全 文 ：食用菌学报２０１２．１９（３）：１５～２０
收稿日期：２０１２－０８－１７原稿；２０１２－０９－０１修改稿
基金项目：福建省公益类科研专项项目（编号：２０１１Ｒ１０２２－１）、福建省自然科学基金项目（编号：２０１２Ｊ０１１０８）的部分
研究内容
作者简介：陈美元（１９７２－），男，１９９５年毕业于厦门大学，博士，高级工程师，主要从事食用菌遗传育种研究。
　Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｍｙ１９７２＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ．
文章编号：１００５－９８７３（２０１２）０３－００１５－０６
双孢蘑菇子实体原基与菇蕾蛋白质表达变化分析
陈美元
（福建省农业科学院食用菌研究所，福建福州３５００１４）
摘　要：为探讨双孢蘑菇（Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ）子实体发育初期的蛋白质表达变化，采用双向电泳（ｔｗｏ－
ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，２－ＤＥ）技术对双孢蘑菇Ａｓ２７９６子实体原基与菇蕾的蛋白质组进行分析，发现１４
个表达差异明显的蛋白质。经质谱分析（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ　ＭＳ）和数据库检索，鉴定到１０个差异蛋白质，其
中乙醇氧化酶与醇类代谢相关，磷酸烯醇式丙酮酸水合酶与能量代谢相关，蛋白酶体、５－甲基四氢三谷氨酸－同
型半胱氨酸甲基转移酶、维生素Ｂ１２不依赖型甲硫氨酸合成酶、１－吡咯琳－５－羧酸脱氢酶、ＮＡＤＰ依赖的谷氨酸
脱氢酶与氨基酸或蛋白质代谢直接相关，而 ＷＤ４０重复蛋白、肌动蛋白、热激蛋白７０则与细胞内多种生物过
程有关，在细胞的生长发育分化等过程中起着重要的作用；其余４个仅在双孢蘑菇蛋白质组中鉴定到功能未
知的蛋白质。
关键词：食用菌；蛋白质组；双向电泳；质谱分析；蛋白质鉴定
　　近年来食用菌生长发育机理研究发展迅速，
取得了许多研究成果。已报道的食用菌发育机
理的研究主要包括：环境条件、培养基质、有益微
生物对食用菌发育的影响、菌丝与子实体营养成
分的变化、发育相关酶学研究以及发育基因研究
等方面［１］。对于双孢蘑菇（Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ）的
研究，主要是其发育及成熟过程中的疏水蛋白基
因ｈｙｐＡ［２，３］、子实体原基的超微结构特征［４］、不
同发育阶段的尿素与脲酶含量及脲酶基因的表
达水平［５］等。
蛋 白 质 双 向 电 泳 （ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ
ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，２－ＤＥ）是多年来蛋白质组学研究
的主要方法，在食用菌研究中也得到一定的应
用［６－１３］。在食用菌发育机理的蛋白质组学研究方
面，ＳＡＫＡＭＯＴＯ等研究了金针菇（Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ
ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ）光照及低温刺激下菌盖形成的差异蛋
白质组［７，８］，刘靖宇等应用ｉＴＲＡＱ标记结合二维
液相色谱串联质谱技术对草菇不同生长发育阶
段的差异蛋白质组进行了研究［１４，１５］，其它食用菌
包括双孢蘑菇在这方面的研究未见报道。笔者
应用２－ＤＥ技术，对双孢蘑菇子实体原基与菇蕾
蛋白质表达差异进行分析，以期发现与子实体发
育密切相关的蛋白质，为双孢蘑菇子实体发育机
理的研究提供参考。
１　材料与方法
１．１菌株
　　双孢蘑菇（Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ）杂交菌株Ａｓ２７９６由
福建省农业科学院食用菌研究所种质资源与遗
传育种研究室保藏并提供。
１．２试剂
　　等电聚焦ＩＰＧ预制胶条、４０％丙烯酰胺－甲
叉双丙烯酰胺（３７．５∶１）溶液、载体两性电解质
Ｂｉｏ－Ｌｙｔｅ为ＢｉｏＲａｄ公司产品；尿素、３－［（３－胆酰
胺丙基）－二乙胺］－丙磺酸（ＣＨＡＰＳ）、二硫苏糖醇
（ＤＴＴ）、十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）、甘氨酸、四甲基
乙二胺（ＴＥＭＥＤ）、考马斯亮蓝 Ｇ－２５０为ＢＢＩ公
司产品；Ｂｒａｄｆｏｒｄ蛋白质定量试剂盒及其它试剂
