全 文 ：92 0 中国新药与临床杂志 (C h in J N e w D ru g s C l in R e m ) , 20 06 年 12 月 ,第 2 5 卷 第 12 期
〔文章编号 」10 1一96 69 ( 2 0 0 6 ) 1 2一09 20一04
茅葛水提取物对大鼠局灶性脑缺血一再灌注的保护作用
王继生 ’ , 李惠芝 , 郑宗荫 , 夏永鹏 , 任凌燕 , 周成林
(重庆医科大学 药学系 , 重庆 4 0 0 0 16)
〔关键词 ] 梗塞 , 大脑中动脉 ; 再灌注损伤 ; 脑梗死 ; 超氧化物歧化酶 ; 丙 二醛 ; 谷胧甘肤过氧化物酶 ;
茅毒
〔摘要 1 目的 : 研究茅琴水提取物对局灶性脑缺血 一再灌注 的保护作用 。 方法 : 采用大脑 中动脉线栓法制
备大 鼠局灶性脑缺血 / 再灌注模型 ; 以 H E 染色观察神经元形态病理改变 , 用氯化三 苯 四氮哇 ( rT C ) 染
色法测定脑梗死 范围 , 采用测试 药盒测定超氧化物歧化酶 ( S O D ) 、 谷胧甘肤过氧化物酶 (G S H一xP ) 活
性 、 丙二 醛 (M D A ) 含量 。 结果 : 茅毒水提取物 1 , 2 m .L k g 一 , 可 明显减轻神经元形态病理改变 , 改善大
鼠异常神经症状 , 使脑缺血一再灌注 大鼠缺血 区脑组 织的 SO D , G SH 一xP 活力提高 , M D A 含量减少 。 结论 :
茅毒水提取物对脑梗死有保护作用 , 其作用机制可能与抗 自由基有关 。
[中图分类号 ] R 2 8 5 . 5 【文献标识码】 A
P r of e e it v e e fe
c t s o f a qu e o u
s e x t r a e t o f R u b u s P a Vr 价d ilu s o n m id dl e e e r e b r a l
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〔K EY WO R D S」 i n af r e ti o n , m idd l e e e r e b r a l art 卿 : er p e fur s i o n inj u叮 ; b ar i n i n af cr ti o n ; s u p e or x id e d i s -
m u t a s e : am l
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仁A B S T R A C T 〕 A I M : oT o b s e vr e t h e p or t e e t i v e e fe e t s o f a q u e o u s e x t ar e t o f R u bus P二尹o l ius o n m idd l e
e e er b r a l a rt e yr o e e l u s i o n a n d er P e fur
s i o n inj
u汀 i n r a t s . M ET HO D S : T h e a n im a l m o d e l s o f m id dl e e e er b r a l
a rt e叮 o e e l u s i o n ( M AC O ) w e er e s t a b l i s h e d w i th 叮 l o n th r e a d s i n art s . T h e p a th o l o g i e e h a n ge s w e er o b s e vr e er d
b y H E s ta i n i n g
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G S H
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RE SU LT S
: In t h e g or u P o f a q u e o u s e x tar e t of
R u b。 夕二尹o l ius ( 1 , 2 m L · k g 一 , ) , th e Pat h o l o g i e e h a n g e s of n e u r o n an d ab n o o a l s y m p t o m w e er s l ihg il y , th e
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CO N
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C L U S IO N : hT
e a q u e o u s e x tar e t o f R u b u 、 P二价。 l ius h a s t h e P r o t e e t iv e e fe e t s a g a i n s t e e r e b ar l ianf cr t i o n a n d
th e m e e h a n i s m m a y b e er l a te d t o th e a n ti
一
fr e e r a d i e a l a e t iv i t i e s
.
