全 文 ：中国中西医结合皮肤性病学杂志 2007年第 6卷第 2期
茅莓(RubusparvifloliusL.),又名天青地白草、
红梅消、三月泡,为蔷薇科悬钩子植物,具有活血化
瘀,清热解毒等作用,民间用于治疗吐血、跌打刀
伤、产后瘀滞腹痛、痢疾、痔疮、疥疮和黄疸等[1],还
用其根治疗女性月经过多症。郑永玲、王继生等分
别于 2002和 2006年相继报道茅莓水提取物及其
皂苷-茅莓总皂苷对局灶性脑缺血有保护作用[2,3]。
柴戎等[4]报道茅莓具有抗肿瘤作用,但至今未见相
关实验研究报道。为考察茅莓总皂苷的抗肿瘤药
效,本研究选择了A375黑色素瘤细胞、Hut-78人皮
肤T细胞淋巴瘤细胞细胞和A431人表皮癌三种皮
肤肿瘤细胞为癌细胞株进行体外抗肿瘤试验,结果
显示对前两种皮肤肿瘤有良好的抗肿瘤活性。
1 材料与方法
1.1 茅莓总皂苷
茅莓总皂苷由浙江省中医药研究院提取。实验
所用高中低三种浓度分别为 1mg%、100μg%和
10μg%。
1.2 细胞株
A375黑色素细胞瘤细胞、Hut-78人皮肤 T细
胞淋巴瘤细胞和A431人表皮癌细胞 (以上均购自
中国科学院上海细胞生物研究所)。
1.3 主要药品与试剂
环磷酰胺(CTX,江苏恒瑞医药股份有限公司生
产,批号06072121);多聚甲醛AR(杭州华东医药器
化分公司);RPMI1640粉末 (美国GIBco公司),使
用时按要求配制成培养液,并加入 10%灭活小牛血
清和100μg链霉素;胰蛋白酶(美国Gibco公司),使
用时用pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)配制成 0.25%的
溶液;噻唑兰(MTT)Sigma公司,二甲基亚砜(DM-
SO)为GIBco公司产品;胎牛血清(FBS,杭州四季青
生物材料有限公司);乙二胺四乙酸 (EDTA,美国
Sigma公司);PBS(每 1000mL含 8gNaCl,0.2g
KCl,1.44gNa2HPO4,0.24gKH2PO4);8分光光度检
茅莓总皂苷对三种皮肤肿瘤的体外抗肿瘤作用
郑振洨 1,张玲菊1,黄巧玲 1,黄常新 1,尉晓冬 1,应华忠 3,叶建根 1
(1.杭州市第三人民医院,杭州 310009;2.浙江大学医学院附属第一医院,杭州 310003;
3.浙江中医药大学动物实验中心,杭州 310053)
摘要:目的 评价茅莓总皂苷对三种皮肤肿瘤的体外抗肿瘤药效作用。方法 用 A375黑色素瘤细胞、Hut-78
人皮肤T细胞淋巴瘤细胞和A431人表皮癌细胞为癌细胞株,观察茅莓总皂苷的体外抗肿瘤作用。结果 茅莓总皂
苷对A375黑色素瘤细胞和Hut-78人皮肤T细胞淋巴瘤两种皮肤肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用,与对照组比
较差异有显著性(P<0.05);对人表皮肤癌细胞无明显抑制作用。结论 茅莓总皂苷对A375黑色素瘤细胞和 Hut-78
人皮肤T细胞淋巴瘤两种皮肤肿瘤细胞有明显的抗肿瘤活性。
关键词:茅莓总皂苷;抗肿瘤作用;体外;皮肤肿瘤
中图分类号:R739.5 文献标识码:A 文章编号:1672-0709(2007)02-0067-03
AntitumorEfectofTotalSaponinsofRubusParvifoliusL.onThreeCutaneousTumorsinVitro
ZHENGZhen-xiao1,ZHANGLing-ju2,HUANGQiao-ling1,HUANGChang-xin1,WEIXiao-dong1,YINGHua-zhong3,YE
Jian-gen1
1.TheThirdPeople’sHospitalofHangzhou,Hangzhou310009,ChinaO 2.FirstHospitalAfiliatedtoMedicalSchoolofZhe-
jiangUniversity,Hangzhou310003,ChinaO 3.ZhejiangChineseMedicalUniversityAnimalExperimentalCenter,Hangzhou
310053,China
Abstract:Objective ToinvestigatetheantitumorefectoftotalsaponinsofRubusparvifoliusL.onthreecutaneoustu-
mors.Methods TheantitumoractivityagainsthumanmalignantmelanomaA375,humancutaneousT-cellymphomaHut-
78andhumanepidermalcancerA431cellinesweredeterminedbyMTTassayinvitro.Results Thetotalsaponinsof
RubusparvifoliusL.inhibitedproliferationoftumorcelofhumanmalignantmelanomaA375andhumancutaneousT-cel
lymphomaHut-78.Theantitumorefecthasapositivecorelationwiththeconcentration.Conclusion Thetotalsaponinsof
RubusparvifoliusL.hasremarkableinhibitionofproliferationofmalignantmelanomacelandhumancutaneousT-cellym-
phomaHut-78invitro.