均购自上海生工生物工程服务有限公司。
１．３取样
　　Ａｓ２７９６菌株进行常规栽培管理［１６］。在子实
体原基（直径约２ ｍｍ）阶段和菇蕾（直径约
６ｍｍ）阶段进行取样，第一潮和第二潮子实体样
品作为试验重复。
食　用　菌　学　报 第１９卷
１．４蛋白质提取
　　将刚采下的子实体样品去除根部及污物，用
多层无菌滤纸挤去水分，迅速加液氮研磨成粉
末，按菌丝体蛋白质的提取方法进行，具体步骤
同参考文献［１２］。
１．５蛋白质定量
　　按Ｂｒａｄｆｏｒｄ蛋白质定量试剂盒说明书进行
操作。
１．６双向电泳
　　使用ＢｉｏＲａｄ双向电泳设备，按之前优化的
双孢蘑菇２－ＤＥ条件［１２］进行。根据笔者之前的研
究结果，双孢蘑菇的蛋白质主要集中在ｐＨ５～８
的范围内，因此在本研究中使用ｐＨ　５～８、１７ｃｍ
的ＢｉｏＲａｄ　ＩＰＧ预制胶条进行第一向等电聚焦。
使用胶体考马斯亮蓝对双向电泳后的凝胶进行
染色。使用 ＵＭＡＸ　Ｐｏｗｅｒｌｏｏｋ　２１００ＸＬ－ＵＳＢ扫
描仪 对 脱 色 后 的 凝 胶 进 行 扫 描，用 ＢｉｏＲａｄ
ＰＤＱｕｅｓｔ８．０１软件进行分析。
１．７质谱分析、数据库检索
　　获得的所有差异蛋白质点送上海复旦大学
蛋白质测试中心进行质谱鉴定。先用５８００串联
飞行时间质谱仪进行基质辅助激光解吸电离串
联飞行时间质谱分析（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ　ＭＳ），
所得结果用 ＧＰＳ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，美国）－
ＭＡＳＣＯＴ（Ｍａｔｒｉｘ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，伦敦，英国）进行数
据库检索，包括 ＮＣＢＩｎｒ （ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．
ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）真菌库和双孢蘑菇基因
组与蛋白质组数据库（ｈｔｔｐ：／／ｇｅｎｏｍｅ．ｊｇｉ－ｐｓｆ．
ｏｒｇ／Ａｇａｂｉ＿ｖａｒｂｉｓＨ９７＿２／Ａｇａｂｉ＿ｖａｒｂｉｓＨ９７＿
２．ｈｏｍｅ．ｈｔｍｌ）。
２　结果与分析
２．１子实体原基与菇蕾的差异蛋白分析
　　提取的双孢蘑菇 Ａｓ２７９６子实体原基与菇
蕾总蛋白质经定量和质量检测后进行双向电泳
分析，每胶条的蛋白质上样量为９００μｇ。原基
与菇蕾总蛋白质的双向电泳图谱质量较高，条
纹少，蛋白质点清晰，如图１所示。两者均获得
８００个左右的蛋白质点，比较结果显示双孢蘑菇
原基与菇蕾阶段表达的蛋白质无论是种类还是
表达量都相当类似，差异蛋白质点占总蛋白质
点的比例较低。其中１４个蛋白质点差异较为
明显，如图２所示。与原基阶段表达的蛋白质
相比，在菇蕾阶段上调表达的有２１、３３、３５，下调
表达的有１３、２７、４７、５０、５２、５４、５８、６２，不表达
的有１７、４８、５１。
数字与箭头指示差异Ｎｕｍｂｅｒｓ　ａｎｄ　ａｒｒｏｗｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ
图１　双孢蘑菇Ａｓ２７９６子实体原基（Ａ）与菇蕾（Ｂ）总蛋白质的２－ＤＥ图谱
Ｆｉｇ．１　２－Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｐｒｉｍｏｒｄｉｕｍ（Ａ）ａｎｄ
ｂｕｔｔｏｎ（Ｂ）ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ　Ａｓ２７９６
２．２差异蛋白质点的质谱分析与鉴定
　　 获得 的 １４ 个差异蛋白质点进行质谱
（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ　ＭＳ）分析，获得肽指纹图
谱，并在ＮＣＢＩ数据库与双孢蘑菇蛋白质组数据
库中进行检索。
比对结果有１０个蛋白质在 ＮＣＢＩｎｒ真菌库
中均获得了得分（Ｓｃｏｒｅ）１００以上的结果（得分
７６以上具有显著性，即置信度大于９５％），并成
功鉴定到相应的蛋白质。其余４个蛋白质４８、
５４、５８、６２在 ＮＣＢＩｎｒ真菌库中未鉴定到，但在
６１
第３期 陈美元：双孢蘑菇子实体原基与菇蕾蛋白质表达变化分析
图２　双孢蘑菇Ａｓ２７９６子实体原基（Ａ）与菇蕾（Ｂ）１４个差异蛋白质点
Ｆｉｇ．２　Ｆｏｕｒｔｅｅｎ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｐｒｉｍｏｒｄｉｕｍ（Ａ）ａｎｄ
ｂｕｔｏｎ（Ｂ）ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ　Ａｓ２７９６
