全 文 ：△基金项目:西双版纳州科技三项经费(201412)
第一作者:杨妮娜，硕士研究生，主要从事民族药质量控制与评价
研究，547018935@ qq，com
* 通讯作者:赵应红(1967 －)，女，学士，教授，硕士生导师，从事
民族药制剂研究。E － mail:328664811@ qq． com
方药纵横
不同干燥方法对傣药灯台叶 HPLC指纹图谱研究△
杨妮娜 赵应红*
(西双版纳傣族自治州傣医医院，云南 景洪 666100)
摘 要:目的:建立傣药灯台叶 HPLC指纹图谱，通过对不同干燥方法灯台叶指纹图谱的分析，为其产地初加工和质量控制
奠定基础，进一步推进傣药现代化发展进程。方法:实验使用 Agilent 1260 型高效液相色谱仪，Agilent ZOＲBAX Eclipse XDB
C18色谱柱(250 × 4． 6 mm，5 μm)，以乙腈(B)－ 0． 1%甲酸水(A)为流动相洗脱梯度，流速 1． 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，检
测波长 287 nm，进样量 7μL。洗脱程序:0 ～ 5min，5% B;5 ～ 35min，5%B ～ 26%B;35 ～ 40min，26%B ～ 56%B。结果:指纹图
谱标记了 16 个共有峰，色谱峰数量基本相似但峰面积差异较大。绝大多数共有峰面积相对标准偏差均大于 50%，其中共
有峰 6 面积的 ＲSD 高达 123． 92%。S2 阴干样品与 S1 晒干相比相似度为 0． 667，50℃烘干样品与 S1 的相似度为 0． 715，
70℃烘干者与 S1 比相似度为 0． 844，90℃烘干样品与 S1 相比相似度为 0． 774。晒干样品中鸭脚树叶碱 0． 6166 mg·g －1，阴
干样品中该成分含量明显降低，随着烘干温度的升高，鸭脚树叶碱含量先升高后降低。干燥温度对熊果酸和齐墩果酸含量
影响较小，相对稳定。结论:该研究建立的灯台叶 HPLC 指纹图谱方法具有良好的精密度、重复性和稳定性。不同干燥方
法对灯台叶中活性成分含量和整体质量有一定影响，除晒干之外可以选择阴干或者低温烘干，以 50℃为宜但不能超过
70℃。
关键词:傣药;灯台叶;HPLC;指纹图谱;相似度评价
中图分类号:Ｒ295． 3 文献标识码:A 文章编号:1006 － 6810(2016)07 － 0041 － 04
灯台叶系夹竹桃科鸡骨常山属糖胶树(Alstonia schol-
aris (L．)Ｒ． Br．)的干燥叶，傣族民间习用药材，傣语名曰
“摆埋丁别”，收载于 2005 年版《云南省中药材标准》第七
册［1 － 2］。其性寒，味苦而微涩，入火、水塔，有止咳祛痰、清
火解毒、消肿止痛之功，傣医临床常用于治疗拢达儿(腮腺
肿大)、拢答儿(颌下淋巴结肿大)、乃多皇卖唉列习特来
(肺热咳嗽，痰多)、习火(哮喘)等呼吸系统疾病和拢匹勒
(月子病)、农杆农暖(乳腺炎)、拢匹把母(癫痫病)、拢梅
接路多火档(风湿肢体关节疼痛)等诸多疑难杂症［1 － 3］。
现代研究表明灯台叶富含生物碱、黄酮、萜类等成分，具有
止咳平喘、抗炎镇痛、抗肿瘤、调节血糖血脂、增 A’a 强免
疫等药理活性［4 － 9］。生物碱是灯台叶抗炎镇痛、止咳平喘
的主要物质基础，其中以单萜吲哚类生物碱为主，如鸭脚树
叶碱。萜类成分与其抗肿瘤、抗氧化、调节血脂血糖等现代
药理活性密切相关。
灯台叶传统产区为云南南部西双版纳一带，该地属北
回归线以南的热带雨林地区，每年 6 ～ 9 月为雨季，降雨量
较大，晒干难以实现［10］。药材干燥是产地初加工的重要组
成部分，也是药材质量控制中的关键技术，直接或间接影响
药材中化学信息，进而导致药材产量和质量参差不齐［11］。
由于灯台叶质量标准整体偏低(现行标准中质量控制方法
仍以薄层鉴别为主)无法反映不同干燥方法、产地、工艺、
采收期等因素对药材质量的影响且缺乏活性成分对照品，
因此构建一种基于化学成分整体特征的质量评价方法是亟
待解决的问题。随着现代分析技术突飞猛进地发展，指纹
图谱技术应运而生。HPLC分析速度快、分离度高，其指纹
图谱能够全面表征药材中化学成分的种类和数量，以其整
体性、模糊性、可量化性的特点在中药(民族药)化学成分
整体特征的质量评价中得到了广泛应用［12 － 14］。
