全 文 ：节细胞内第二信使 cAMP的水平而引起反应的信号通路。信号
分子对 cAMP水平的调节 , 是靠 AC进行的。 AC至少已被克隆
出 8种亚型 , 且分布具有组织及细胞特异性。大鼠大脑中存在 3
种 AC,分别是 AC-Ⅰ , AC-Ⅱ和 AC-Ⅴ , 其中 AC-Ⅰ 在海马
及皮质表达水平非常高。研究表明 , AC是 G蛋白偶联信号转导
途径中一个重要的酶 , AC可能是新型组织及细胞特异性药物的
作用靶点 [ 5] 。抗抑郁剂对 cAMP通路的激活具有特异性 , 因此
AC也就成为药物筛选的相对特异的指标之一 [ 6] 。
前期实验结果证明 , YLSPS对行为绝望动物模型和慢性应激
小鼠模型具有显著的抗抑郁作用 ,能直接或间接提高慢性应激小
鼠脑中 NE、5-HT、 DA含量。为深入探讨 YLSPS抗抑郁作用的
机制 , 本研究采用放射免疫方法考察 YLSPS对大鼠不同脑区 AC
活性的影响 。结果表明 , YLSPS在 150 ～ 600 mg/kg的条件下可
依赖性地激活正常大鼠前额皮层 AC活性 , 这与李云峰等 [ 7]的实
验结果相符。因此 , YLSPS影响大鼠前额皮层 AC活性可能是其
抗抑郁活性的重要机制之一。而 YLSPS在 600 mg/kg的条件下
对正常大鼠下丘脑 、海马 AC活性却有所抑制 , 这尚需进一步研
究。
参考文献:
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收稿日期:2010-01-20;　修订日期:2010-04-20
基金项目:四川省教育厅青年基金项目(No.09205036);
西华大学 “西华杯 ”项目(No.2010366);
四川省重点学科资助项目
作者简介:倪丹丹(1986-),女(汉族),四川江油人 ,现就读于西华大学制
药工程专业.
＊通讯作者简介:李　玲(1978-),女(汉族),四川阆中人 ,现任西华大学生
物工程学院副教授,博士学位 ,主要从事药物新制剂与新剂型研究工作.
小叶杜鹃的超临界二氧化碳提取工艺研究
倪丹丹 , 李　玲＊ ,黄智龙 , 何宇新
(西华大学生物工程学院 ,四川 成都　610039)
摘要:目的 筛选小叶杜鹃的超临界 CO2提取最佳工艺条件。方法 采用 L9(34)正交实验 , 以槲皮素含量为指标进行正
交实验 , 对小叶杜鹃的超临界 CO2提取工艺进行考察。结果 小叶杜鹃的超临界 CO2提取最佳工艺为:取小叶杜鹃药材
粗粉(过 20目筛)进行萃取 , 萃取压力为 45 MPa,提取时间为 2 h, 萃取温度为 35℃,解析压力为 5 MPa。结论 运用该工
艺提取效率高 , 稳定性较好 ,适合大生产。
关键词:小叶杜鹃;　超临界二氧化碳提取;　正交实验
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.09.044
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)09-2222-02
　　小叶杜鹃系羌族药材 , 又名窝兰巴 、黑香柴 ,来源于双子叶植
物杜鹃花科植物头花杜鹃的叶或花 ,辛 , 温 ,入肺经 , 具止咳平喘 、
祛痰 、暖胃止痛之功效;主治咳喘多痰 ,胃寒腹痛。小叶杜鹃含有
多种化学成分 , 主要有:顺式 -α-罗勒烯(cis-α-ocimene), β
-古芸烯(β -gurjunene), α-葎草烯(α-humulene), 右旋 α-
菠烯(α-pinene), 消旋 β -蒎烯 (β -pinene), 金丝桃苷(hy-
perin),头花杜鹃素(capitatin)Ⅰ , 槲皮素(quercetin)等 [ 1] 。本实
验中采用 L9(34)正交设计实验 , 选择影响小叶杜鹃的超临界CO2提取工艺的 4个重要因素 , 即萃取压力 、提取时间 、提取温
度 、解析压力 ,每个因素设 3个水平 , 以槲皮素含量为指标进行正
交实验 , 从而筛选小叶杜鹃的超临界 CO2提取最佳工艺。现将
实验方法及结果简介如下。
1　仪器与材料
1.1　仪器 岛津 LC-20高效液相色谱仪(日本);电子天平
BP121S;槲皮素对照品(由中国药品生物制品检定所提供 , 批号
为 100081-200406);超临界 CO2萃取设备(HA420 -40 -96 -EX型 , 江苏南通华安超临界萃取设备有限公司), 甲醇为色谱
纯 , 其它试剂均为分析纯。
1.2　药材 本实验所用小叶杜鹃药材购于成都市五块石中药材