双孢蘑菇蛋白质组数据库中有非常高的得分，
说明在该库中已找到匹配的蛋白质序列，但相
应的蛋白质功能未知。这些蛋白质的相关信息
如表１所示。
十个得到鉴定的蛋白质中，与原基相比在菇
蕾中上调表达的三个蛋白质分别是乙醇氧化酶、
蛋白酶体α４亚基和磷酸烯醇式丙酮酸水合酶，
下调表达的蛋白质有 ＷＤ４０重复蛋白、肌动蛋白
１、热激蛋白７０、５－甲基四氢三谷氨酸－同型半胱氨
酸甲基转移酶和１－吡咯琳－５－羧酸脱氢酶，不表达
的蛋白质有ＮＡＤＰ依赖的谷氨酸脱氢酶和维生
素Ｂ１２不依赖型蛋氨酸合成酶。
表１　差异蛋白质的鉴定结果
Ｔａｂｌｅ１　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ
序号
Ｎｏ．
登录号
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．
蛋白质名称
Ｐｒｏｔｅｉｎ
物种
Ｓｐｅｃｉｅｓ　ｓｏｕｒｃｅ
理论
分子量
Ｍａｓｓ
理论等
电点
ｐＩ
得分
Ｓｃｏｒｅ
覆盖率
Ｃｏｖｅｒａｇｅ
１３ ｇｉ｜３９０６０３９９７
ＷＤ４０重复蛋白
ＷＤ４０ｒｅｐｅａｔ－ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ
皱革菌
Ｐｕｎｃｔｕｌａｒｉａ　ｓｔｒｉｇｏｓｏｚｏｎａｔａ
５４０５４　 ６．０６　 １５５　 ４６％
１７ ｇｉ｜１０５１２９２
ＮＡＤＰ依赖的谷氨酸脱氢酶
ＮＡＤＰ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｇｌｕｔａｍａｔｅ
ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ
双孢蘑菇Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ　 ４９５２６　 ５．７６　 ３５３　 ６９％
２１ ｇｉ｜３９０６０１７１３ 乙醇氧化酶Ａｌｃｏｈｏｌ　ｏｘｉｄａｓｅ
皱革菌
Ｐ．ｓｔｒｉｇｏｓｏｚｏｎａｔａ
７２３３６　 ６．１１　 １１７　 ５６％
２７ ｇｉ｜３８９７４４２２３ 肌动蛋白１Ａｃｔｉｎ　１ 毛韧革菌Ｓｔｅｒｅｕｍ　ｈｉｒｓｕｔｕｍ　 ４１５９１　 ５．３０　 ５０４　 ８２％
３３ ｇｉ｜２９９７５２２８６
蛋白酶体α４亚基
Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ　ｓｕｂｕｎｉｔ　ａｌｐｈａ　ｔｙｐｅ　４
灰拟鬼伞Ｃｏｐｒｉｎｏｐｓｉｓ　ｃｉｎｅｒｅａ　２８５８０　 ５．９９　 ２５９　 ６９％
３５ ｇｉ｜３９２５７０６８２
磷酸烯醇式丙酮酸水合酶
Ｐｈｏｓｐｈｏｐｙｒｕｖａｔｅ　ｈｙｄｒａｔａｓｅ
云芝Ｔｒａｍｅｔｅｓ　ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ　 ４７０５２　 ５．５５　 ２２２　 ４９％
４７ ｇｉ｜３８９７４８９４８
热激蛋白７０
Ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｐｒｏｔｅｉｎ　７０
毛韧革菌Ｓ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ　 ７０６４９　 ５．１０　 ４１５　 ２４％
４８ ｇｉ｜４９７７２ 未知蛋白 Ｕｎｋｎｏｗｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ 双孢蘑菇Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ　 ５５０７２　 ６．０８　 ４４１　 ３３％
５０ ｇｉ｜１６９８６１２６
５－甲基四氢三谷氨酸
－同型半胱氨酸甲基转移酶
５－Ｍｅｔｈｙｌｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｔｅｒｏｙｌｔｒｉｇｌｕｔａｍａｔｅ
－ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　Ｓ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ
灰拟鬼伞Ｃ．ｃｉｎｅｒｅａ　 ８４５４８　 ６．２２　 １０１　 ９％
７１
食　用　菌　学　报 第１９卷
续表
序号
Ｎｏ．
登录号
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．
蛋白质名称
Ｐｒｏｔｅｉｎ
物种
Ｓｐｅｃｉｅｓ　ｓｏｕｒｃｅ
理论
分子量
Ｍａｓｓ
理论等
电点
ｐＩ
得分
