全 文 ：收稿日期:2008-04-29;修订日期:2008-10-28
基金项目:四川省教育厅重点项目(No.2006A085);
四川省重点学科项目
作者简介:李　玲(1978-),女(汉族),四川阆中人 ,现任西华大学生物工
程学院讲师 ,博士学位 ,主要从事药物新制剂与新剂型研究工作.
＊通讯作者简介:何宇新(1976-), 男(汉族),重庆人 ,现任西华大学生物
工程学院副教授 ,博士学位 ,主要从事药物新制剂与新剂型研究工作.
贯叶连翘的超临界二氧化碳提取工艺研究
李　玲 , 何宇新＊ , 吴晶晶
(西华大学生物工程学院 ,四川 成都　610039)
摘要:目的 筛选贯叶连翘的超临界 CO2提取最佳工艺条件。方法 采用 L9(34)正交实验 , 以金丝桃素含量为指标进行
正交实验 , 对贯叶连翘的超临界 CO2提取工艺进行考察。结果 贯叶连翘的超临界 CO2提取最佳工艺为:取贯叶连翘药
材粗粉(过 20目筛)进行萃取 , 萃取压力为 30 MPa,提取时间为 2 h, 萃取温度为 45℃, 解析压力为 7 MPa。结论 运用该
工艺提取效率高 , 稳定性较好 ,适合大规模生产。
关键词:贯叶连翘;　超临界二氧化碳提取;　正交实验
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)04-0905-01
　　贯叶连翘 , 亦称圣约翰蓟草 , 是一种五瓣黄花多年生的草本
植物 , 属金丝桃科猪胶树属 , 主要产于欧洲 、美国及部分亚洲国
家 , 我国分布于四川 、陕西 、河北 、山东等地。近年来由于发现其
有抗抑郁作用而广泛流行于欧洲及美国。贯叶连翘含有许多有
效成分 , 包括苯甲基二蒽酮(如金丝桃素 Hypericin及其衍生物)
以及黄酮类如芦丁 、槲皮苷和双芹菜苷元 [ 1] 。本实验中采用 L9(34)正交设计实验 , 选择影响贯叶连翘的超临界 CO
2
提取工艺
的 4个重要因素 , 即萃取压力 、提取时间 、提取温度 、解析压力 ,每
个因素设 3个水平 , 以金丝桃素含量为指标进行正交实验 , 筛选
贯叶连翘的超临界 CO2提取最佳工艺。现报道如下。
1　仪器与材料
1.1　仪器 岛津 LC-20高效液相色谱仪(日本)(LC-20AB溶
剂输出泵 , CBM-20Alite系统控制器 , ProminenceSIL-20AC自
动进样器 , CTO-20A柱温箱 , SPD-20AVUV-VIS检测器 , LC
Solution工作站);电子天平 BP121S;金丝桃素对照品(美国 Sigma
公司);超临界 CO2萃取设备(HA420 -40 -96 -EX型 , 江苏南
通华安超临界萃取设备有限公司),其它试剂均为分析纯。
1.2　药材 所用贯叶连翘药材购于成都市五块石中药材市场。
2　方法与结果
2.1　样品溶液的制备 取贯叶连翘 , 粉碎 , 过 20目筛 , 按所选因
素及水平(见表 1),采用 L9(34)正交表设计实验(见表 2)。进行
贯叶连翘的超临界 CO2提取 ,得 1 ～ 9号萃取物 ,备用。
2.2　金丝桃素含量测定 照高效液相色谱法进行测定 [ 2, 3] 。
2.2.1　色谱条件 色谱柱为 VP-ODS色谱柱(4.6 mm×150
mm, 5 μm);流动相:甲醇 -0.006 mol/L磷酸氢二钠 [ 87.5∶
12.5(V/V)用磷酸调 pH至 6.5] ;流速 1.0 ml· min-1;检测波长
590nm;柱温 30℃;灵敏度 0.01AUFS。 在上述色谱条件下金丝
桃素色谱峰能达到较好分离。其结果见图 1～ 2。
2.2.2　含量测定 精密量取金丝桃素对照品溶液(0.010 2 mg/
ml)1.0, 2.0, 4.0, 8.0, 16.0 μl,按上述色谱条件进行测定 , 以浓
度(mg/ml)对峰面积积分值(A)进行线性拟合 , 得回归方程:Y=
684 119X+9 095.9, r=0.999 9。分别精密称取上述 1 ～ 9号萃取
