全 文 ：收稿日期:2000-12-13初稿;2001-01-15修改稿
　食用菌学报　2001.8(2):19～ 23
　Acta Edulis Fungi
野生洛巴伊口蘑菌株的分离与鉴定
刘月廉　谭树明　温美英　梁恩义
(湛江海洋大学农学院 , 广东湛江　524088)
摘　要　采用 3 种不同分离方法和 3 种不同培养基鉴定了洛巴伊口蘑野生子实体分离菌株。
结果表明 ,不同的分离菌株与培养基组合 , 其菌丝生长势与长速差异显著 , 根据形态特征和培养特
性 ,所分离的菌株被鉴定为洛巴伊口蘑。
关键词　洛巴伊口蘑;分离;鉴定
洛巴伊口蘑(Tricholoma lobayense Heim)又名大口蘑(T .spetabil is)、大白口蘑(T .gi-
ganteum)〔1～ 3〕 ,属于担子菌亚门(Basidiomycotina), 伞菌目(Agaricales), 口蘑科(Tricholo-
maceae),口蘑属(Tricholoma),是一种热带菌根菌。该菌无毒 ,可食 ,味鲜美 ,肉质肥厚嫩滑 ,
具有较高的经济价值 。1991 年 ,Ganeshan 曾用稻草对该菌做过人工栽培试验〔4〕;1998 年 ,
David N.Pegler ,D.Jean Lodge和 Karen K.Nalasone 对该菌进行分类〔5〕;1994年 ,卯晓岚在香
港发现了该菌〔6〕;1998年 ,郭翠英在厦门发现了该菌〔7〕;1998年 10月 15日 ,我们在湛江海洋
大学校园内发现了该菌。该菌发生于距凤凰树〔Delonix regia (Bojier)Raf.〕树干约 3m 的地
上。当日我们采回进行分离试验和鉴定 ,现将结果报道如下 。
1　材料与方法
1.1　菌株
菌株系野生子实体分离菌株。
1.2　分离母种培养基和制作方法
1.2.1　培养基配方(B)　B1:PDA;B2:棉籽壳 25g ,葡萄糖 2g ,琼脂 2g ,水 100mL , pH 自然;
B3:稻草 10g ,葡萄糖 2g ,琼脂 2g ,水 100mL ,pH 自然 。
1.2.2　制作方法　B1按常规 PDA 制作方法制备。B2 、B3 分别将棉籽壳或稻草煮汁 ,取滤汁
加入其他成分煮溶 ,分装 ,灭菌 。
1.3　分离方法(A)
将采集的野生子实体按菌盖组织分离(A1);菌柄组织分离(A2);菌褶孢子弹射(A3 ,菌褶
贴于斜面培养基对面的管壁上)3种方法进行分离。
1.4　分离方法与培养基组合试验
参考文献〔9〕,将野生子实体进行分离方法 A 与培养基 B两因素组合培养试验 ,共设置
A1B1 、A1B2 、A1B3 、A2B1 、A2B2 、A2B3 、A3B1 、A3B2和 A3B3 9个组合。
DOI :10.16488/j.cnki.1005-9873.2001.02.004
1.5　人工栽培子实体
1.5.1　母种　采用 A1B1组合中第一个重复分离培养所得的菌株为母种 。
1.5.2　原种　原种培养基配方:棉籽壳 74%,谷壳 10%,麦麸 15%,石膏粉 1%。含水量调至
65%,装瓶灭菌 ,接种 ,培养。
1.5.3　子实体培养　按原种培养基配方拌料 ,含水量 65%,装袋灭菌 ,接种 ,发菌满袋后 ,脱
袋覆土 ,保湿。
1.6　鉴定
1.6.1　营养菌丝形态观测　A1B1 平板培养纯菌丝直接置于光学显微镜下 ,观测其锁状联合
存在情况 。
1.6.2 子实体形态观测　肉眼观测野生子实体和人工栽培子实体的外表形态和孢子印 ,电镜
和光学显微镜观测担孢子和侧生囊状体 。
2　结果与分析
2.1　分离结果
分离结果见表 1〔1〕 。三种培养基中 ,不论采取何种分离方法(A1 、A2 或 A3)分离的菌株 ,都
以棉籽壳培养基(B2)上菌丝生长最旺盛 ,菌丝粗壮浓白 ,生长速度最快 ,与 PDA培养基(B1)和
稻草培养基(B3)上菌丝的生长势与长速有极显著的差异(表 2 、3)。三种分离方法中 ,不论采
取何种培养基(B1 、B2 、B3),均以菌盖组织分离(A1)和菌柄组织分离(A2)方法分离菌株的菌
丝浓白粗壮 ,生长速度快 ,与孢子弹射法(A3)分离菌株菌丝的生长势与长速有显著的差异
(表 2 、4)。
不同分离方法与不同培养基培养交互作用结果表明(表 5),菌柄组织(A2)和菌盖组织
(A1)在棉籽壳(B2)和稻草(B3)培养基上菌丝生长最快 ,与其他组合有极显著的差异。而菌褶
组织(A3)在稻草(B3)培养基上无菌落出现 。各组合菌丝生长速度依次为:A2B2>A1B2 >A1B3
>A2B3>A2B1>A1B1>A3B1>A3B2>A3B3 。
2.2　形态特征
2.2.1　分离菌株营养菌丝的形态特征　在 PDA平板中培养的菌落呈白色 ,棉絮状 ,放射状生
长不明显 。光学显微镜下 ,菌丝无色透明 ,有分枝 ,锁状联合少。
表 1　不同组合的菌丝生长速度(mm/ d)1)
Table 1　The mycelial growth rate of the combinations of A and B factors(mm/ d)
B
A1
R1 R2 R3
XA 1
A 2
R1 R 2 R3