Ｓｃｏｒｅ
覆盖率
Ｃｏｖｅｒａｇｅ
５１ ｇｉ｜３８９７４７１４２
ＶＢ１２不依赖型蛋氨酸合成酶
Ｃｏｂａｌａｍｉｎ－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ
毛韧革菌Ｓ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ　 ８４８９２　 ６．１８　 １００　 １８％
５２ ｇｉ｜１８０８５８７
１－吡咯琳－５－羧酸脱氢酶
１－Ｐｙｒｒｏｌｉｎｅ－５－ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ
ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ
双孢蘑菇Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ　 ５９７１９　 ８．０１　 ３９１　 ３９％
５４ ｇｉ｜１３４６５１ 未知蛋白 Ｕｎｋｎｏｗｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ 双孢蘑菇Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ　 ２５６２６　 ５．９３　 ２６５　 ５８％
５８ ｇｉ｜５４２７５ 未知蛋白 Ｕｎｋｎｏｗｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ 双孢蘑菇Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ　 ２７１１６　 ５．６５　 ５６４　 ５１％
６２ ｇｉ｜１３６４６５ 未知蛋白 Ｕｎｋｎｏｗｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ 双孢蘑菇Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ　 １７９２０　 ５．２１　 ４８７　 ４４％
３　讨论
　　本研究通过２－ＤＥ比较了双孢蘑菇子实体原
基和菇蕾中表达的蛋白质，发现了１４个有明显
差异的蛋白质点，其中１０个鉴定到相应的蛋白
质，其余４个仅在双孢蘑菇蛋白质组中鉴定到功
能未知的蛋白质，说明双孢蘑菇蛋白质组中部分
数据可能尚未释放到 ＮＣＢＩ数据库中。鉴定的
１０个蛋白质中，乙醇氧化酶与醇类代谢相关，磷
酸烯醇式丙酮酸水合酶与能量代谢相关，蛋白酶
体、５－甲基四氢三谷氨酸－同型半胱氨酸甲基转移
酶、维生素Ｂ１２不依赖型甲硫氨酸合成酶、１－吡咯
琳－５－羧酸脱氢酶、谷氨酸脱氢酶与氨基酸或蛋白
质代谢直接相关，而 ＷＤ４０重复蛋白、肌动蛋白、
热激蛋白７０则与细胞内多种生物过程有关，在
细胞的生长发育分化等过程中起着非常重要的
作用。
乙醇氧化酶是乙醇和甲醇代谢的关键酶，其
活性严格受碳源调节［１７］。蛋白酶体是多亚基组
成的蛋白酶复合体，具有依赖 ＡＴＰ的蛋白水解
活性，是蛋白质合成与分解代谢中的重要酶
类［１８］。磷酸烯醇式丙酮酸水合酶也称烯醇化酶，
该酶在糖酵解作用中催化２－磷酸甘油酸生成高
能磷酸分子磷酸烯醇式丙酮酸，生成 ＡＴＰ以及
丙酮酸，放出大量的能量，它与生物体的生长控
制、缺氧耐受等过程有关。本研究中这三类酶在
菇蕾中表达上调，说明菇蕾中相关的醇类代谢、
蛋白质代谢和能量代谢趋于活跃，子实体的发育
生长速度开始加快。
ＷＤ４０重复蛋白是蛋白互作的一个位点，是
由许多结构相关、功能不同的蛋白组成的大家
族。这类蛋白在多种生物过程中扮演了非常重
要的角色，如细胞信号转导、蛋白转运、细胞骨架
组装和解聚、ＲＮＡ加工、ＤＮＡ修饰及转录、细胞
分裂、细胞运动、胞浆移动、细胞凋亡、光信号转
导、花序的发育以及分生组织的形成等［１９－２１］。其
在原基中含量比菇蕾中高，暗示该蛋白在双孢蘑
菇原基形成中可能起着重要的作用。
肌动蛋白是真核生物细胞骨架的重要成分，
在控制细胞分裂、细胞生长和形态以及细胞内运
输等方面扮演重要角色。胡开辉等在斑玉蕈
（Ｈｙｐｓｉｚｙｇｕｓ　ｍａｒｍｏｒｅｕｓ）菌丝体低温胁迫下鉴
定到两个上调表达的肌动蛋白，推测可能是低温
诱导斑玉蕈菌丝体细胞内微管解聚，进而引起细
胞形态的变化，促进了细胞的分化发育，利于原
基的形成［１０］。本研究中原基的肌动蛋白含量较
高，也可能是双孢蘑菇在菌索扭结成原基阶段细
胞内微管解聚，引进细胞形态的系列变化，促进
了原基的形成。而在菇蕾阶段细胞已开始快速
生长，肌动蛋白重新聚合成微管，游离的蛋白减
少，因此表达量下调。
５－甲基四氢三谷氨酸－同型半胱氨酸甲基转
移酶参与甲硫氨酸的合成［２２］，维生素Ｂ１２不依赖
型甲硫氨酸合成酶亦可催化同型半胱氨酸复甲