市场。
2　方法与结果
2.1　样品溶液的制备 取小叶杜鹃 , 粉碎 , 过 20目筛 ,按所选因
素及水平(见表 1),采用 L9(34)正交表设计实验(见表 2)进行小
叶杜鹃的超临界 CO2提取 , 得 1 ～ 9号萃取物 ,备用。
2.2　槲皮素含量测定 照高效液相色谱法(《中国药典》 2005年
版Ⅰ部附录Ⅵ D)进行测定 [ 2 , 3] 。
2.2.1　色谱条件 色谱柱为 DiamonsilC18色谱柱(4.6 mm×200mm, 5μm);流动相为甲醇 -0.4%磷酸溶液(50∶50);流速 1.0 ml
· min-1;检测波长:360nm;柱温 35℃;灵敏度 0.01AUFS。在上述
色谱条件下槲皮素色谱峰能达到较好分离。其结果见图 1 ～ 2。
2.2.2　含量测定 精密量取槲皮素对照品溶液(0.116 mg/ml)
1.0, 2.0, 4.0, 8.0, 16.0 μl, 按上述色谱条件进行测定 , 以浓度
(mg/ml)对峰面积积分值(A)进行线性拟合 , 得回归方程:Y=
4 109 365.07X-7 647.95, R2=0.999 6。分别精密称取上述 1 ～
9号萃取物适量置 50 ml量瓶中 , 加适量甲醇 , 超声处理 30 min
溶解 , 加甲醇稀释至刻度 , 滤过 ,取续滤液作为供试品液 , 测定 , 计
算 , 即得。
2.3　实验结果 实验结果采用中国医统软件包(PEMS)进行处理
分析。结果见表 3。
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9
图 1　槲皮素对照品的 HPLC图
图 2　样品的HPLC图
表 1　因素水平
水平 A萃取压力 /MPa
B
提取时间t/h
C
萃取温度 /℃
D
解析压力 /MPa
1 25 1 25 5
2 35 1.5 35 7
3 45 2 45 9
表 2　正交实验设计及结果
序号 A B C D 萃取物收得率(%)
槲皮素含
量 /mg· g-1
综合
评分
1 2 3 4 X Y S
1 1 1 1 1 3.68 2.09 61
2 1 2 2 2 3.82 2.99 76
3 1 3 3 3 4.15 3.21 82
4 2 1 2 3 3.86 2.78 73
5 2 2 3 1 5.18 3.02 87
6 2 3 1 2 4.65 2.97 82
7 3 1 3 2 3.91 2.88 75
8 3 2 1 3 4.89 3.23 88
9 3 3 2 1 4.66 3.86 96Ⅰ j 219 209 231 244
Ⅱj 242 251 245 233
Ⅲj 259 260 244 243
SSj 268.67 494 40.67 24.67
　　R=(X/Xmax)×40+(Y/Ymax)×60
3　结论
上述结果表明 , B因素有显著的影响 , 影响因素
B>A>C>D;且 B3、A3、C2、D1为最佳 ,故小叶杜鹃
超临界 CO2提取最佳工艺为:取小叶杜鹃药材粗粉
(过 20目筛)进行萃取 , 萃取压力为 45 MPa,提取时
间为 2 h, 萃取温度为 35℃,解析压力为 5MPa。
表 3　方差分析
方差来源 离差平方和(SS) 自由度(V) F P
A 268.67 2 10.89B 494 2 20.03 ＊
C 40.67 2 1.65
D 24.67 2
　　F0.05(2, 2)=19, F0.01(2, 2)=99
4　讨论
超临界流体萃取技术(SFE)是 20世纪 70年代
发展应用起来的一种集萃取 、分离于一体的萃取技
术 , 因其可避免传统工艺收率低 、有效成分损失大的
缺点而得到纯度高 、杂质少 、无有机残留的提取物并
大大缩短工艺流程 , 故在中草药的提取中得到广泛
应用 [ 4] 。小叶杜鹃相关文献资料较少 , 采用超临界
CO2进行提取的相关研究尚未见报道 , 槲皮素为小
叶杜鹃的主要有效成分之一 ,故本次实验以槲皮素
为含量指标对小叶杜鹃的超临界 CO
2
提取工艺进
行了研究 , 并建立了 HPLC法测定小叶杜鹃中槲皮
素的方法 , 该法精确 、重复性好 , 可较好地进行小叶
杜鹃超临界 CO2萃取物的质量控制。
参考文献:
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9 时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期