本研究采用 HPLC指纹图谱方法结合相似度评价，同
时建立有效成分鸭脚树叶碱、熊果酸和齐墩果酸的含量测
定方法，探讨不同干燥方法对灯台叶质量的影响，为灯台叶
合理采收、质量控制、临床疗效奠定科学基础。
1 实验材料
S1 － S5 均采自云南西双版纳景洪市，每批样品平行 5
份。S1 样品采集后切宽丝晒干，S2 样品切宽丝后室内阴
干，S3 － S5 样品切制后别分于 50、70、90℃下烤干。干品同
批次混合后粉碎、过筛、密封阴凉处保存。
2 仪器和试剂
1260型高效液相色谱仪(美国 Agilent)，Agilent ZOＲB-
AX Eclipse XDB C18 色谱柱(250 × 4． 6 mm，5 μm)，电子分
析天平(美国奥豪斯公司)，超声波清洗机(上海科导超声
仪器有限公司)，FW －100 型高速万能粉碎机(天津泰斯特
仪器有限公司)，电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器
有限公司)，乙腈(色谱纯，美国 fisher)，甲醇(色谱纯，美国
fisher)，超纯水(Millipore 纯水系统，美国 Millipore 公司)，
鸭脚树叶碱(中国食品药品检定研究院)，熊果酸、齐墩果
酸(上海源叶生物科技有限公司)。
3 实验方法
3． 1 指纹图谱
3． 1． 1 色谱条件:
142016 年 7 月第 7 期 中国民族医药杂志
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2016.07.027
Agilent ZOＲBAX Eclipse XDB C18 色谱柱(250 × 4． 6
mm，5 μm);流动相为乙腈(B)－ 0． 1%甲酸水(A)，洗脱
梯度;流速 1． 0 mL·min －1;柱温 30 ℃;检测波长 287 nm;
进样量 7 μL。
梯度洗脱程序:0 ～ 5 min，5% B;5 ～ 35 min，5% B －
26% B;35 ～ 40 min，26% B － 56% B。
3． 1． 2 供试品溶液的制备:分别取 5 批灯台叶粉末 0． 5000
g，精密称定，置洁净具塞试管中，加水 10 mL，超声提取(53
Hz)40 min，取出，干燥玻璃滤器过滤，滤液用 0． 22 μm微孔
滤膜过滤，续滤液为够供试品溶液。
3． 1． 3 样品测定:精密吸取供试液 7 μL，注入高效液相色
谱仪，按“3． 1． 1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。
3． 1． 4 数据处理:将 5 批样品色谱图原始数据导入“中药
色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A 版)”进行相似度评
价。
3． 2 含量测定
3． 2． 1 对照品溶液制备:精密称取鸭脚树叶碱、熊果酸、齐
墩果酸对照品各 16． 1mg、10mg、12mg，于 10mL 容量瓶中，
加色谱级甲醇溶解后定容到刻度，配制成浓度为 1． 61mg·
mL －1、1． 0mg·mL －1、1． 2mg·mL －1的对照品溶液，备用。
3． 2． 2 供试品溶液制备:鸭脚树叶碱:分别取各批次样品
1 g，精密称定，置洁净试管中，加 PH = 2 的盐酸水溶液 20
mL，超声提取 30 min，取出，干燥玻璃漏斗过滤，滤液用氨
水调至 PH = 8，转移至干燥的分液漏斗中，三氯甲烷萃取两
次，每次 20 mL，合并三氯甲烷层，水浴挥干，残渣加色谱级
甲醇溶解，定容于 5 mL容量瓶中备用。
熊果酸和齐墩果酸:精密称定样品 0． 1 g 于洁净具塞
试管中，加入甲醇 2 mL，混匀，超声提取 30 min，取出，提取
液用 0． 22 μm微孔滤膜过滤，滤液备用。
3． 2． 3 色谱条件:鸭脚树叶碱:Agilent ZOＲBAX Eclipse
XDB C18 色谱柱(250 × 4． 6 mm，5 μm);流动相为乙腈 －
0． 1%氨水(40:60)，流速 1． 0 mL·min －1;柱温 30 ℃;检测
波长 287 nm;进样量 10 μL。
熊果酸和齐墩果酸:Agilent ZOＲBAX Eclipse XDB C18
