全 文 ：第 30 卷 第 10 期
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中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
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豨莶草对小鼠全脑缺血再灌注模型的药效学观察
韩蕾1，周晓辉2，王维伟1
(1．江苏建康职业学院药学系，江苏 南京 211800;2．中国药科大学临床药学教研室，江苏 南京 211198)
摘 要:目的:探讨豨莶草抗小鼠实验性全脑脑缺血再灌注损伤作用。方法:通过夹闭双侧颈总动脉的方法
制作小鼠全脑缺血再灌注模型，观察灌胃给予豨莶草 14g生药 /kg对脑组织 Evans蓝含量、SOD及 MDA水平的影
响。结果:豨莶草可降低缺血再灌注后模型动物的脑组织 Evans蓝含量，提高 SOD 活性，降低 MDA 水平。结论:
豨莶草能增加脑缺血再灌注模型小鼠抗氧化酶的活性，改善脑血流，减轻血脑屏障的损伤，对脑缺血再灌注损伤
具有一定的保护作用。
关键词:豨莶草;脑缺血再灌注;小鼠;抗氧化酶
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)10 － 2287 － 03
Observation on Effect of Herba Siegesbeckiae on Antioxidase during
Cerebral Ischemia －Reperfusion Injury in Mice
HAN Lei2，ZHOU Xiao-hui1，WANG Wei-wei2
(1． Jiangsu Jiankang Vocational College，Nanjing 211800，Jiangsu，China;
2． China Pharmaceutical University，Nanjing 211198，Jiangsu，China)
Abstract:Objective:To investigate the effect of Herba Siegesbeckiae(HS)on the antioxidase during cerebral ischemia
－ reperfusion injury in mice． Methods:The HS was repeated given orally in mice model of cerebral ischemia － reperfusion
injury in the EB － treated group． The contents of Evans blue and antioxidase in the brain tissue were changed． Results:
The cerebral blood flow in EB － treated group decreased after the ischemia － reperfusion injury． In the HS － treated
group，the antioxidase activity increased，and the content of malondialodehyde decreased． Conclusion:HS may protect the
brain from ischemia － reperfusion injury by increasing the activity of antioxidase，improving the cerebral blood flow，and al-
leviating the damage of blood － brain barrier．
Key words:Herba Siegesbeckiae;cerebral ischemia － reperfusion injury;mice;antioxidase
收稿日期:2012 － 05 － 09
基金项目:中国药科大学引进人才启动基金资助项目(01211100)
作者简介:韩蕾(1975 －) ，女，辽宁沈阳人，副教授，博士，研究方
向:中药药性理论、中药药理学。
脑血管疾病是临床常见急症，其发病率、死亡率高，致
残率和复发率也高，在我国现已居死因第 2 位。脑缺血约
占脑血管病 75%，脑缺血存活者中约有 3 /4 的存在着不同
程度的后遗症，严重影响着人们的生活质量。预防的发生、
减少缺血性脑血管病所致的残疾、加强缺血后的脑保护以
