全 文 ：食用菌学报 19 5 , 2 ( 1) : 2 1一 2 5
A c她 E d ul is F u ng i
槐耳菌质成分对小鼠免疫功能的影响
陈慎宝 丁如宁
(南京医科大学徽生物学教研室 . 南京 21 0 2 9)
摘 要 中国古代著名药用菌槐耳俘乍“ nez 姗 rD ib n帅hi 勿 M ur .) 在营养基质上进行固休发酵 , 产生槐耳菌质 , 从中提取的清* 及进一步提取的蛋白多搪 , 都有显著的抑制动物休内脚和延长
生命等作用 , 抑瘤率可达 50 %左右 . 清青治疗中晚期原发性肝癌总有效率达 75 . 71 叫 , 它们具有促进
多种免疫功能的作用 , 是良好的生物反应调节剂仍RM ) , 并有可能进一步扩大其适应症 .
关健词 槐耳 ; 菌质 ; 清青 ; 生物反应调节剂
槐耳是中国著名的药用菌 , 经固体营养基质上发酵而产生的槐耳菌质川 , 用以提取的清膏
及进一步提取的多搪蛋白 ,均已被证实具有显著的抑瘤和延长荷瘤动物生命等作用 , 抑瘤率达
50 % 左右 . 所制成的槐耳冲剂用于治疗肝癌 , 疗效良好 , 总有效率达 75 . 71 % . 槐耳菌质与冲剂
均已被卫生部批准为中药一类新药 .
实验证实 ` ” , 槐耳菌质所提取的清膏及进一步提取的多糖对小鼠腹腔巨噬细 胞的吞噬功
能有非常明显的促进作用 , 多糖还能增强人脐血淋巴的移植物抗宿主反应及人脐血淋巴细胞
活性花环的形成率 , 对人体外周血单核细胞在新城鸡瘟病毒困 D V ) 、 植物血凝素 (P H A )诱生 : 、
下干扰素和促进N K细胞活性方面均起协同作用 , 提示其抗癌活性的主要机理与促进机体的免
疫功能有关 .
为 了进一步研究槐耳冲剂的抗癌机理和试验扩大临床适应症 , 对槐耳菌质成分又进行了
一系列的免疫功能侧定 .
1 材料与方法
1
.
1 实验动物和材料
1
.
1
.
1 动物 昆明鼠 (南京医科大学实验动物 中心提供 ) ; I C R 鼠 (南京中医学院动物房提供 ) .
体重为 18 一20 9 , 雌雄随机分组 .
1
.
1
.
2 材料 槐耳清膏及多糖 (南京中医学院药用菌研究室提供 ); P ol y L C注射液 (天津市生
物化学制药厂 ) ;干扰素诱生剂伽 D v )( 本教研室 自备 ;) 鼠标准干扰素 (军事医学科学院五所) ;溶
菌酶测定板 (南京大学生化系 )·
L Z 方法
1
.
2
.
1 槐耳清膏 、 多糖诱生小鼠血清干扰素的测定 〔’ 〕 取体重 18 一 20 9的小 鼠任C R种系 ) , 每
组 6只 , 试验组用槐耳清膏 (每只每天0 . 4m l , 每 m l含槐耳菌质0 . 89 提取清膏) , 对照组用生理盐
水每天给小鼠灌 胃 , 每只 0 . 4m l , 于第 7天每只小 鼠腹腔注射 N D V O . s m l . 6小时后摘眼取血 , 分
离血猜冻存 , 用于干扰素活性测 定 . 槐 耳多糖 实验组 用腹 腔注射法 , 每只。 . 4m l (多糖含量
10 m g / m ;l) 对照中一为生理盐水对照组 (每只 0 . 4m l , 腹腔注射 ) , 另一为空白对照组 . 冬组于泣
收稿 日期 : 1 994一 10一 3 1初稿 ; 1 9 94一 11一 2 4修改稿 .
DOI : 10. 16488 /j . cnki . 1005 -9873. 1995. 01. 005
22 食 用 菌 学 报 2卷
射后 6小时摘眼取血 , 分离血清冻存备用 . 干扰素活性测定采用微量细胞培养病变份 S V 所致 )
抑制法 , 以能抑制 5 0 %细胞病变的血清最高稀释度的倒数为其干扰素的效价 .
1
.
2
.
2 巨噬细胞吞噬试验 〔 ` 」 槐耳清膏和多糖用生理盐水分别配成 l o m g / m l和 10m g / m l ,
每日给小鼠灌 胃 , 生理盐水为对照组 , 饲养 10 天后腹腔注射3 肠鸡血球 , 每只 o . s m l , 2小时后杀
死 , 腹腔液涂片 ,瑞 氏染色 ,计数 10 个 巨噬细胞 , 计算吞噬细胞的吞噬百分率 .