XA2
A 3
R1 R2 R3
XA 2
B1 24 29 19 24 26 19 37 27 8 8 18 11
B2 73 39 60 57 49 75 57 60 14 12 5 10
B3 49 44 57 50 53 35 39 42 0 0 0 0
　　1)　R1 、R2 、R3:重复　R1 , R2 , R3=Repeti tion
2.2.2　野生子实体形态特征　野生子实体丛生(图 1)。菌盖宽 8 ～ 14cm ,半球形 ,后平展 ,白
色 ,边缘平滑 ,干燥。菌盖最外皮层组织为一层油状胶质 ,在 10×40倍显微镜下呈小颗粒状 。
菌肉薄 ,白色 ,味香。菌褶宽 0.5 ～ 0.8cm ,白色 ,弯生 ,不等长 ,褶缘平整 。菌柄长 5 ～ 12cm ,粗
2 ～ 4cm ,白色 ,直 ,中生 ,基部显著肥大 ,中实。孢子印白色(图 2)。孢子无色 ,卵形 ,表面光滑 ,
20 　　　　　　　　　　食　用　菌　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　8 卷
2.35 ～ 3.38×2.79 ～ 4.68μm(图 3)。担子棒状 , 2.34 ～ 3.55×6.56 ～ 7.86μm 。无侧生囊状
体。非淀粉质。
图 1　洛巴伊口蘑野生子实体
Fig.1　The wild fruitbody of T .lobayense
图 2　洛巴伊口蘑孢子印
Fig.2　The spore print of T.lobayense
表 2　方差分析
Table 2　Variance analysi s
变异来源　Source of variation SS DF MS F F0.05 F0.01
A 7922 2 3961 84﹡﹡ 3.55 6.01
B 2141 2 1070.5 23﹡﹡ 3.55 6.01
A×B 1579 4 393.5 8﹡﹡ 2.51 3.71
误差　E rror 846 18 47
总变异　Total variat ion 12483 26
表 3　A因素的不同水平比较1)
Table 3　The comparison of di fferent levels in factor A
A XA Xi-7 Xi-43
A 1 44 37﹡﹡ 1
A 2 43 36﹡﹡
A 3 7
　　1)　LSR0.05(2 , 18)=6.8;　LSR0.01(2 , 18)=9.4
表 4　B因素的不同水平比较1)
Table 4　The comparison of di fferent levels in factor B
B XB Xi-21 Xi-31
B2 43 22﹡﹡ 12﹡﹡
B3 31 10﹡
B1 21
　　1)　LSR0.05(2 , 18)=8.3;　LSR0.01(2 , 18)=10.8
表 5　各组合菌丝日均长速比较(mm/ d)1)
Table 5　The comparison of the dai ly average growth rate of the mycelium in different combinations(mm/ d)
组合
Combinations
均值
Xi Xi-0 Xi-10 Xi-11 Xi-24 Xi-27 Xi-42 Xi-50 Xi-57
A 2B2 60 60﹡﹡ 50﹡﹡ 49﹡﹡ 36﹡﹡ 33﹡﹡ 18 10 3
A 1B2 57 57﹡﹡ 47﹡﹡ 46﹡﹡ 33﹡﹡ 30﹡﹡ 15 7
A 1B3 50 50﹡﹡ 40﹡﹡ 39﹡﹡ 26﹡﹡ 23﹡ 8
A 2B3 42 42﹡﹡ 32﹡﹡ 31﹡﹡ 18 15
A 2B1 27 27﹡﹡ 17 16 3
A 1B1 24 24﹡ 14 13
A 3B1 11 11 1
A 3B2 10 10
A 3B3 0
1)　LSR0.05(9 , 18)=19.84;　LSR0.01(9 , 18)=24.32
212 期　　　　　　　　　　　　　刘月廉等:野生洛巴伊口蘑菌株的分离与鉴定
2.2.3　人工栽培子实体形态特征　人工栽培子实体菌柄大多数中生 ,少数偏生(图 4)。其他
形态特征与野生子实体的相似 。菌柄 、菌肉味道鲜美 ,质地脆爽 ,清甜可口。人工栽培子实体
的担孢子和孢子印与野生子实体的相一致 ,因此 ,根据分离菌株菌丝体形态特点和人工栽培子
实体形态特征 ,担孢子形态 、大小 ,孢子印颜色等 ,说明我们分离的菌株正是洛巴伊口蘑野生子
实体重复分离培养所得的菌株 。
图 3　洛巴伊口蘑孢子
Fig.3　The spores of T.lobayense
图 4　洛巴伊口蘑菌柄
Fig.4　The stipe of T .lobayense
2.2.4　分析与鉴定　经观测与培养 ,我们所采集的野生子实体及从其分离培养得到的菌株的
菌丝体形态特征和子实体形态特征 ,担孢子形态 、大小及孢子印颜色均与黄年来〔1〕 、卯晓
岚〔2 ,6〕 、郭翠英〔7〕、应建淅〔8〕等人描述的洛巴伊口蘑形态特征相近 ,因而将该菌鉴定为洛巴伊
