全 文 ：No. 1 2 3 4 5 6 7
1 μ 3.13 4.01 5.00 6.60 7.69 10.0 15.2
1 S 0.327 0.313 0.443 1.20 1.39 2.51 4.35
Δp(PHB g L) 0.079 0.076 0.064 0.085 0.099 0.129 0.147
Δt(h) 3.0 2 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
X(g L) 2.40 2.10 2.05 2.08 2.12 2.26 2.23
qp(h-1) 0.011 0.018 0.031 0.041 0.042 0.057 0.066
S0(g L) 5.3 5.3 4.47 3.2 3.5 4.0 4.0
ΔS(g L) 1.792 1.313 1.105 0.889 0.904 0.900 0.622
ΔX(g L) 1.920 1.313 1.025 0.780 0.689 0.565 0.368
yx s(g g) 1.071 1.000 0.928 0.878 0.763 0.628 0.592
2.2　菌体生长与限制性基质消耗在连续培养前 , 先进行 23h 的分批发酵 , 当细胞浓度达到
6.46g L , 葡萄糖剩余 8.3g L , 菌体生长处于对数期 , 开始不同稀释度的连续培养与数据测定。当稀释度为 0.32 时菌体生长第一次达到稳态 ,此刻葡萄糖残留浓度为 3.06g L ,细胞浓度为
2.4g L。通过控制流量 F , 使稀释度 D值不断变换 , 此时的 D值等于比生长速率μ。相应实验数据见表 1。从分批发酵实验可以看出 , 在实验条件下基质与产物对细胞生长均无抑制作用 ,可采用 Monod 公式处理。即
dx
dt
=μ·x and 1μ=
k sμmax·
1
s
+ 1μmax 　(1)式中:μmax:最大比生长速率 , h -1;S:葡萄糖浓度 , g/L;Ks :饱和常数 , g L。根据测定结果可得出 1 μ与 1/S 的关系(图
2),线形回归处理数据 , 得到回归方程 , 在实验条件下 , μmax =
0.32 , K s=0.86 , 相关系数(r2)为 0.99 , 从而细胞增长速率与底物浓度的关系可表示为:
dx
dt
=0.32· s
0.86+s·x　(2)
图 2　分批培养中 1/ s和 1/μ的关系
2.3　菌体生长与 P(3HB)合成从分批发酵实验可以看出中华根瘤菌 M6-3 菌株并非在某些营养成分如氮 、磷等限制时才开始合成多聚羟基丁酸产物。其产物的合成始终与细胞生长过程相偶联 , 但在细胞生长的减速期与稳定期出现更大的产物积累 , 因此可以下式描述多聚羟基丁酸合成速率与细胞生长速率之间的关系:
dp
dt
=αdx
dt
+βx or qp=αμ+β　(3)
式中 dp dt单位体积培养液中 P(3HB)的合成速率 , g L·
h;qp P(3HB)对细胞的比合成速率 , g g·h;α与 β 为常数。通过测定菌体生长处于稳态时 ,不同μ值对应的细胞浓度和多聚羟基丁酸浓度变化情况,可以得出qp 与μ的关系(图 3)。线形回归处理数据 , 得出在实验条件下α与 β 分别为-
0.2192和 0.0762 ,相关系数(r2)为 0.98。因此中华根瘤菌 M6-3 合成 P(3HB)的速率可以表达为:
dp
dt
=0.0762 x-0.2192 dx
dt
　(4)
2.4　限制性基质代谢流向分析
图 3　分批培养中 qp 和μ的关系
在中华根瘤菌 M6-3合成多聚羟基丁酸的过程中限制性基质葡萄糖不仅是碳源 , 同时也是能源物质 , 消耗的葡萄糖不仅用于细胞生长 、产物合成 , 同时用于维持细胞的正常代谢。在发酵生产过程中控制葡萄糖的代谢方向对提高多聚羟基丁
酸的产率十分重要 , 利用以下公式可以表示细胞生长过程中的限制性基质去向情况:
-ds
dt
=μx
yG
+mx+ 1
yp
or　 1
yx s
= 1
yG
+mμ+qpy p 　(5)式中 yx s细胞对于所耗总糖的得率系数(g 干细胞 g 葡萄糖);yG 细胞对于用于生长所耗糖的得率系数(g干细胞 g 葡萄糖);m 维持生命的耗糖系数(g葡萄糖 h·g细胞);yp 产物对于用于产物合成所耗糖的得率系数(gP(3HB) g 葡萄糖)。根据表 1 的实验数据 , 以 1 yx s作为因变量 , 1 μ和 qp 作为自变量 ,用统计软件 SPSS 进行多元线性回归 , 可得出 yG =
1.41 ,m=0.034 , y p=0.133 , F=36.77。即
-ds
dt
=μx
yG
+mx+ 1
yp
·dp
dt
=0.711μx+0.034x+7.54 dp
dt
　
(6)因此可利用该公式预测实验菌株合成多聚羟基丁酸过程中葡萄糖的代谢方向 , 在中华根瘤菌M6-3 的生长过程中 , 用于生长的葡萄糖每消耗 1g 能生长 1.41g 细胞;每克细胞 、每小时维持生命需消耗 0.034g 葡萄糖;用于产物合成的葡萄糖每消耗 1g 能合成 0.133g多聚羟基丁酸。
3　结论
3.1　中华根瘤菌合成 P(3HB)的发酵类型属于生长部分关联
型 , 不同于已报道的真养产碱菌发酵类型[2] 。
3.2　细胞生长速率与限制性基质葡萄糖之间的关系符合
Monod方程式 。在实验条件下 ,αmax =0.32 , Ks=0.86。
3.3　合成 PHB的速率公式为:
dp
dt
=0.0762x-0.2192 dx
dt其动力学参数α与 β 分别为-0.2192 和 0.0762。
3.4　在发酵过程中限制性基质葡萄糖的代谢流向参数为 yG为 1.41g 干细胞 g 葡萄糖 ,m 为 0.034g 葡萄糖 h·g细胞 , yp 为
0.133g P(3HB) g葡萄糖。根据作者对中华根瘤菌 M6-3 发酵动力学研究的结果 ,可以依照生产厂家的条件设计最佳的 P(3HB)生产工艺 , 以降低生产成本 , 获得最大的经济效益。参考文献:[ 1]Madison L L , Huisman G W.Metabolic engineering of poly(3-hydroxyal-
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蜀葵天然色素及其稳定性研究彭子模1 ,孙健1 ,滕云1 ,高雁1 ,彭宇2(1.新疆师范大学生命与环境科学学院 , 新疆 乌鲁木齐 830054;2.重庆后勤工程学院应用化学系 ,重庆 400061)摘要:以新疆地产蜀葵(Althaea rosea L.Cavan.)花为实验材料 , 用50%乙醇+0.5%盐酸为浸提剂 ,物料配比 1∶10 ,提取出蜀葵花紫红色素。并从光 、温度 、pH 值 、氧化剂 、还原剂 、蔗糖 、苯甲酸钠和不同金属离子对色素稳定性的影响进行了初步研究。结果表明:该色素在 pH2 时耐光性较好;温度在 65℃以下和 pH 值4 以下时色素稳定性较好;色素耐氧化性和耐还原性较差;蔗糖和苯
甲酸钠对色素稳定性无不良影响;金属离子 Cu2+ 、Fe3+ 、Sn2+和 Pb2+对该色素稳定性有不良影响 , Zn2+对色素的稳定性只有轻微影响 ,而 Al3+ 、Na+、Mg2+ 、K+、Fe2+和 Ca2+对色素的稳定性则皆无不良影响。
关键词:蜀葵花天然色素;理化性质;稳定性;提取工艺;鉴别中图分类号:Q946·81　　文献标识码:A　　文章编号:1004-311X(2003)01-0013-03
第 13卷第 1 期:13
2003 年 2 月 　　　　　　　　　　　　　　　　
生　物　技　术
BIOTECHNOLOGY
　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol.13 , No.1:13
Feb.2003
Research on natural pigments of Althaea rosea(L.)Cavan and its stability
PENG Zi-mo ,SUN Jian ,TENG Yun ,GAO Yan(1.Life and Envi ronment Science Institute , Xinjang Normal University Urumuqi , 830054 China;
2.Department of Applying Chimistry ,Chongping Logistical Engineering College , Chongping , 400016 China)
Abstract:Petals of Althaea rosea(L.)Cavan are used as experimental to extract the purple-red pigments , using 50% ethyl alcohol +0.5% hy-
olrogen chloride as extractant.The mass of extractant is ten times than the mass of petals.The preliminary study also includes the effects of light ,
temperature pH value , oxidizing agent , reluctant , sucrose , preservative and metal ions on the stability of the pigment.It proved that the pigment is
strong resistance against light under the acidic condition of pH 2.The stability of pigment if better under the conditions which temperature is below
65℃ and pH value is below 4.It is poor in resistance against oxidizer and reluctant.It is also found that sucrose and preservative do not exert neg-
ative effects on the stability of the pigment.But Cu2+ , Fe3+ , Sn2+ and Pb2+ have bad effects on the stability.And Zn2+ has weak effects.Other
metal ions , such as Al3+ , Na+ ,Mg2+ , K+ , Fe2+ and Ca2 , have no negative effects on the stability of pigment.