1
.
.2 3 血清溶菌酶含量侧定 “ ’ . ’ 同上剂量饲养的小白鼠 10 天后眼眶取血 , 分离血清 . 用溶菌
酶板侧定溶菌酶含量 . 每孔 10 川血清 , 37 ℃ 4小时 , 甲醛固定后测量溶菌圈直径 , 根据标准曲线
查得血清溶菌酶含量 .
L .2 4 血清抗体效价测定 ` 了’ 用上述剂量的槐耳清膏 、 多搪及P ol y L C分别给小 鼠灌胃或腹
腔注射 10 天 , 并于第 2天 、 第7天两次注射伤寒菌苗 . 第 n 天摘眼取血 , 分离血清 , 作试管凝集反
应侧定抗体效价 ,根据凝集程度分五级判分 , 按下列公式计算抗体积分 :
抗体积分~ (1 5 , + 2 5 , + 3 5 : + … … N S n )
式中S前 1 , 2 , .3 二 N 代表该管内稀释度的指数 , S , , S : , 5 3… S n 代表该管凝集程度的判分·
1
.
2
.
5 淋巴细胞转化试验 (微量法 )〔” 试验各组小鼠的肝素抗凝血分别加人含有 P H A的 1 64 0
培养液中 , 37 ℃ 64 小时后 , 用冰醋酸一甲醇固定 , 经离心等步骤后 , 吸一滴细胞液于玻片上使其
自然散开 ,干燥后瑞氏染色 ,计数 10 0个淋巴细胞 , 计算其转化率 .
2 结 果
2
.
1 对小鼠血清干扰素的影响 研究结果表明 , 槐耳清膏 、 多糖均能提高诱生小 鼠血清干扰
素的能力口 < 0 . 0 1) , 详见表 1 、 表 o2
表1 槐耳清裔诱生小欣血清干扰案的结果
T a b l e 1 T h e r e s u l t o f m i e e s e r u m i
n t e r fe r o n (I F N ) i n d u e e d b y T R M e l e a r p a s t e
组 别
G or u脚
以 数
N u m b er o f m ie e
干扰索平均单位
A v e r a g e u n i t o f I F N
P值
P v a l u e
槐耳清 I 组
T R M e l e ar P朗 te
对 照 组
C
o n t or l
3 0洲 . 7 3 < 0 . 0 1
12 25
.
9
T a b l e Z
组 别
Gor
u P s
表 2 槐耳多箱诱生小段血清干扰紊的结果
T h e r e 吕u l t o f m i ce s e r u m I F N i n d u e e d b y T RM p r o t e o g l y ca n
鼠 数
N u m b
e r o r 爪 i e e
干扰素平均单位
A v e r a g e u n it o f I F N
P 值
P v a l u e
槐耳多精组
T R M p or te o g ly
e
an
生理盐水组
N O ” . a l s a li n e
空白对照组
B l a n k C o n t r o l
20 3 1
.
2 5 < 0
.
0 1
50 7
.
7 5
加弓. 7 5
2
.
2 对吞噬细胞吞噬功能的影响 单核吞噬细胞在机体的非特异性和特异性免疫中均起重
要作用 , 经小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬作用 , 可观察其吞噬功能 . 表 3表明槐耳清膏 、 多糖对小 鼠
1期 陈镇宝等 :愧耳蔺质成分对小良免疫功能的影响
的吞曦细饱的吞曦功能有且著增强作用伊 < 0 . 0 1 ).
较3 a 耳清 , 、 , . 对小吸吞 . 细 . 吞吸功能的形晌
h b】e 3 几 e .价 ct o f TRM d “ r p . . et 如 d p or et 帷 ly .c n o n p h . 心co yt 让 fu . ` t io n of . 五。 . p如和灯加
组 别
Gor u P.
吸 傲
N恤 . b时 of . ic .
吞成百分率 X土 S D
Ph叱价灯幼 e r川比 (% )
P位
P 甲目娜
倪耳清 , 组
T RM e le ar P . 加
倪耳多箱组
了 RM P加切。 g场c助
对 旅 组
C o n恤 , 1
5 3
.
14土 2 . 68 < 0 .0 1
54
.
7 1土 2 . 2 1 < 0 .0 1
4 L 83 土 3 .皿
乞 3 溶菌吟含童的变化 溶菌醉主要来源于吞曦细胞 , 可广泛分布于血清及其它体液中 , 在
一定程度上反映了大吞咙细胞的功能 , 并与吞曦细胞作用相同 , 属于非特异性免疫 . 基于溶菌
醉对敏感的徽球菌的溶菌作用 , 可在体外检侧 。 根据溶菌圈直径的大小洲定鼠血清中溶菌醉的
含量 , 以示溶菌醉的浓度变化 . 结果表明 (表 4) ,槐耳清青 、 多糖都能提高小鼠血清中的溶菌醉含
量 ( P ( 0 . 0 5 ) .