基为甲硫氨酸。甲硫氨酸在细胞代谢中占据重
要位置，联系着蛋白质合成、甲基转移、多胺和乙
烯的合成等过程，为生物体内的甲基化反应和多
胺、乙烯的合成提供中间产物［２３－２５］。多胺是近年
来研究较多的一种植物生长发育调节物质，是生
物体代谢过程中产生的一类具有较高生物活性
的低分子量脂肪族含氮碱，在植物细胞内参与了
诸多生长发育相关的生命活动［２６］；乙烯也是一种
８１
第３期 陈美元：双孢蘑菇子实体原基与菇蕾蛋白质表达变化分析
重要的植物生长调节剂，绝大多数植物以甲硫氨
酸为乙烯生物合成的前体物质，在合成过程中，
其中的一个中间产物Ｓ－腺苷甲硫氨酸（ＳＡＭ）分
解生成甲硫腺苷（ＭＴＡ）和１－氨基环丙烷－１－羧酸
（ＡＣＣ），前者可再生成甲硫氨酸，后者在ＡＣＣ合
成酶的催化下形成乙烯。张大飞等认为双孢蘑
菇可能也具有乙烯合成的 ＡＣＣ途径，覆土中
ＡＣＣ脱氨酶产生菌利用 ＡＣＣ，消除了双孢蘑菇
菌丝合成高浓度乙烯对子实体形成和发育的抑
制作用可能是双孢蘑菇覆土出菇的原因［２７］。本
研究中这两种甲硫氨酸合成相关的酶在原基中
均上调而在菇蕾中均下调表达，可能决定不同阶
段细胞中甲硫氨酸的含量，从而影响细胞内多胺
和乙烯的生成和积累，因此这两种酶在双孢蘑菇
子实体的形成和发育中的作用，值得进一步
探讨。
１－吡咯琳－５－羧酸脱氢酶（Ｐ５ＣＤＨ）参与了谷
氨酸、精氨酸和脯氨酸代谢。脯氨酸是一种重
要的渗透保护物质，在植物细胞适应各种胁迫
过程中起重要作用。在代谢降解过程中它首先
被脯 氨 酸 脱 氢 酶 氧 化 成 １－吡 咯 琳－５－羧 酸
（Ｐ５Ｃ），然 后 在 Ｐ５ＣＤＨ 的 作 用 下 生 成 谷 氨
酸［２８］。在渗透胁迫时，脯氨酸氧化降解过程受
抑制，导致其含量增长；而一旦胁迫解除时（即
渗透胁迫后恢复供水），其氧化过程被诱导，导
致其含量下降。本研究中Ｐ５ＣＤＨ在原基中含
量高而在菇蕾中含量降低，推测可能与原基扭
结前喷的重水有关，而在菇蕾采样阶段环境中
含水量降低，细胞下调表达Ｐ５ＣＤＨ，积累更多
的脯氨酸以应对水分不足。
本研究初步获得了双孢蘑菇子实体发育初
期表达量变化的１４个蛋白质，这些蛋白质变化
有的可能与子实体形成及发育密切相关，有的可
能只是应对环境因素如水分等的改变。下一步
将对这些蛋白质在子实体发育其它阶段的表达
情况进行探讨，克隆部分蛋白质基因并进行荧光
定量ＰＣＲ验证等，以期为双孢蘑菇子实体发育机
制的研究奠定基础。
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Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ　ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｌ　Ｒｅｓ，２００１，１０５
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［７］ＳＡＫＡＭＯＴＯ　Ｙ，ＡＮＤＯ　Ａ，ＴＡＭＡＩ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．
Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａｖｅｌｕｔｉｐｅｓ ｕｎｄｅｒ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
［Ｊ］．Ｍｙｃｏｌ　Ｒｅｓ，２００２，１０６（２）：２２２－２２７．
［８］ＳＡＫＡＭＯＴＯ　Ｙ，ＡＮＤＯ　Ａ，ＴＡＭＡＩ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．
Ｐｉｌｅｕｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｉｌｅｕｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　Ｆｌａｍ　ｍｕｌｉｎａ　ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ［Ｊ］．Ｆｕｎｇａｌ　Ｇｅｎ
Ｂｉｏｌ，２００７，４４：１４－２４．
［９］ＨＯＲＩＥ　Ｋ，ＲＡＫＷＡＬ　Ｒ，ＨＩＲＡＮＯ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ｍｕｓｈｒｏｏｍｓ　Ｓｐａｒａｓｓｉｓ
ｃｒｉｓｐａａｎｄ　Ｈｅｒｉｃｉｕｍ　ｅｒｉｎａｃｅｕｍｐｒｏｖｉｄｅｓ　ｉｎｓｉｇｈｔ　ｉｎｔｏ
ｔｈｅｉｒ　ｎｕｍｅｒｏｕｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ａｎｄ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｐｒｏｔｅｏｍｅ　Ｒｅｓ，２００８，７（５）：