物适量置 50ml量瓶 , 加适量甲醇 ,超声处理 30min溶解 ,加甲醇
稀释至刻度 , 滤过 ,取续滤液作为供试品液 ,测定 , 计算 ,即得。
2.3　结果 采用中国医统软件包(PEMS)进行处理分析。结果
见表 3。
t/min
图 1　金丝桃素对照品的 HPLC图
t/min
图 2　样品的 HPLC图
表 2　因素水平表
水平 A萃取压力P/MPa
B
提取时间 t/h
C
提取温度 T/℃
D
解析压力 P/MPa
1 20 1 25 5
2 30 2 35 7
3 40 3 45 9
表 3　正交实验设计及结果
序号 A B C D 萃取物收得率 X(%)
金丝桃素含量
Y/mg· g-1
综合
评分S
1 1 1 1 1 5.20 3.02 66.58
2 1 2 2 2 6.32 3.24 75.25
3 1 3 3 3 6.78 3.65 83.02
4 2 1 2 3 5.89 3.88 81.45
5 2 2 3 1 7.06 4.56 96.44
6 2 3 1 2 7.75 3.01 79.61
7 3 1 3 2 6.99 4.12 90.29
8 3 2 1 3 5.98 3.54 77.44
9 3 3 2 1 6.31 3.05 72.70Ⅰ j 224.85 238.32 223.62 235.71
Ⅱj 257.50 249.13 229.40 245.14
Ⅲj 240.43 235.32 269.75 241.92
SSj 177.80 35.18 420.92 15.31
　　R=(X/Xmax)×40+(Y/Ymax)×60
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4 时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期
表 4　方差分析
方差来源 离差平方和(SS) 自由度(V) F P
A 177.80 2 11.61
B 35.18 2 2.30
C 420.92 2 27.49 ＊
D 15.31 2
　　F0.05(2, 2)=19, F0.01(2, 2)=99
上述结果表明 , C因素有显著的影响 , 影响因素 C>A>B>
D;且 C
3
A
2
B
2
D
2
为最佳 , 故贯叶连翘超临界 CO
2
提取最佳工艺
为:取贯叶连翘药材粗粉(过 20目筛)进行萃取 ,萃取压力为 30
MPa, 提取时间为 2h,萃取温度为 45℃, 解析压力为 7 MPa。
3　讨论
超临界流体萃取技术(SFE)是近年来发展应用的一种集萃
取 、分离于一体的萃取技术 ,具有效率高 、速度快 、选择性好 、无残
留溶剂且适用于热敏物质等优点。由于该技术具有上述优点 , 故
在天然药物提取中得到了广泛的应用 , 但贯叶连翘采用超临界
CO2进行提取的相关研究尚未见报道 , 一般认为贯叶连翘的主要
有效成分为金丝桃素 , 本次实验对贯叶连翘的超临界 CO2提取
工艺进行了研究 ,并建立了 HPLC法测定金丝桃素的方法 , 该法
精确 、重复性好 , 可较好地进行贯叶连翘超临界 CO2萃取物的质
量控制 。
参考文献:
[ 1 ] 　李　艳 ,曹雪丽 ,付　鹏 ,等.贯叶连翘的化学成分及其提取方法研
究进展 [ J] .北京工商大学学报(自然科学版), 2007, 25(6):6.
[ 2 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:附录 33.
[ 3 ] 　王晓利 ,张俊松 ,罗　谦 ,等.HPLC法测定贯叶连翘药材及提取物
中金丝桃素的含量 [ J].中药材 , 2006, 29(10):1047.
收稿日期:2008-03-01;　修订日期:2008-09-01
基金项目:湖北省郧阳医学院科研项目(No.2007ZQB01)
作者简介:张启荣(1955-),女(汉族),湖北十堰人 ,现任郧阳医学院副教
授 ,主要从事生理学教学和消化生理学科学研究工作.