衰4 槐耳清 , 、 多粉对小段血清落菌醉含一的形晌
T a b l e 4 Th e e丘七眺 o f T RM e犯 a r O a s et a n d , r o et o 豆I, 。 n o n 比 e e o n t e n t of m ice ` e r “ m ly s o叮. e
组 别
O or u P
.
眼 数
N ut . b er o f m ic e
溶苗醉含 t m g / L X 土 SD
C o n et nt o f ly的` y . e
P值
P v 目 u .
倪耳清* 组
T R M e le ar 别. 加
倪耳多 . 组
T R M P or et 心嗯珍咖对 服 组
1 6 1
.
38 土 6.2 1 1 < 0
.
06
164
.
4 7 1 1 7
.
28 < .0肠
12 1土 67 . 64
U O n 幻幻 1
. . . . . . . . . . .口 . . . . . . . . . . .口口 . . . . . . .
表 5 挽耳侧粼对小皿产生抗体的形晌
T . b l e 5 T h e e肠ce t of T RM p r印 a r a t io n o n a n t i b o d y p r o d u ct i o n o f m loe
Gor u p.
成 傲
N仙。 b er o f m ic e
杭体积数平均值 X 土 S D
A , e r a g e v al u e o f an t i b冈 y i n et gr . et
P位
P , 目 . .
往耳清 , 组
T RM d
e a r PaB et
倪耳多褚组
T RM P r o t e o g ly c
a n
P o ly l
: C (注胃 )
oP ly L C a
.咖 am c h)
oP ly L C 《班胜注射 )
P o ly l : C 0
.
p e n ot n e a l)
生理盆水对服组
N o妇口 . 1即】奋” e c o n 坛 0 1
6弱 .6 ? 土么以】.盯 < 0. 0 1
726
.价土 8 .9 14 < 0 .0 1
736 土之讨 .邵 < 0 . 0 1
5 7 6土 2 .9四 < 0 . 0 1
3 1 2土 1时 . 58
24 食 用 菌 学 报 2卷
.24 对小民杭体形成的影响 观察了伤寒杆菌 H与鼠抗伤寒杆菌抗体的凝集反应的程度 , 很
据抗体积数表示各试验组的抗体状况 , 结果显示 (表5) , 槐耳清膏 、 多糖处理与生理盐水组有非
常显著的差异 (P < 0 . 01 ) , 与P ol y L C组之 间无差异 ,均可提高机体产生抗体的水平 .
.2 5 对细胞免疫功能的影响 一般认为细胞免疫在肿瘤免疫中很重要 , 本试验通过计算淋巴
细胞转化率了解小鼠用药后细胞免疫功能状况 ,结果见图 .1
!瓣|赫门l以叶淤!
.
ǎ次à.砂ó-uo1后己-,`|:。>月卜0名d三鸽闷
ǎ次à份汉愈卜坷岛翻田趁
对瓜组
C o n t or l
愧耳清* 组 愧 耳多箱组 组别
味M e l e a r TR M p r o t即 g l y c a n G r o u p s
P a s t e gr
o u P 盯 o u p
圈 1 T RM 制剂对小鼠细胞免疫功能的影晌
F i g
.
1 T h e e fe
c t o f T R M p r e p a r a t i o n o n e e l
一
m e d认 t e d im m u n i t y o f m i e e
本试验中小鼠淋巴细胞经 P H A处理后 , 实验组淋巴细胞转化率均高于生理盐水对照组 ,
但 P < 0 . 0 5 ,可能因各组的实验动物数较少 (每组 4 只 )所致 , 拟进一步试验 。
3 讨 论
槐耳菌质含有多种有机成分与矿质元素 , 所提取的清膏及进一步提取的多糖均有显著的
动物体内抑瘤作用 , 其制剂 一一槐耳冲剂 已用于治疗肿瘤 . 本试验结果表明 , 槐耳清膏及多糖
都有明显诱生小鼠体内干扰素 ,促进吞噬细胞吞噬功能 , 提高小鼠血清溶菌酶含量和增加抗体
产生能力等作用 , 各实验组与对照组有极显著或显著差异 . 对小 鼠淋巴细胞转化也有一定的促
进作用 , 这些都是反映机体非特异免疫和特异免疫 (体液免疫和细胞免疫 )的重要常规指标 。
在抗体效价测定试验中 , 以 P ol y l : C为阳性对照组 , 已知它能诱生干扰素 ,促进免疫功能 ,
有广谱抗病毒作用 . 注意到灌 胃给药也可提高抗体效价 ,拟进一步用槐耳清膏及 P ol y L C同时
进行小鼠灌胃 , 侧定其抗体效价 . 如有所提高 , 即表明有增效作用 , 意义更大 .