Keywords:totalsaponinsofRubusparvifoliusL^antitumoractivity^invitro^cutaneoustumor
·论著·
基金项目:杭州市科技局基金资助项目(2004433Q21);杭州市卫生
局基金资助项目(2004A006)
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ChinJDermatoVenerolIntegTradWMed2007,Vol.6No.2
测试剂盒(南京凯基生物技术发展有限公司)。
1.4 主要仪器
超净工作台 (苏州净化设备仪器厂),IX-70型
倒置显微镜(日本 Olympus公司),HF151UVCO2培
养箱 (上海力新实业有限公司),BASO2002-2型离
心机(台湾贝索企业公司),WelscanMK3型酶标仪
(芬兰Labsystems公司)。
1.5 体外抑瘤实验(MTT法)
将A375人恶性黑色素瘤细胞、A431表皮癌细
胞和Hut-78人皮肤T细胞淋巴瘤细胞分别与0.25%
胰酶、0.02%EDTA混合消化后计数调节细胞为 1×
105/mL,于96孔板加入18μL,并同时加入不同浓度
的药液(高1mg%、中0.1mg和低0.01mg%)20μL/孔。
以加入CTX及不加药作对照。CO2培养箱培养48h
后,加入 MTTPBS溶液 5mg/mL,再培养 4h,直接
加入0.1mLDMSO振荡10min,于酶标仪570nm测
A值。
1.6 统计分析
各实验结果表示为x±s,数据间差异性统计选用
双侧t检验。
2 结果
2.1 MTT比色法测定茅莓总皂苷对人皮肤 T细胞
淋巴瘤细胞增殖的影响
t检验(S法)结果表明,高、中浓度茅莓总皂苷
药对皮肤T细胞淋巴瘤细胞 Hut-78增殖有明显的
抑制作用,但不及CTX组,与CTX组比较,差异仍有
统计学意义(高浓度组P<0.05,中低浓度组P<0.01)。
见表1。
2.2 MTT比色法测定茅莓总皂苷对 A375人恶性
黑色素瘤细胞增殖的影响
t检验结果表明,高、中浓度茅莓总皂苷对A375
人恶性黑色素瘤细胞增殖有明显的抑制作用,但不
及CTX组,与CTX组比较,差异仍有统计学意义
(高浓度组P<0.05,中低浓度组P<0.01)。见表2。
2.3 MTT比色法测定茅莓总皂苷对人表皮癌A431
细胞增殖的影响
t检验结果表明,高、中浓度茅莓总皂苷药对人
表皮癌A431细胞增殖无明显的抑制作用。见表3。
3 讨论
从天然植物中寻找具有抗癌作用强、抗癌谱广、
副作用小的天然活性化合物是抗癌药物研究的重要
途径。近年来的研究表明植物中的三萜皂苷具有较
强的抗肿瘤作用[5-7],多数已作为抗癌中药试用于临
床[8]。茅莓作为悬钩子属植物仅在民间作为抗肿瘤
中草药应用。近几年的研究发现茅莓提取物中含有
多种三萜类化合物[9-10],而国内至今未见有关抗肿瘤
作用的实验研究。
本研究结果表明,通过MTT比色法检测茅莓总
皂苷的体外抗肿瘤作用,其高中浓度组对A375黑
色素细胞瘤细胞和Hut-78人皮肤 T细胞淋巴瘤两
种皮肤肿瘤细胞有明显抑制作用。与对照组相比,差
异有统计学意义(P<0.05);茅莓总皂苷对A431人表
皮癌细胞无明显抑制作用。但其体内抗肿瘤作用如
何,其作用机制是什么,需进一步研究。
本研究结果为茅莓的临床抗肿瘤应用及抗肿瘤
活性成分的进一步分离筛选提供了依据和资料。
表1 茅莓总皂苷对人皮肤T细胞淋巴瘤细胞增殖的影响
(x±s)
表2 茅莓总皂苷对黑色素细胞瘤A375细胞增殖的影响
(x±s)
注:与对照组5比较,[P<0.05。
注:与对照组5比较,[P<0.05。
组别
1
2
3
4
5
药物
CTX
茅莓总皂苷
茅莓总皂苷
茅莓总皂苷
对照组
剂量
1.5mg%
1mg%
100μg%
10μg%
A值
0.545±0.101[
0.690±0.122[
0.778±0.095[
0.870±0.116
0.906±0.093
表3 茅莓总皂苷对人表皮癌A431细胞增殖的影响(x±s)
注:与对照组5比较,[P<0.05。
组别
1
2
3
4
5
药物
CTX
茅莓总皂苷
茅莓总皂苷
茅莓总皂苷
对照组
剂量
1.5mg%
1mg%
100μg%
10μg%
A值
0.551±0.091[
0.690±0.125[
0.772±0.087[
0.885±0.123
0.911±0.089
组别
1
2
3
4
5
药物
CTX
茅莓总皂苷
茅莓总皂苷
茅莓总皂苷
对照组
剂量
1.5mg%