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ａｎｄ　Ｂｕｔｔｏｎ　Ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ　Ａｓ２７９６
ＣＨＥＮ　Ｍｅｉｙｕａｎ
（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ，Ｆｕｊｉａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ　３５００１４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（２－ＤＥ）ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｆｏｕｒｔｅｅｎ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｔｏ　ｂｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｐｒｉｍｏｒｄｉｕｍ　ａｎｄ　ｂｕｔｔｏｎ　ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ　Ａｓ２７９６ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ．
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ　ＭＳ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｄａｔａｂａｓｅ　ｓｅａｒｃｈｅｓ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｔｅｎ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ａｌｃｏｈｏｌ
ｏｘｉｄａｓｅ， ｐｈｏｓｐｈｏｐｙｒｕｖａｔｅ　 ｈｙｄｒａｔａｓｅ， ５－ｍｅｔｈｙｌｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｔｅｒｏｙｌｔｒｉｇｌｕｔａｍａｔｅ－ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ　 Ｓ－ｍｅｔｈｙｌ－
ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ｃｏｂａｌａｍｉｎ－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ，１－ｐｙｒｒｏｌｉｎｅ－５－ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＮＡＤＰ－
ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｇｌｕｔａｍａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＷＤ４０ｒｅｐｅａｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ　ｓｕｂｕｎｉｔ　ａｌｐｈａ　ｔｙｐｅ　４，ａｃｔｉｎ　１ａｎｄ
ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｐｒｏｔｅｉｎ　７０．Ｔｈｅ　ｒｅｍａｉｎｉｎｇ　ｆｏｕｒ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ　ａｓ　ｕｎｋｎｏｗｎ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ
Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ　ｐｒｏｔｅｏｍｅ　ｄａｔａｂａｓｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｅｄｉｂｌｅ　ｆｕｎｇｕｓ；ｐｒｏｔｅｏｍｅ；２－ＤＥ；ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ　ＭＳ；ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
［本文编辑］　王瑞霞
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