〔收稿 日期 } 20 05一 0 9一 1 3 [接受 日期】 20 06一 10一 09
「基金项 目1 重庆市重大科技专项资助课题 〔渝科发计字 ( 2 004) 27 号 ]
t作者简介l 王继生 ( 197 4一 ) , 男 , 四川人 , 博士 , 主要从事抗脑缺血的新药开发 。
[联 系人 1 李惠芝 。 P h n : 86一2 3一684 8一57 27 。 F a x : 86一2 3一684 8一53 78 。 E · m a i l : z o n群 in @ s o h u . e o m
,现在 : 四川省绵阳市第三人民医院药剂科
中国新药与临床杂志 ( Ch in J N e w D ru邵 C l in R e m ) , 2 0() 6 年 12 月 ,第 2 5 卷 第 12 期
茅葛 (别名 天青地 白草 、 红梅消 、 三 月泡 )
为蔷薇科植物茅毒 ( R砧 us p二尹ol ius L ) 的茎叶 。
据 《本草拾遗》 记载 , 具有止血活血 、 散痪定痛 、
清热解毒之功效 , 可内服 、 外敷 。 以往用于治疗
吐血 、 跌打刀伤 、 产后癖滞 腹痛 、 痢疾 、 痔疮 、
疥疮等 , 民间还用其根治疗女性月经过多 l[J 。 已有
研究表明茅葛水提取物对脑缺血有很好的保护作
用 12 }。 对脑缺血一再灌注动物是否有保护作用未见
文献报道 。 本实验采用大脑中动脉线栓法 ( M A -
C O ) 建立大鼠局灶性脑缺血一再灌注模型 , 观察茅
蓦水提取物对脑缺血一再灌注大鼠的保护作用 , 并
对其机制作初步探讨 。
材料与方法
动物 SD 大 鼠 , 占 , 体重 ( 3 0 0 士 5 2 0 ) g , 购于
第三军医大学大坪医院实验动物中心 , 合格证号 :
S CX K (渝 ) 2 0 0 10 0 3 , 清洁级 。
药品和试剂 茅毒水提取物 由重庆医科大学药物
分析教研室提供 ( 1 k g’ L一 , , 水提物 ) ; 氯化三苯四
氮哩 ( TT C ) , 中国医药上海化学试剂公司 (批号
2 0 0 3 0 9 15 ) ; 超氧化物歧化酶 ( SO D ) 测定试剂盒
(批 号 2 0 0 4 1 10 6 ) , 丙二 醛 ( M DA ) 测定 试 剂盒
(批号 2 0 0 4 1 2 1 7 ) , 谷胧甘肤过氧化 物酶 ( G S H 一
xP ) 测定试剂盒 (批号 2 0 041 0 2 6 ) , 均购 自南京建
成生物工程研究所 。 尼莫地平 ( in m do ip ine ) , 原料
药 , 重庆科瑞制药有限公司 (使用前配制成 or g’
L
一 , , 批号 2 0 0 4 0 8 19 ) 。 其他试 剂均为国产 A R 纯
试剂 。
大 鼠局灶性脑缺血 一再灌注模型制备 按 LO N GA
等方法 3tJ 略有改进 , .3 5 %水合氯醛 10 m L · k g 一 , 腹
腔注射麻醉大 鼠 , 仰位 固定 。 颈正中切 口 , 锐钝
结合分离颈部筋膜 , 暴露右侧颈总动脉 ( C CA ) 、
颈内动脉 ( CI A ) 、 颈外 动脉 ( E CA ) ; 由 C CA 分
叉处向头端依次游离 , 电凝 E CA 所有分支 , 在 甲
状腺上动脉远端结扎 、 切断 E CA , 使其主干游离
备用 ; 用蛙心夹暂时夹闭 CC A 和 CI A , 用剪刀在
ECA 残端剪一小 口 , 将预先制备好的头端涂有 聚
氨酪的尼龙线插人 CI A (涂有肝素 ) , 缚 紧 E C A
残端丝线 以防线栓滑 出和出血 , 移去蛙心夹将线
栓缓慢沿 CI A 人颅方 向推进 , 推进约 1 . 7 一 .2 0 c m
时感到阻力 , 表明线栓 已经通过大脑 中动脉的起
始部 , 完成 一侧大脑 中动脉 的阻塞 ; 松 开夹 闭