及脑血管病的康复医疗已成为目前亟待解决的问题。
在缺血性脑血管病的发生发展过程中，脑缺血再灌注
损伤是一个非常重要的病理过程。它也是一种复杂的病理
生理过程。近来研究发现，脑血流中断和再灌注损伤脑细
胞是一个快速的级联反应，这个级联反应包括许多环节，如
能量障碍、细胞酸中毒、兴奋性氨基酸释放增加、细胞内钙
失稳态、自由基生成、凋亡基因激活等。这些环节互为因
果，彼此重叠，并相互联系，形成恶性循环，最终导致细胞凋
亡或坏死。脑缺血过程中引起脑损伤的自由基主要为超氧
阴离子、OH －及过氧化氢(H2 O2)。在正常情况下，上述物
质在机体损伤的修复和调整中可依生理需要随时产生和释
放。生理条件下，氧自由基(ROS)的生成和清除能够保持
相对平衡。机体产生的少量自由基可被机体较强的防御系
统所抑制，不致引起病理效应。这些防御系统包括:自由基
生成抑制剂，如过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶
(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH － PX)等;清除自由基
的抗氧化物，如维生素 C、维生素 E 等。在脑缺血时，由于
SOD表达下调，抗氧化物减少，清除 ROS 的能力下降，ROS
的生成增多，通过损伤大分子物质及信号转导等途径造成
脑组织损伤［1］。许多中药具有减轻或防止缺血 －再灌注
损伤的作用。
豨莶草为常用中药，始载于唐代《新修本草》，《中华人
民共和国药典》2005 年版收载。其来源为菊科植物豨莶
(Siegesbeckia orientalis L．)、腺梗豨莶(Siegesbeckia pu-
bescens M．)和毛梗豨莶(Siegesbeckia glabrescens M．)3 种
植物的地上部分。豨莶草性味辛、苦、寒，归肝、肾经。具有
祛风湿、利关节、解毒之功效，可以治疗风湿痹痛、筋骨无
力、腰膝酸软、四肢麻痹、半身不遂、风疹湿疮等。豨莶划原
植物茎略呈方形，节明显，略膨大，叶对生，叶片两面被白色
柔毛，尤以叶脉多，主脉三出。总苞两层，叶质，外层线状匙
形，背部密生紫褐色头状具柄腺毛，具黄色的头状花序，叶
微苦。其植物资源分布为:豨莶分布秦岭及长江以南;腺梗
豨莶分布东北、华北、华东、华南、西南;毛梗豨莶分布长江
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DOI：10.13193/j.archtcm.2012.10.145.hanl.053
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以南及西南等地［2］。豨莶草传统用于治疗急慢性风湿性
关节炎、腰腿疼痛等症。随着现代科学的发展和研究的日
益深入，豨莶草的临床应用范围也逐渐扩大，用于治疗的疾
病可达十余种，尤其是在心血管方面，对高血压、冠心病、高
胆固醇血症、脑血管意外后遗症、面神经瘫痪等均有较好的
疗效［4］。豨莶草中主要含有二萜类、倍半萜类、黄酮类等
成分，现代药理学研究表明，豨莶草在心血管系统、抗炎、抗
病原微生物、免疫系统以及抗早孕方面均有良好的作
用［3］。已往的文献报道研究表明，家兔静脉注射豨莶草提
取物，可使血栓湿重明显减轻［5 － 6］。
本实验通过制作小鼠全脑缺血再灌注模型，通过考察
药物对模型动物脑组织匀浆中 SOD 活性，MDA 含量的变
化及 Evans蓝残留量的影响，评价豨莶草的抗脑缺血作用。
1 动物与材料
1． 1 实验动物
清洁级昆明种小鼠 40 只，雌雄兼用，体重 20 ～ 30g，购
自大连医科大学动物实验中心。
1． 2 药品及试剂
1． 2． 1 豨莶草提取液 药材购于大连开发区同仁堂药房，
其产地为辽宁省。取 500g 豨莶草，乙醇回流提取得到
700mL提取液，使用时加入等体积蒸馏水，即得豨莶草提取
液。
1． 2． 2 Evans蓝 国药集团化学试剂有限公司生产。
1． 2． 3 蛋白标准品 购自南京建成生物工程研究所，标准
蛋白含量为 56． 3g /L。
1． 2． 4 尼莫地平片 山西亚宝药业集团股份有限公司生
产，每片 20mg，产品批号:060506。
1． 2． 5 丙二醛(MDA)测试盒 购于南京建成工程研究
所，产品批号:20070514。
1． 2． 6 超氧化物歧化酶(SOD)测试盒 购于南京建成工
程研究所，产品批号:20070512。
1． 2． 7 乙醚 天津市科密欧化学试剂有限公司生产。
1． 2． 8 甲酰胺 天津市科密欧化学试剂有限公司生产，批
号:20070404。