1mg%
100μg%
10μg%
A值
0.548±0.101[
0.869±0.109
0.884±0.118
0.876±0.097
0.911±0.093
[1]
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[3]
参考文献:
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(收稿日期:2007-02-27 修回日期:2007-05-09)
[4]
[5]
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[7]
[8]
[9]
[10]
1 临床资料
患者男,58岁。因神志不清 1h来我院急诊内科就诊。
2h后出现深度昏迷、呼吸困难,即送神经内科病房,按首诊
“脑梗死”对症处理。根据家属回忆,患者两个月前出现烦躁
不安,反应迟钝,缄默不语,行走不稳。1周前出现头部疼痛,
双手发抖。患者近10年有多名婚外性伴和多次不洁冶游史。
入院后头颅 CT检查示:由于患者不配合,伪影较多,第 5第
6脑室形成。血常规中白细胞 12.10×109/L,中性粒细胞占
81.10%,C反应蛋白93mg/L。血液快速血浆反应素环状卡片
试验(RPR)1:16(+)、梅毒螺旋体血凝试验(TPPA)(+)、人类
免疫缺陷病毒 (HIV)(-),脑脊液白细胞400个/L、蛋白质
850mg/L、血清快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)1:8(+)、
梅毒螺旋体血凝试验 (TPPA)(+)、性病实验室玻片试验
(VDRL)(+)。血气分析示:呼吸性酸中毒。体格检查:血压
95/60mmHg(1mmHg=0.133kPa),心率58次/min。呼吸机辅
助呼吸,神志不清,查体不配合,双侧瞳孔对光反射存在,四
肢肌力Ⅲ-Ⅳ级,二头肌、三头肌、桡骨膜、腹壁、膝踝反射存
在,病理反射未引出,脑膜刺激征(-),皮肤划痕试验(-),全
身未见特殊皮肤损害,无硬下疳、扁平湿疣及腹股沟淋巴结
肿大等。
诊断:神经梅毒(脑膜神经型)
治疗及结果:给予强的松 30mg/d连用 3d后,予以水剂
青霉素 2400万 U/d,分 4次静脉点滴,连用 20d,同时配合
甘露醇、丹参等治疗,呼吸机辅助维持呼吸功能。治疗第7天
神志恢复、呼吸平稳。第10天停用呼吸机,神志清晰、对答切
题。第15天可下床行走,生活自理。第20天自动出院。后改
用长效青霉素240万U/周,连用3周。
2 讨论
临床上把神经梅毒分为无症状神经梅毒、脑膜神经梅毒、
脑膜血管梅毒、脑实质型梅毒、神经系统树胶样肿五大类[1]。
临床上多表现为精神症状和神经损害的定位体征。神经梅毒
的诊断主要依据梅毒感染史、既往史、神经系统临床表现、梅
毒血清学检查、脑脊液检查,尤其是脑脊液的 VDRL是最有
准确性和特异性的实验室指标。
本例患者有神经、精神症状,RPR、TPPA(+),脑脊液RPR、
TPPA、VDRL均(+),有不洁性生活史,据此神经梅毒诊断
明确。
神经梅毒的治疗以水剂青霉素为主一般以 1200～2400
万 U/d,分 4～6次肌肉注射或静脉滴注,为预防吉-赫氏反应
可于治疗前口服强的松30mg/d,连用 3～5d。本例患者经正
规治疗后神志恢复,呼吸自如,行走如常,疗效明显。
值得引起重视的是神经梅毒的初诊误诊率很高,有报道
误诊率达67%[2]。可见神经梅毒的诊断在临床中极易被忽视,
尤其在内科中临床表现与脑梗死、病毒性脑膜炎相似。本例
患者也是在工作中偶然发现 RPR阳性后,再进一步检查才
确诊。不然很可能造成漏诊,延误救治。建议加强对住院患者
梅毒血清的普查工作。
内科诊治神经梅毒1例
徐东,宁苏莉
(上海市第八人民医院皮肤科,上海 200235)
关键词:神经梅毒;治疗;病例报告
中图分类号:R759.1+3 文献标识码:B 文章编号:1672-0709(2007)02-0069-01
·病例报告·
[1]
[2]
参考文献:
施辛,张秉正.神经梅毒临床特征与处理[J].中国皮肤性病学杂
志,2001,15(3-4):205-206,280-282.
罗成宏,朱东铭.神经梅毒9例临床分析.实用医学杂志[J].2006,
22(9):1044-1045.
(收稿日期:2007-03-02 修回日期:2007-04-26)
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