CC A 的蛙心夹 , 清理术野 , 全层缝合 , 关闭切口 ;
大脑中动脉阻塞 Z h 后打开手术切 口 , 轻轻拔 出线
栓 , 微感 阻力时停止 , 实 现再 灌注 , 清理术野 ,
关闭切 口 。 假手术组插人尼龙线推进约 3 一 4 m m ,
即拔出 , 其余操作相同 。 再灌注 24 h 。
分组及给药方法 SD 雄性大鼠 9 0 只 , 实验动物随
机分为 5 组 , 每组 18 只 : 假手术组 , 缺血再灌注
组 , 缺血再灌注 + 茅毒水提取物 1 , 2 m L · k g 一 , 组及
尼莫地平 1 m L · k g 一 , 组 , 各 给药组 均于 M A CO 前
3 d 灌胃给药 , 每 日 1 次 , 共 3 d 。 最后一次给药
后 l h 制备模型给药 , 缺血再灌注组 , 假手术组灌
等量的生理盐水 。
标本制备 大鼠于缺血 Z h 再灌注 2 4 h 后 , 将其
麻醉 , 开胸经心脏灌流生理盐水 , 然后以 4 %多聚
甲醛溶液灌流固定 , 断头取脑 。 每组 大鼠分为 3
部分 : 第 1 部分用于 H E 染色 , 光镜观察组织病理
学变化 ; 第 2 部分检测 M A CO 后神经行为学改变
及脑梗死 区重量 ; 第 3 部分 M A C O 后取脑制备组
织匀浆 , 测定 SO D , G SH一 xP 活性和 M D A 含量 。
行为学评分 M A CO 后大鼠清醒 , 按 LO N C A 等 l3]
的 5 分制行为评分 。 评分标准 : 0 分 , 正常 , 无神
经损 伤症状 ; l 分 , 不能完全 伸展左侧前爪 ; 2
分 , 向外侧转圈 ; 3 分 , 向对侧倾倒 ; 4 分 , 不能
自发行走 , 意识丧失 。 积分越高 , 说明动物行为
障碍越严重 。
梗死范围评定 术后 24 h 断头评分后大 鼠断头取
脑 , 去除嗅球 、 小脑和低位脑干 , 然后切下厚约
2 m m 冠状脑片 , 立刻置于 2 % 氯化三苯四氮哇溶
液 中 , 37 ℃孵育 3 0 m in 。 梗死 区呈现 白色 , 非梗
塞区呈现红色 。 用 T D Zo o 图像分析系统测出各层
的梗死 面积 , 总 面积 之 和 乘 以层 厚 即为 体 积
(m m 3 ) l4}
, 观察茅毒水提取物局灶脑缺血大鼠梗死
灶体积变化 。
脑组织匀浆 S O D , G S H · xP 活性和 M D A 含量测
定 术后 2 4 h 断头取双侧大脑皮层 , 置冰冷生理
盐水洗去浮血 , 按脑重与匀浆介质体积比 1 : 9 制
备 10 %匀浆 , 经 10 00 0 x g 离心 10 m i n , 取上清
液 , 以牛血清蛋 白为标准品 , 用考马斯亮蓝法测
定各样品中蛋 白质含量 , 按试剂盒说明书测定脑
组织 SO D , G SH 一xP 活性和 M D A 含量 。
统计学处理 各组数据用实验数据用 S PsS 12 .0 统
计分析软件进行分析 , 神经功能缺损评分采用非
参数检验 中的 m a n n 一 w h i ti n a y U 方法 。 脑梗死体积
比较采用单 因素方差分析 , 两两比较采用 tS du e nt -
N e w m a n
一
k e u l s ( SN K ) 方法 。
中国新药与临床杂志 ( C h in J N we Dru邵 C l in R e m ) , 200 6 年 12 月 ,第 2 5 卷 第 1 2 期
结 果
组织学改变 假手术组 : 手术侧半球神经细胞形
态无异常 , 胞膜 、 核膜清晰 , 核仁明显 。 缺血再
灌注组 : 缺血对侧神经元形态正 常 , 核仁清楚 。
缺血区神经细胞呈不同程度的缺血性改变 。 表现
为胞体皱缩呈三角形 , 核固缩或溶解 ; 中心 区神
经元脱 失明显 , 残存 细胞多无完 整的细胞结构 ,
缺血周边区皮层未见明显神经元脱失 。 缺血再灌