1． 2． 9 水合氯醛 上海曹杨第二中学化工厂生产，批号:
19949391，应用时以蒸馏水稀释至 10%浓度。
1． 2． 10 双缩脲试剂 NaOH 12g 稀释到 50mL，无水硫酸
铜 0． 6 溶解于 100mL 蒸馏水，加酒石酸甲钠 1． 8g，加碘化
钾 1． 0g，再加 NaOH 20mL，然后加蒸馏水稀释到 200mL。
1． 3 实验仪器
小型三用水箱:北京西城区医疗器械厂生产;小型离心
机:上海手术器械厂生产;架盘药物天平:上海医疗器械八
厂生产;分析天平:万分之一，型号为 AY220，shimadzu;十
万分之一，型号为 AE240，Mettler;电热恒温干燥箱:DH64
型，上海医疗器械七厂生产;7230 分光光度计:上海分析仪
器厂生产;微量移液器:上海求精生化试剂仪器有限公司生
产;恒温振荡器:57590 型，常州国华电器有限公司生产;旋
涡振荡器:XW －80A，编号 08，上海医科大学仪器厂生产。
2 实验方法
2． 1 实验动物与分组
小鼠分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、豨莶草提取液
14g生药 /kg，阳性药尼莫地平 24mg/kg组，每组 10只动物。
2． 2 动物模型的制作
参阅文献［7］并加以改良，小鼠腹腔注射 10%水合氯醛
400mg /kg麻醉，固定，颈部正中切口，分离两侧颈总动脉及
迷走神经，剥离迷走神经和颈总动脉，用微型动脉夹同时夹
闭双侧颈总动脉 60min 后，放开动脉夹行再灌注，缝合皮
肤，单笼饲养 24h，假手术组仅切开颈部皮肤，分离颈总动
脉，不进行颈总动脉夹闭操作。
2． 3 给药
豨莶草治疗组于缺血前一周灌胃给药，剂量为 14g 生
药 /kg，阳性药尼莫地平于手术前 30min 灌胃给药，剂量为
24mg /kg，给药体积均为 20mL /kg 。
2． 4 豨莶草提取液对脑组织 Evans蓝含量的影响［8］
2． 4． 1 制作 Evans蓝标准曲线 精密称取 1mgEvan’s蓝，
加甲酰胺溶于一号 10mL 容量瓶中，定容，摇匀，用 1mL 移
液管分别精密吸取一号溶液 1mL 置于 2，3，4，5 号瓶中，加
甲酰胺定容，摇匀，用移液管精密吸取 2 号溶液 5mL，置 6
号瓶中定容，吸取 3 号溶液 4mL，置 7 号瓶中定容，剩下的
溶液定容作为 8 号溶液，吸取 4 号溶液 7mL，置 9 号瓶中定
容，吸取 5 号溶液 8mL，置 10 号瓶中定容，得 6，7，8，9，10
号溶液，在 620nm 处测吸光度值，得到的数值用 Microsoft
Excel处理得标准曲线。
2． 4． 2 小鼠脑组织 Evans 蓝含量的测定 小鼠处死前
30min尾静脉注入 2% Evans 蓝生理盐水溶液 2mL /kg，至
尾部、四肢、黏膜均变为蓝色，处死取脑前行生理盐水左心
室灌注至右心耳流出清亮液体，取海马及周边组织 100mg，
加入 3mL甲酰胺制成匀浆，加盖后于 45℃水浴箱孵育 48h，
4000r /min离心 15min，取上清在 721 分光光度计上 λ =
620nm处进行比色，根据标准曲线，求得 Evans蓝含量(μg /
100mg湿重)。
2． 5 豨莶草提取液对脑组织 SOD MDA水平的影响
2． 5． 1 脑组织匀浆的制作 取小鼠脑组织块(0． 2 ～ 1g) ，
在冷生理盐水中漂洗，除去血液。滤纸拭干，称重，放入
10mL小烧杯内。用移液管量取体积为组织块重量的 6 倍
量、浓度为 8%的冷生理盐水，用眼科剪剪碎组织块(在冰浴
中操作)。将剪碎的组织倒入玻璃匀浆器中，加入组织块重
量 3倍量的冷生理盐水，冲洗留在烧杯中的碎组织块，一起
倒入匀浆管中，匀浆 8min，充分研碎后即得 10%组织匀浆。
将制备好的 10%匀浆液，以普通离心机以 2500rpm 转
速离心 8min，取上清液，弃去沉淀，冷冻于 － 20℃冰箱内备
用。
2． 5． 2 脑组织匀浆蛋白含量测定 制备好的 10%匀浆液
采用双缩脲法进行测定。
2． 5． 3 脑组织 SOD，MDA 水平的测定 (1)脑组织 SOD
含量测定:先将脑组织匀浆稀释 10 倍，取匀浆液每份 30 微
升，加生理盐水 270 微升，制成脑匀浆稀释液，再按照标准
说明书依次加入相关试剂，于波长 550nm 处，1cm 比色杯，
蒸馏水调零，测吸光度值。(2)脑组织 MDA 含量测定:
MDA按照标准说明书依次加入相关试剂，旋涡混匀器混
匀，试管用保鲜膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴 40min，