蒲公英等 6种中药对小肠平滑肌活动的影响研究
张启荣 ,朱克刚 ,刘　青 ,李　莉 ,王星文 ,何华琼
(郧阳医学院 ,湖北 十堰　442000)
摘要:目的 探讨蒲公英 、大黄 、厚朴 、泻叶 、芒硝 、枳实对兔离体十二指肠平滑肌的作用。方法 采用 Magnus实验装置 , 使
用 BL-410生物信号记录系统 ,描记中国白兔离体肠平滑肌收缩 、舒张活动的曲线 ,记录 5 min作为对照 , 然后观察药物
对其作用 30min后曲线变化 ,并与对照组比较。 结果 给蒲公英 、大黄 、厚朴 、泻叶 、芒硝 、枳实各单味煎剂后 ,其中蒲公
英 、大黄 、泻叶 、芒硝使离体肠平滑肌收缩幅度 、张力 、频率增加 , 与给药前组比较差异显著(P<0.01或 P<0.05),与台氏
液组比较有显著性差异(P<0.01或 P<0.05);厚朴 、枳实两味药明显使离体肠平滑肌收缩幅度 、张力 、频率降低 , 与给药
前组比较有显著性差异(P<0.01或 P<0.05),与台氏液组比较差异有显著性(P<0.01或 P<0.05)。枳实活动抑制率
约为厚朴的 1.37倍。结论 蒲公英 、大黄 、泻叶 、芒硝促进肠蠕动;而厚朴 、枳实可降低肠平滑肌运动 ,蠕动减弱;前四味药
增加肠蠕动作用选择性可被阿托品所阻断 ,后者对乙酰胆碱所致的离体肠平滑肌的活动加强有明显的拮抗作用。其机
理一部分是通过选择性阻断肠平滑肌 M受体所介导。
关键词:蒲公英;　大黄;　厚朴;　芒硝;　泻叶;　枳实;　小肠平滑肌;　兔
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)04-0906-02
　　大承气汤出自《伤寒论》, 由大黄 、厚朴 、芒硝 、枳实组成。根
据 “六腑以通为用 ,肠宜于动而不滞 ,功在走而不在守”的基本理
论 [ 1] , 大承气汤用于治疗阳明腑实证 、热结和里热实证之热厥 、
痉病或发狂。这些病证的共同病机为实热积滞内结肠腑 ,热盛津
伤。治宜急下实热燥结 , 以存阴救阴 , 即 “釜底抽薪 , 急下存阴”
之法。方中大黄为君 , 泻热通便 , 荡涤肠胃 ,近 20年来我国学者
将它用于农药中毒抢救 [ 2];芒硝为臣 , 助大黄泻热通便 , 并能软
坚散结;厚朴 、枳实共为佐使 , 行气散结 , 消痞除满 ,并助硝 、黄推
荡积滞以加速热结之排泄。该方配伍简捷得法 ,在消化系统疾病
中有广泛的应用 [ 3] , 但多局限于某方剂用药 , 缺乏系统观察报
道 [ 4];泻叶 ,泻热导滞 , 治热结便秘 , 积滞腹胀 , 泻下时可伴有腹
痛;蒲公英属清热解毒药。 本实验分别研究大黄 、芒硝 、厚朴 、枳
实 、泻叶 、蒲公英对小肠平滑肌运动的影响 ,并初步探讨单味药作
用机制。
1　材料
中药为湖北省十堰市太和医院提供 , 用蒸馏水浸泡 2 h, 煎
30 min, 滤纸过滤 ,取其上清液为药用部分厚朴(pH6.4), 枳实
(pH5.8), 大黄(pH6.0), 芒硝(pH 7), 蒲公英(pH5.0), 泻叶
(pH5.9), 台氏液(pH7.0), 普萘洛尔(pH 5.6), 湖北华中药业
有限公司产品;酚妥拉明(pH5.8), 上海第十三制药厂产品;阿
托品(pH5.4), 安徽芜湖康奇制药有限公司产品;Ach分析纯
(pH5.4), 上海化学三厂产品。中国白兔 ,由郧阳医学院实验动
物中心提供 ,动物合格证号为 SCXK(鄂)2005-0008。
2　方法
2.1　动物分组 中国白兔 92只 ,雌雄不拘 , 体重(1908±0.69)g,
随机分成 10组 ,即对照组(n=8)、厚朴组(n=8)、枳实组(n=8)
大黄组(n=8)、芒硝组(n=8)、蒲公英组(n=8)、泻叶组(n=
8)、阿托品组(n=12)、酚妥拉明组(n=12)、普萘洛尔组(n=
12)。
2.2　离体肠平滑肌标本制备 、安装和记录 中国白兔实验前禁食
24 h,猛击枕部致昏 , 迅速剖开腹腔 ,取十二指肠平滑肌标本(2 ～
3cm), 立即放入盛有低温台氏液的小烧杯 ,用镊子夹住标本向外
翻卷一端在台氏液中轻轻荡动进行清洗 ,然后放入盛有台氏液的
培养皿中 , 用细线将标本一端系于通气管钩上 , 另一端垂直连接
张力换能器。将通气钩连同标本轻轻放入 38℃的 10 ml恒温麦
氏浴皿中的台氏液中 ,并向其中缓慢通氧(95%O2和 5%CO2),
速度控制在 30个气泡 /min。将接有标本的张力换能器分别与输
入接口连接。设置控制参数 , T、DC为默认值 , 将高频滤波调至
30 Hz, 扫描速度为 4.00 S/div。调 1 g前负荷 , 用 BL-410生物
信号采集系统 ,平衡 30 min, 待活动稳定后 ,描记中国白兔离体肠
平滑肌活动曲线 ,记录 5 min作为对照 , 然后观察药物对其作用
30 min曲线变化 ,并与给药前及对照组比较。
2.3　统计学处理方法 所有数据以 x±s表示 , 经 t检验确定实
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4