色谱柱(250 × 4． 6 mm，5 μm);流动相为甲醇 － 0． 1%甲酸
水(88:12)，流速 1． 0 mL·min －1;柱温 30 ℃;检测波长 210
nm;进样量 10 μL。
3． 2． 4 线性关系考察:精密吸取鸭脚树叶碱、熊果酸、齐墩
果酸对照品溶液，加甲醇稀释至不同浓度，由低至高依次进
样，以浓度(mg·mL － 1)为横坐标(x)，峰面积为纵坐标
(y)绘制标准曲线，计算回归方程和相关系数(Ｒ2)。采用
无限稀释法计算各标准品检测限(LOD，S /N = 3)和定量限
(LOQ，S /N = 10)，结果见表 1。3 个标准品在线性范围内
相关系数(Ｒ2)均大于 0． 999，表明其线性范围良好。
表 1 鸭脚树叶碱、熊果酸、齐墩果酸线性关系考察结果
对照品 线性方程 线性范围(mg·mL －1) Ｒ2 检测限(mg·mL －1) 定量限(mg·mL －1)
鸭脚树叶碱 y = 4355． 53x － 117． 08 0． 0188 － 1． 6100 0． 9991 0． 0038 0． 0094
齐墩果酸 y = 4031． 55x － 62． 08 0． 0336 － 1． 2000 0． 9996 0． 0097 0． 0266
熊果酸 y = 10622． 36x － 4． 81 0． 0100 － 1． 0000 0． 9998 0． 0021 0． 0062
3． 2． 5 加样回收试验:平行称取 L1 样品 9 份，分 3 组(熊果
酸组、齐墩果酸组、鸭脚树叶碱组)，每组加入相当于原药材
该成分实际含量 80%、100%、120%的对照品，按“3． 2． 2”项
下方法制备供试溶液，按“3． 2． 3”项下色谱条件测定加入对
照品后每个成分的总含量，每份样品平行测定 3 次，计算 3
个标准品回收率。结果鸭脚树叶碱平均回收率为 99． 58%，
熊果酸平均回收率为 100． 31%，齐墩果酸平均回收率为
101． 29%，表明该方法准确可行。
3． 3 方法学考察
3． 3． 1 指纹图谱方法学考察
精密度试验:取 S1 样品，根据“3． 1． 2”项方法获得供试
品溶液，按“3． 1． 1”中色谱条件连续进样 6 次，考察各共有
峰相对保留时间和相对峰面积。结果相对保留时间 ＲSD ＜
0． 83%，相对峰面积 ＲSD ＜ 1． 96%，表明仪器精密度良好。
重复性试验:平行取 S1 样品 6 份，采用“3． 1． 2”项中的
方法获得供试品溶液，各取 7 μL，依次进样，考察各共有峰
相对保留时间和相对峰面积。结果相对保留时间 ＲSD ＜ 1．
07%，相对峰面积 ＲSD ＜ 2． 26%，表明方法重复性良好。
稳定性试验:取 S1 样品，按“3． 1． 2”方法得到供试品溶
液，分别于 0、2、4、8、12、24 h进样分析，记录色谱图，考察各
共有峰相对保留时间和相对峰面积。结果相对保留时间
ＲSD ＜ 0． 38%，相对峰面积 ＲSD ＜ 3． 11%，表明供试品溶液
在 24 h内稳定性良好。
3． 3． 2 含量测定方法学考察
精密度实验:取同一批次样品，按“3． 2． 2”项下方法制
备供试溶液，按“3． 2． 3”项下色谱条件进行测定，连续进样 6
次，计算每个成分 6 次峰面积的相对标准偏差，鸭脚树叶碱
ＲSD为 0． 08%，熊果酸 ＲSD为 0． 13%，齐墩果酸 ＲSD为 0．
16%，结果表明仪器精密度良好。
重复性实验:平行称取同一样品 6 份，按“3． 2． 2”项下
方法制备供试溶液后测定。以每个成分 6 次峰面积 ＲSD为
参考，鸭脚叶碱 0． 29%，熊果酸 0． 64%，齐墩果酸 0． 53%，
表明方法重复性较好。
稳定性考察:取同一批次样品，分别制备供试品溶液后
0，2，4，6，8，12，24，48 h测定，每个成分 8 次进样峰面积 ＲSD
在 0． 29% ～ 1． 82%，表明样品供试液在 48 h内稳定。
4 结果与讨论
4． 1 HPLC指纹图谱的建立:以常规晒干样品为参考，参考
图谱见图 1。原始数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价
系统(2004A版)”形成不同干燥方法样品指纹图谱如图 2。