Key words:natural pigments of Althaea rosea L.Cavan;physical and chemical properties stability
收稿日期:2002-09-09;修回日期:2002-12-24作者简介:彭子模(1939-),男 ,教授 ,硕士生导师 ,从事植物次级代谢产物植物色素 、激素的开发研究 ,出版著作 4部 ,发表论文 80余篇。
　　食用色素是食品添加剂的重要组成部分 , 广泛应用于医药卫生 、日用化工产品 、化妆品等的着色[ 1-3] 。有的天然色素
还保留了植物体内丰富的多种天然物质 , 如:维生素 、氨基酸 、核苷酸 、小分子活性肽 、芳香物质及某些必需元素等。蜀葵(Althaea rosea L.Cavan)为锦葵科蜀葵属植物 , 世界各地均有栽培 ,花朵形较大 , 花色鲜艳悦目 ,花期较长 , 其色素主要成份为飞燕草素-3-葡萄糖(Dephinidn-3-glucose)[ 4] , 具有清热解毒 、利尿通便 、理心气不足 、治带下 、肠炎 、痢疾 、尿路
感染 、肿瘤水和血润躁等多种药效 , 因此广泛应用于临床[ 5] 。
其花瓣还可直接食用 ,味鲜美[ 5] 。表明无毒 , 可以省去做大量毒理学试验。它很可能是一种很有开发利用前景的天然食药兼用的“功能性色素”资源 ,所以 , 作者进行了初步研究。
1　材料与方法
1.1　实验材料:锦葵科蜀葵属蜀葵(Althaea rosea L.Cavan.)花序。采自新疆师范大学校园内 ,在花序最艳时采摘 , 置于室温(25℃)下自然阴干。所用试剂均为分析纯。
1.2　实验方法
1.2.1　提取工艺流程:蜀葵(干花)※除杂※清洗※粉碎※以
0.5%HCl和 50% C2H5OH 混合液作为浸提剂浸提 3 次(物料配比为1∶10 , 浸提时间为 8h;浸提温度为60℃)※滤渣弃去 ,滤液合并※再除杂质※减压浓缩 , 回收 C2H5OH※蜀葵花色素浓缩液(紫红色 , 有清淡芳香味)。
1.2.2　提取方法:采用正交法设计实验组合 , 按正交表 L16(45)对提取温度 、提取时间 、物料配比等三个因子 , 每个因子四个水平进行实验[ 6] 。最后确定提取温度以 60℃、提取时间以
8h 、物料配比以蜀葵干花序与 0.5%HCl和 50% C2H5OH 1∶10为最佳提取条件 ,获得色素提取液。
1.2.3　色素的鉴定
1.2.3.1　色素的溶解性试验:将色素提取液分别加入一定量的水 、0.5% HCl、50%乙醇 、50%甲醇和苯 、石油醚 、乙醚 、四氯化碳中 ,观察其溶解状况。
1.2.3.2　色素的光谱分析:用 1cm 比色皿在可见光谱范围内测定其吸光度 ,判定其在可见光处最大吸光度 。
1.3　色素的稳定性试验
1.3.1　光对色素稳定性的影响:取等量的色素稀释液置于 6个 10ml无色容量瓶中 ,用 pH 值分别为 2、3、4 、6、8 等 5 种缓冲溶液及蒸馏水分别定容至刻度 , 置于室内自然光下照射一定时间 ,定时取样做光谱扫描 , 记录其最大波长处的吸光度。