以上研究表明槐耳冲剂属于一种 良好的生物反应调节剂 〔” . 其抗癌机理可能与它有较强
的免疫促进作用有关 . 新的研究资料还表明槐耳清膏及多糖试用于鸭肝炎病毒 (D H B V ) , 可使
鸭血清中的 H B V一 D N A水平显著下降 . 因此 , 它还有望应用于其它疾病 。
参 考 文 献
庄毅 . 药用真菌的固体发酵 . 中国药学杂志 , 1 9 91 . 2以:2) 80 ~ 82 .
庄毅 . 槐耳菌的杭疡研究 . 中国药物学会成立大会论文摘要 , 19 3 . 5 . 2 26 ,
杜平主编 , 干扰素效价侧定方法 . 医用干扰素 . 上海徽生物学会 , 1 980 . 182 .
l期 陈该宝等 : 愧耳菌质成分对小鼠免痰功能的影响
朱信厚等 . 卡介苗对照射小民旅腔巨曦娜脸吞曦消化功能的形响 . 上海免疫学杂.志 , 1984
. 《 :1) 9 .
张宜该等 . 关于单核一巨曦细班系统的吞曦作用和其溶菌醉水平在抗感染中的盒义的研究 . 中华徽生钧和
免疫学杂志 , 19 84 . 《为: 竹 .
U t w ac k G
.
P h o ot m e廿 ic d e et r m还吐 i曲 o f l y s o 艺叨以 e a e t i v i t y . rP o e . S o e . E x p . B i e .
M讨, 19 5 5 .州:3) 40 1 .吴铁等 . 阿司匹林对小限免丧功能的影响 . 滋江医学院学报 , 19 84 . 2 (2 :) 灯 .
吴铁等 . 用P H A在小鼠体内诱发琳巴细饱转化的初步观察 . 上海免疫学杂志 , 1 9 84 . 《 :1) 57 ,
李康生等 . 白细跑介家一 1的杭肿启效应 . 国外医学免疫分册 , 1创抓) . 2 : 57 .
4
1勺
内4Rù
T h e E 月笼e t o f rT a o e te s or b i n iop h i al M u r r
.
( T R M )
S u b s t a n t i a l C o m P o s i t i o n o n I m m u n e
.
F u n e t i o n o f M i e e
C h即 S h en b a o D i n g R u n i n g .
(刀叩` r 切te 孔 ` of 沉让r o6 of l睡沙 , 扣舀in 协召 从七成ca l U 几i戈 sr 〔妙 , N d n)’ i昭 2 1加 29 )
A b眺 r a ct T 知or u g h os il d fe r m的at iot u in nu 衍 i e吐 s u bs tr a t u拍 , 乃。 me 如 or ib in op 从么 M明 .
(T R M )
, 帕 ed as a 血m o u 名 位 e d i e运杜 加 n g i in a n c ie n t e h in a , p r de u ce d fu 姆al su bs at o ce 丘onz w h i e h
cl e ar p a s et an d 加 rt h e r 运ol at e d 价。 t e o g ly c 曲 h匕d be e n e 盆 tr a Ct de . B o t h c比ar , 始 et 叻 d
p拍 et d g l y ca n 恤 d t切 . o r 如五山主灯心n e邝阮 t 呱 e幻冲滋垃 . 饭 1 履 n u . a肠 妞 n d p or ol n gde ht e l日池 o f
i n] 俗吐 de a n in进 l s . A” d 也 . t翅 . or i毛 h ib it on ar et 15 a ob u t扔 % . P at 加 n st w it h m id d le or l a et r P O r l o d
, 比 m和叹 h e p a ot 垃 a 0 . 加吐 节 i比 t h e , 坦切 , h ad g o t a ot at l e伍 c ie n t ar et o f a bo u t 76 % . B心 t h ht e
T RM e l e a了 p a ` et 叨 d t城 p or et o g l y e助 p or 过。切d v a ir o场 ” 崖日处u n e fu n e t i o期 . T五e y aer g o o d
ib 0 1o g l c a l r 创翔。 劝旧e m . 五五. 么。 d m a y 比 拙de ot 。 犯a t ot h er a d叨 it v e d让陀吐 s e 氏
K e y . o d s 介` 侧峨脚 找心如冲几` 她 M ” 区了 . ; F u 刀 g似 的比自山 c e ; C l e a了 P a ` et ; B访OI g ic a l 六拐 p o n s e
m do i五er