通过多点校正标记了 16 个共有峰，共有峰面积及 ＲSD见表
2。图 2 指纹图谱可以清晰地看到不同干燥样品中色谱峰
数量基本相似但峰面积差异较大，表明不同样品化学成分
基本相似但含量差异明显，说明不同干燥方法对灯台叶中
化学成分含量影响较大，进而产生样品质量差异。表 2 中
可以看到除共有峰 9，11 外，其余共有峰面积相对标准偏差
均大于 50%，其中共有峰 6 面积的 ＲSD 高达 123． 92%，表
明不同样品中同一色谱峰面积参差不齐差别明显，揭示了
24 中国民族医药杂志 2016 年 7 月第 7 期
不同干燥方法对样品中大多数化学成分影响较大，以 6 号
共有峰最为明显。
图 1 参照图谱
图 2 不同干燥方法灯台叶样品指纹图谱
表 2 16 个共有峰面积和 ＲSD
共有峰
序号
S1s S2 S3 S4 S5
ＲSD
(%)
1 109． 816 132． 054 36． 975 30． 676 77． 313 57． 28
2 538． 604 163． 069 57． 62 265． 093 312． 974 67． 54
3 65． 013 36． 435 10． 027 21． 312 51． 634 60． 21
4 1024． 656 341． 213 123． 646 384． 76 301． 708 79． 08
5 127． 667 63． 586 14． 334 45． 184 29． 755 78． 38
6 67． 571 278． 411 38． 153 15． 55 37． 498 123． 92
7 94． 835 64． 206 19． 276 34． 708 61． 613 53． 1
8 70． 965 130． 667 37． 677 39． 776 99． 968 52． 63
9 48． 631 45． 296 10． 016 38． 282 26． 672 46． 54
10 769． 059 520． 183 179． 298 280． 352 350． 764 55． 09
11 280． 535 190． 826 57． 832 190． 625 172． 565 44． 57
12 402． 488 281． 503 84． 474 119． 166 190． 462 59． 75
13 44． 616 38． 511 11． 892 13． 021 20． 192 58． 61
14 49． 479 33． 388 10． 452 20． 732 23． 079 53． 89
15 123． 408 109． 363 28． 979 62． 177 54． 605 52． 09
16 199． 302 190． 537 36． 483 36． 183 62． 223 78． 96
4． 2 相似度评价:将 5 批样品原始图谱导入“中药色谱指
纹图谱相似度评价系统(2004A版)”进行相似度评价，结果
见表 3。以常规晒干样品 S1 为参考，S2 阴干样品与 S1 相比
相似度为 0． 667，质量差异较大。3 批烘干样品与 S1 相比相
似度均大于 0． 7，其中 50℃烘干样品与 S1 的相似度为 0．
715，70℃烘干者与 S1 比相似度为 0． 844，90℃烘干样品与
S1 相比相似度为 0． 774，随着温度升高相似度先升高后降
低，表明在烘干过程中样品质量差异较大，温度是影响样品
质量的重要因素。
表 3 不同干燥方法灯台叶样品相似度评价结果
S1 S2 S3 S4 S5
1 0． 667 0． 715 0． 844 0． 774
1 0． 983 0． 903 0． 956
1 0． 929 0． 97
1 0． 972
1
4． 3 鸭脚树叶碱、熊果酸和齐墩果酸含量测定:不同干燥
样品中鸭脚树叶碱、熊果酸及齐墩果酸含量测定结果见表 4
和图 3。常规晒干样品中鸭脚树叶碱 0． 6166 mg·g －1，阴干
样品中该成分含量明显降低。随着烘干温度的升高，鸭脚
树叶碱含量先升高后降低，50 ℃时含量最高，70 ℃时与晒
干样品中含量相当，90 ℃时已明显下降。因此，临床上在治
疗呼吸系统疾病时，以晒干或低温烘干为较好的干燥方式，
不宜超过 70 ℃。不同干燥方法对熊果酸和齐墩果酸含量
影响较小，仅在高温时略有升高，相对稳定。