取出后流水冷却，然后 4000r /min 离心 10min，取上清，在
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532nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，测定各管吸光度。
2． 6 数据统计
实验结果采用均数 ±标准差(珋x ± s)表示，多个样本均
数的比较采用单因素方差分析(one － way ANOYA) ，采用
SPSS for Windows 10． 0 软件进行实验数据处理。
3 结 果
3． 1 豨莶草提取液对小鼠脑组织 SOD MDA水平的影响
脑缺血再灌注模型组小鼠脑 SOD 活性较正常组明显
下降，MDA含量明显升高;尼莫地平组 SOD 活性明显升
高，MDA含量明显下降，豨莶草提取液组较模型组 SOD 活
性明显升高，MDA 含量明显下降，但尚不如尼莫地平组明
显，见表 1。
表 1 豨莶草提取液对小鼠脑组织
SOD，MDA水平的影响(n = 10，珋x ± s)
组别 剂量
SOD含量
(μ /mg)
MDA含量
(μmol /mg)
假手术组 0 0． 611 ± 0． 028 0． 245 ± 0． 044
模型对照组 0 0． 331 ± 0． 091* 1． 014 ± 0． 238*
尼莫地平组 24mg /kg 1． 431 ± 0． 139△△ 0． 147 ± 0． 055△△
豨莶草提取液组 14g生药 /kg 0． 882 ± 0． 105△ 0． 510 ± 0． 143△
注:与假手术组相比，* P ＜ 0． 05;与假手术组相比，＊＊P ＜
0． 01;与模型组相比，△P ＜ 0． 05;与模型组相比，△△P ＜ 0． 01 。
3． 2 豨莶草提取液对小鼠脑组织中 Evans蓝含量的影响
图 1 Evans蓝标准曲线
标准曲线方程为 y = 60． 3x + 0． 0022;r = 0． 993177。
模型组脑组织 Evans 蓝渗出量较假手术组明显增多，
豨莶草治疗组 Evans 蓝渗出量明显低于脑缺血再灌注组，
阳性药治疗组较模型组 Evans 蓝渗出量明显减少，具有统
计学意义，见表 2。
表 2 豨莶草提取液对小鼠脑组织中
Evans蓝含量的影响(n = 10，珋x ± s)
组别 剂量
Evans蓝含量
(μg /100mg湿重)
假手术组 0 3． 61 ± 2． 73
模型对照组 0 12． 00 ± 1． 70*
尼莫地平组 24mg /kg 2． 78 ± 1． 41△△
豨莶草提取液组 14g生药 /kg 4． 28 ± 0． 89△
注:与假手术组相比，* P ＜ 0． 05;与假手术组相比，＊＊P ＜
0． 01;与模型组相比，△P ＜ 0． 05;与模型组相比，△△P ＜ 0． 01。
4 讨论与结论
4． 1 讨论
通过研究不同动物模型发现许多因素参与脑缺血再灌
注损伤，其中，自由基的作用占有重要地位［9］。脑缺血再
灌注所恢复的氧供应会使一些酶类利用氧做底物产生活性
氧，另外，由于线粒体不能充分的利用氧，也会产生活性氧。
正常情况下生成的自由基会被抗氧化酶类如 SOD，CAT 及
自由基清除剂清除，而在缺血后再灌注时，抗氧化酶类大量
消耗，不能有效清除，因而导致自由基增多。自由基能破坏
脑毛细血管内皮细胞，从而影响水电解质的平衡及膜的稳
定性［10］，有时自由基还参与突触的破坏损伤过程。由于脑
组织富含不饱和脂肪酸，导致脑对自由基很敏感，因此可能
导致严重脑损伤［11］。
本研究发现，中药豨莶草提取物能有效提高脑组织内
抗氧化酶类的活性，降低自由基产物的产生，具有良好的抗
自由基作用。
脑缺血再灌注时，各种损伤机制会导致血脑屏障的破
坏［12］，屏障作用受损，通透性增加，从而使一些平时不能通
过的大分子物质得以穿越血脑屏障，到达组织间隙，引起脑
水肿，并可以造成继发性出血。Evans 蓝能与血浆蛋白结
合，正常时不能透过血脑屏障，而脑缺血再灌注时，因为血
脑屏障的开放，脑组织中的 Evans 蓝含量增加，测定 Evans
蓝含量可反映出血脑屏障通透性的变化情况。
本研究发现，中药豨莶草能降低脑组织中的 Evans 蓝
含量，从而对恢复血脑屏障的完整性有十分重要的意义。
4． 2 结论
中药豨莶草提取物对小鼠全脑缺血再灌注损伤具有一
定的保护作用，能升高脑组织匀浆的生化学指标 SOD 水
平，降低 MDA含量，减少 Evans蓝含量。
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