注 + 茅葛水提取物和尼莫地平组 : 神经细胞仅有
轻 、 中度缺血性改变 , 细胞肿胀程度 、 间隙及胞
核改变均较对照组轻 , 缺血中心区神经元脱 失现
象 明显减轻 , 周边 区皮层细胞 的形态接近正 常 。
见图 1 。
茅毒水提取物对 M A C O 大鼠行为学改变的影响
M A CO 术后 , 缺血组动物表现出明显的神经运 动
功能障碍 , 提鼠尾可见其左前肢收 紧贴胸壁 , 左
侧肢体肌力下 降 , 行走时偏向左侧 ; 茅蓦水 提取
物 1 , Z m .L k g 一` 组和尼莫地平组不 同程度地 改善
M A C O 大鼠的神经行为障碍 。 见图 2 。
茅萄水提取物对 M A C O 大鼠脑梗死组织体积的影
响 MA CO Z h 后再灌 24 h , 缺血组有明显 的脑梗
死 , 茅毒水提取物 1 , Z m L · k g 一 , 组和尼莫地平组
均可明显减轻缺血大 鼠脑梗死组织重量 。 见图 3 。
茅毒水提取物对 M A C O 大 鼠脑组织匀浆 SO D 和
G S H
·
xP 活性 、 M D A 含量的影响 缺血组脑组织
SO D
,
G S H 活性明显低于假手术组 , M D A 含量 明
显高于假手术组 , 各给药组脑组织 SO D , G SH 活
性较缺血再灌注模 型组明显升高 , M DA 含量 明显
降低 , 差异有显著意义 。 见表 1。
表 1 茅毒水提取物对缺血 Z h 再灌注 24 h 大鼠脑组 织中
SO D
,
G S H 活性 和 M D A 含一的影响 ( n 二 10 , 无 士 s)
组别 剂量 / S O D /
m L
`
k g
一 1
k u
·
L
一 ,
G S H /
m g
.
9 一 !
假手术
缺 血再灌注
缺血再灌注 十
茅毒水提取物
7 7 土 7
4 9 士 了
19 士 6
8 士 3哎
M D A /
n nr o l
·
L 一 I
2
.
5 士 0 . 4
3 6 士 0
. 今
6 9 士 1 l e 13 士 律 2 . 6 土 0 . 8 e
7 3 土 g r 10 土 3 r 2 1 士 0
.
7 f
缺 血再灌注 十
尼莫地平 6 8 土 泞 13 士 牢 2 4 士 0
.
4 f
定量数据采用方差分析 , 当 P < .0 05 时 , 再用 S N K 法两两 比
较 。 缺血再灌 注组与假手术组 比较 : 甲 < 0刀 1 ; 缺血再灌注 十茅毒
水提取物组 、 尼莫地 平组与缺血模型组比较 : 甲 < 0 .0 5 , fP < 0 .0 1
图 1 局灶性脑缺血 Z h /再灌注 2 4 h 各组病理改变 《H E 染
色 x 2 00) A : 假手术组 ; B : 缺血 再灌注 ; C : 缺 血再灌
注 + 茅毒水提取物 l mL · kg 一 , 组 ; D : 缺血再灌注十茅毒水提 取物
2 mI
J ·
k g
一 l 组 ; E : 缺血再灌注+ 尼莫地平组
中国新药与临床杂志 (C hi n J Ne w Dus r gC li n Re m) , 200 6 年 12 月 ,第 25 卷 第 12 期
组别
图 2 茅落水提取物对缺血 Z h 再灌注 24 h 大鼠神经学评分
的影响 ( n 二 引 A : 假手术组 ; B : 缺血再灌注 ; C : 缺血
再灌注 十茅毒水提取物 1 m L · k g 一 `组 ; D : 缺血再灌注 十茅毒水提取
物 Z m L · k岁 组 ; E : 缺血再灌 注十尼莫地平组 。 经秩 和检验 : 缺血
模型组与假手术组 比较 , 甲 < .0 01 ; 茅毒水提取物组 、 尼莫地平组
与缺血模型组比较 , 的尸 < .0 0 5 、 沪 < .0 01
图 3 茅毒水提取物对缺血 Z h 再灌注 24 h 大 鼠脑梗死组织
体积的影响 ( n 二 8) A : 假 手术 组 ; B : 缺血再灌注 ; C :