表 4 不同干燥方法灯台叶中鸭脚树叶碱、熊果酸和齐墩果酸含量
干燥方法 晒干 阴干 50℃ 70℃ 90℃
鸭脚树叶碱(mg /g) 0． 6166 0． 5076 0． 8593 0． 6377 0． 5185
熊果酸(mg /g) 4． 90 5． 13 4． 71 5． 49 5． 96
齐墩果酸(mg /g) 5． 18 5． 42 5． 15 5． 59 6． 01
图 3 不同干燥方法灯台叶中鸭脚树叶碱、
熊果酸和齐墩果酸含量折线图
5 结 论
本研究建立的灯台叶 HPLC 指纹图谱方法具有良好的
精密度、重复性和稳定性，为灯台叶质量控制提供科学依
据。
不同干燥方法对灯台叶中活性成分含量和整体质量有
一定影响，在常规干燥方法(晒干)无法满足需要时，可以选
择阴干或者低温烘干，以 50℃为宜但不能超过 70℃。
参考文献
［1］云南省食品药品监督管理局． 云南省中药材标准 2005
年版第七册［S］． 昆明:云南科技出版社，2013．
［2］中科院植物志编委会．中国植物志［M］． 北京:科学出
版社，1977:90．
342016 年 7 月第 7 期 中国民族医药杂志
［3］康朗腊． 档哈雅龙 ［M］． 昆明:云南民族出版社，
2003:20 － 29．
［4］Qin X J，Zhao Y L，Song C W，et al． Monoterpenoid In-
dole Alkaloids from Inadequately Dried Leaves of Alstonia
scholaris［J］． Natural Products and Bioprospecting，2015，
5(4):185 － 193．
［5］惠婷婷，孙赟，朱丽萍，等． 云南傣族药物灯台叶中黄
酮类成分［J］． 中国中药杂志，2009，34(9):1111 －
1113．
［6］Zhu G Y，Yao X J，Liu L，et al． Alistonitrine A，a Caged
Monoterpene Indole Alkaloid from Alstonia scholaris［J］．
Organic letters，2014，16(4) :1080 － 1083．
［7］Arulmozhi S，Mazumder P M，Lohidasan S，et al． Antidia-
betic and antihyperlipidemic activity of leaves of Alstonia
scholaris Linn． Ｒ． Br［J］． European Journal of Integrative
Medicine，2010，2(1) :23 － 32．
［8］Shang J H，Cai X H，Feng T，et al． Pharmacological eval-
uation of Alstonia scholaris:Anti － inflammatory and anal-
gesic effects ［J］． Journal of ethnopharmacology，2010，
129(2) :174 － 181．
［9］Feng L，Chen Y，Yuan L，et al． A combination of alka-
loids and triterpenes of Alstonia scholaris (Linn．)Ｒ． Br．
leaves enhances immunomodulatory activity in C57BL /6
mice and induces apoptosis in the A549 cell line［J］． Mol-
ecules，2013，18(11) :13920 － 13939．
［10］窦军霞，张一平，于贵瑞等． 西双版纳热带季节雨林
水热通量［J］． 生态学报，2007，27(8):3100 － 3108．
［11］张萃蓉，刘先齐，吴忠应等． 中药质量与产地加工
［J］． 中国中药杂志，1989，14(2):20 － 21．
［12］Qin K，Wang B，Li W，et al． Quality assessment of raw
and processed Arctium lappa L． through multicomponent