口蘑 。洛巴伊口蘑学名为 Tricholoma lobayense Heim ,同种异名的有大白口蘑(T .gigan-
teum Massee)和大口蘑(T .spectabilis Peerally et Sut ra)〔1 ～ 4、6〕。该菌在雷州半岛为首次发现 。
3　讨论
试验结果表明 ,选择洛巴伊口蘑野生子实体的菌盖和菌柄作组织分离部位 ,用棉籽壳或稻
草煮汁培养基培养 ,菌丝生长旺盛 ,浓白粗壮 ,生长速度快 。这说明洛巴伊口蘑菌柄的菌丝同
样也具有较强的生活力 ,这与常规子实体组织分离选取的部位有所不同。另一方面也说明 ,
PDA 是常规的食用菌母种培养基 ,但却不是洛巴伊口蘑的最适母种培养基 。
根据我们的实验结果 ,鉴定所分离的菌株为洛巴伊口蘑。而 David N.Peg ler , D.Jean
Lodge〔5〕(1998)认为 ,洛巴伊口蘑即为洛巴伊大头菇〔Macrocybe lobayensis(R.Heim)Pegler et
Lodge〕;大白口蘑(T .giganteum Massee)即为白大头菇〔M .giganteum (Massee)Pegler et
Lodge〕;大口蘑(T .spectabi lis Peerally et Sut ra)即为大头菇〔M .spectabi lis(Peerally et Sutra)
Pegler.〕。它们的营养菌丝具有锁状联合 ,呈现非菌根菌的特点 ,将它们归入大头菇属而非口
蘑属 ,并作为三个不同种来重新分类。根据我们的实验结果 ,分离培养菌株的营养菌丝锁状联
合少 ,到目前为止 ,发现国内报道的洛巴伊口蘑均与凤凰树有联系〔1～ 3 ,6 ～ 8〕 ,因此 ,还不能确定
洛巴伊口蘑为非菌根菌 ,需做进一步的研究。由此可见 ,国内报道的洛巴伊口蘑与 David N.
Pegler , D.Jean Lodge 报道的洛巴伊口蘑存在较大的差异。
致谢:本研究得到黄年来先生指导 ,湛江师院协助电镜拍摄 ,谨此一并致谢 !
22 　　　　　　　　　　食　用　菌　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　8 卷
参　考　文　献
1　黄年来.中国大型真菌原色图鉴.北京:农业出版社 , 1998.127.
2　卯晓岚.中国经济真菌.北京:科学出版社 , 1998.67.
3　毕志树 , 郑国扬 ,李泰辉.广东大型真菌志.广东:广东科技出版社 , 1994.344～ 345.
4　Ganeshan G.Cultivation of Tricholoma lobayense Heim on paddy straw substrate.Mushroom Journal fo r the
T ropics , 1991 ,(10):31 ～ 33.
5　David N.Peg ler , D.Jean Lodge , Karen K.Nalasone The pantropical genus Macrocybe gen.nov.Mycologia ,
1998 , 90(3):494～ 504.
6　卯晓岚.香港蕈菌再探.中国食用菌 , 1994 , 3(3):中心插页.
7　郭翠英.厦门发现洛巴口蘑.食用菌 , 1999 , 21(6):3.
8　应建淅 , 藏穆.西南地区大型经济真菌.北京:科学出版社 , 1994.218 ～ 225.
9　贵州农学院主编.生物统计附试验设计.北京:农业出版社 , 1980.
A Study on the Isolation and Identification
of Wild Tricholoma lobayense Strain
Liu Yuelian　Tan Shuming　Wun M eiying　Liang Enyi
(Agricultural College , Zhanjiang Ocean University , Zhanjiang　524088)
Abstract　Three isola tion methods and three different kinds of media were used to identify the iso lated strains
of one wild Tricholoma lobayense fruitbody.The result showed that the mycelial vigour and g rowth rate of the dif-
ferent combinations o f isolated strains and media were significantly different.Acco rding to the morphological and
cultural characteristics , the iso lated strains were identified as T.lobayense.
Key words　Tricholoma lobayense;Isolation;Identification
232 期　　　　　　　　　　　　　刘月廉等:野生洛巴伊口蘑菌株的分离与鉴定