缺血再灌注 十茅萄水 提取 物 l mL · kg 一 , 组 ; D : 缺 血再灌注+ 茅落水
提取物 2 m .L k g 一 , 组 ; E : 缺血再灌注十尼莫 地平 组 。 经方差分析 ,
SN K 法两两 比较 : 缺血再灌注与假 手术组 比较 , 甲 < 住01 ; 缺血再
灌注十茅毒水提取物组 、 尼莫地平组 与缺血模型组比较 , 甲 < 欣 05
验中 , 对 L ON G A 法进行了改进 , 本实验模型只须
分离 出 IC A 1 c m 左右 , 不用至颅底和夹闭翼愕动
脉 。 在插人线栓的时候 , 将线栓的的 自然弯度调整
向上 , 利用其自然弯度轻松插人 , 模型制作时间不
超过 1 5 m i n , 成模率大于 9 0 % 。
本研究发现 , 茅薄水提取物 1 , 2 m .L k g一 ,组可
减轻脑梗死组织体积 , 有效改善 M A CO 大 鼠的神
经行为学障碍等 , 提示预先给予茅幕可以使缺血神
经元受到的缺血缺氧的应激打击减轻 。 从而减轻神
经元的缺血性损害 。 茅葛水提取物 1 , 2 m .L k g 一 ,
均能 明显提高脑缺血 一再灌 注损伤时脑组织 中的
SO D
,
G S H
一
xP 活性 , 降低脑组织的 M D A 含量 , 提
示茅毒水提取物 可能通过增强机体清除 自由基能
力 , 抑制脂质过氧化反应 , 而减轻脑组织的损伤 。
表明茅薄水提取 物对局灶性脑缺血有较好的保护
作用 。 该作用可 能与其抗 自由基 , 抑制脂质过氧
化反应有关 。 因脑缺血再灌注损伤 的机制非常复
杂 , 茅葛水提取 物对脑缺血动物的保护作用机制
还需要进行深入研究 。 茅蓦在全国各地分布广泛 ,
药源丰富 , 其临床开 发 、 研究应用具有广阔的前
景 。
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08642
飞它、彩耸
〔参考文献 ]
讨 论
线栓法是 K O I ZU M I 于 19 8 6 年首次报告 , 19 8 9
年 LO N G A 等团对其进行改进 。 自问世 以来 , 线栓
法 因无需开颅 、 对全身影 响小 、 缺血部位恒定 、
可进行再灌注损伤研究等优点而被广泛采用 5I] 。 但
LO N G A 法要求分离结扎 E C A 以及 CI A 的颅外分
支翼愕动脉 , 因大 鼠的解 剖特 点 , 手术视野小 ,
分离难度大 , 易出血 , 且需要显微器械 , 因此对
技术要求高 , 限制了它的推广应用 。 我们在本实
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J
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J
12
丹j,tóL.res
《中国药物滥用防治杂志》 2 0 7 年征订 该刊是经国家科学技术部批准 、 由卫生部主管 , 中国药物滥用防治协会 、 宁
波戒毒研究中心 主办的我国在药物滥用防治领域进行报道和交流的学术性期刊 。 该刊于 1995 年创刊 , 刊号为 : CN l l 一37 42/
R
, 双月刊 , 大 16 开 , 6 4 页 , 国内外公 开发行 , 邮发代号 : 82 一7 68 。 2 0 7 年全年定价 48 元 。 该刊设有法规 、 论著 、 综述 、
专题讲座 、 专论述评 、 论坛 、 临床报道 、 案例报道 、 基层园地及其他等栏 目 。 面向全国医疗卫生 、 公安 、 劳教 、 部队等戒毒
机构 , 社会医学及健康教育研究 、 宣传单位 , 各级卫生行政管理机构及大中专医学院校 。 邮局汇款 : 中国药物滥 用防治杂志
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