13的活性抑制 50%时所需要的覆
盆子的量 ,结果 IC50 =0.036 μg· mL-1 ,见表 1。
由表 1可见 ,覆盆子提取物浓度与 MMP-13活
性抑制百分数呈正比关系 。
表 1.　不同浓度覆盆子水提物对基质金属蛋白酶的影响
Table1.EffectofthediferentcontentoftheRubusChingiHu
(RCH)extractonMMP-13
Group MeanV(mF· U· mn-1)
Control 20745.0
Test1 1389.0
Test2 1488.0
Test3 5235.3
Test4 7185.8
Test5 14386.0
Control:MMP-13+DQ-gelatin;Test1, 2, 3, 4, 5:MMP-13+DQ-ge-
latinwithdiferentconcentration(0.100, 0.050, 0.025, 0.010, 0.005μg·
mL-1)RCHextract, respectively
讨　　论
研究证实[ 1] ,在恶性肿瘤中 , MMPs常过度表达 ,
并且 MMPs过表达 , 同癌症的高敏感性和致死率有
关 。研究认为[ 2] , MMPs能够导致肿瘤的发生 ,并在浸
润 、血管新生和转移中起关键性的作用。研究发
现 [ 3] , MMPs抑制剂能够在各种癌症动物模型中抑制
肿瘤的发展 。
本实验发现 ,经水煎 、干燥所获得的覆盆子提取
物 ,对 MMP-13具有抑制作用 ,且其抑制作用与浓度
呈明显的正比关系 ,其 IC50为 0.036 μg· mL-1。这说
明在覆盆子中 ,可能含有对 MMP-13有抑制作用的
先导化合物 ,有待进一步研究。
参考文献:
[ 1] 　陈杰 ,李甘地.病理学 [ M] .北京:人民卫生出版社 , 2008:122.
[ 2] 　SternlichtMD, BergersQ.Matrixmetaloproteinasesasemergingtar-
getsinanticancertherapy:Statusandprospects[J] .EmerginOpin
TherTargets, 2000;4:609-633.
[ 3] 　AmySangQX, JinYH, NewcomerRG, etal.Matrixmetaloprotein-
aseinhibitorsasprospectiveagentsforthepreventionandtreatmentof
cardiovascularandneoplasticdiseases[ J] .CurrTopicsMedChem,
2006;6:289-316.