quantification，chromatographic fingerprint，and related ch-
emometric analysis［J］． J Sep Sci，2015:1 － 8．
［13］Liu H，Liang J，Li P，et al． Core Bioactive Components
Promoting Blood Circulation in the Traditional Chinese Med-
icine Compound Xueshuantong Capsule (CXC)Based on
the Ｒelevance Analysis between Chemical HPLC Fingerprint
and In Vivo Biological Effects ［J］． PloS one，2014，9
(11) :e112675．
［14］Wang J，Tong X，Li P，et al． Bioactive components on
immuno － enhancement effects in the traditional Chinese
medicine Shenqi Fuzheng Injection based on relevance anal-
ysis between chemical HPLC fingerprints and in vivo biolog-
ical effects［J］． J Ethnopharmacol，2014，155(1) :405 －
415．
2015 年 9 月 7 日收稿
作者简介:杨彩玲(1972 － )女 内蒙古包头人 主任药师 大学本科
从事药物制剂和质量管理方面的工作 电话 0472 － 3622273 或
15661312340
蒙药匝迪 － 7 胶囊质量标准研究
杨彩玲1 菅艳艳2
(1．包头市蒙中医院 014040; 2．内蒙古包头市食品药品检测检定中心 014060)
摘 要:目的:制定蒙药匝迪 － 7 胶囊质量标准。方法:采用薄层色谱法、显微鉴别、高效液相色谱法对蒙药匝迪 － 7 胶囊定
性、定量分析。结果:羟基红花黄色素 A在 0． 04451 ～ 0． 4451mg /ml范围内呈良好的线性关系，回归方程为:Y = 32583000X
－ 228535 r2 = 0． 99996。结论:该方法可用于蒙药匝迪 － 7 胶囊质量控制。
关键词:蒙药;匝迪 － 7 胶囊;质量标准
中图分类号:Ｒ291． 2 文献标识码:A 文章编号:1006 － 6810(2015)01 － 0044 － 03
蒙药匝迪—7 胶囊为蒙医临床应用的经验方，由肉豆
蔻、红花、丹参、白云香、山柰、紫檀香、益母草膏等 7 味组
成，具有行气活血作用，临床用于冠心病、高血压，疗效显
著。肉豆蔻为此方君药。
1 实验材料
1． 1 实验仪器:岛津 LC—20AT泵，SPD － M20A型检测器，
岛津 Lab － Solution工作站，梅特勒 AL204 － IC型电子天平。
1． 2 实验药品:试剂与试药:羟基红花黄色素 A (111637
－ 201207，含量以 91． 8%计，供含量测定用):从中国药品
生物制品检定研究院购买;匝迪 － 7(批号:20160105、
20160122、20160125)由包头市蒙中医院提供;模拟样
(20160128)自制;乙腈、甲醇为色谱纯，水为高纯水，其它
试剂均为分析纯。红花对照药材(批号:120907 － 201310):
中国药品生物制品检定研究院购买。硅胶 G 薄层板:青岛
海洋化工厂生产。
2 实验方法
本品为药材粉末和提取物制成的胶囊，方中红花的显
微特征都比较明显，故建立显微鉴别，并对处方中的红花建
立了薄层鉴别。
2． 1 显微鉴别:正文中鉴别特征所代表的药材为:花粉粒
类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约至 60μm，具 3 个萌发孔，
外壁有齿状突起(红花)，见图 1。
44 中国民族医药杂志 2016 年 7 月第 7 期
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2016.07.028