1.3.2　温度对色素稳定性的影响:取色素稀释液分别置于室温为 25℃、45℃、65℃和 85℃下恒温 4h , 每隔 1h 取样 1 次 , 冷却至室温 ,测定其在最大吸收峰处的波长。
1.3.3　pH 值对色素稳定性的影响:用配好的 pH 分别为 2 、3 、
4 、6、8 的缓冲液作为稀释液配制相同浓度的色素液 ,然后测定其吸光度。
1.3.4　氧化剂对色素稳定性的影响:以 H2O2 作为氧化剂 , 配制不同浓度的等量 H2O2 色素水溶液 , 室温下放置 1h , 在最大吸收波长处测定其吸光度。
1.3.5　还原剂对色素稳定性的影响:以 Na2SO3 作为还原剂 ,配制不同浓度的等量 Na2SO3 色素水溶液 , 室温下放置 1h , 在最大波长处测定其吸光度。
1.3.6　蔗糖对色素稳定性的影响:分别配制不同浓度的等量蔗糖色素水溶液 ,在最大波长处测其吸光度。
1.3.7　防腐剂对色素稳定性的影响:以苯甲酸钠作为防腐剂 ,配制含量分别为 1×10 -3 、2×10-3 、3×10-3 、4×10-3mol L的色素液 ,在室温下放 4h ,每 2h 取样 1 次进行光程扫描 ,记录其最大吸光度值。
1.3.8　金属离子对色素稳定性的影响:用三氯化铁(FeCl3·
6H2O)、硫酸锌(ZnSO4·7H2O)、硫酸镁(MgSO4·7H2O)、氯化钾
(KCl)、氯化钠(NaCl)、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)、硫酸铜(CuSO4·
5H2O)、氯化钙(CaCl2)、醋酸铅[ Pb(CH3COO)2·3H2O] 、二氯化锡(SnCl2·2H2O)、三氯化铝(AlCl3·6H2O)分别配制成不同浓度的金属离子的蜀葵色素供试液 , 测定其最大吸光值 , 观察各金属离子对色素的影响情况。
2　结果与分析
2.1　色素的鉴定
2.1.1　色素的溶解性试验:其结果如表 1 所示。表 1　蜀葵色素在不同溶剂中的溶解性
溶剂 溶解性 溶剂 溶解性
水 溶 C6H6 不溶
HCl(0.5%) 溶 石油醚 不溶
C2H4OH(50%) 溶 C2H5OC2H5 不溶
CH3OH(50%) 溶 CCl4 不溶　　从表 1 可见 , 蜀葵色素易溶于水 、HCl、C2H5OH 、CH3OH 等极性较强的溶剂 , 而不溶于 C6H6 、石油醚 、C2H5OC2H5 、CCl4 等非极性溶剂 , 这种性质与花青素类色素的溶解性极相似[ 7] 。可以初步推测可能该色素属花青素类色素 。
图 1　蜀葵色素的吸收光谱　(溶剂:HCl C2H5OH)
2.1.2　色素的吸收光谱:蜀葵色素的吸收光谱测得结果如图
1所示。从图 1 可见 , 该色素在 280nm 处有一吸收高峰 , 在
533nm 处有一最大吸收高峰。表明该色素与花青素苷类色素
的吸收光谱相似[8] 。由此可以进一步推测该色素很可能是花青素苷类色素。
2.2　色素的稳定性试验
2.2.1　光对色素稳定性的影响:其结果如表 2 所示。表 2　光对蜀葵色素稳定性的影响
时间(d) OD
pH值 2 3 4 6 8 对照组
0 0.637 0.586 0.531 0.318 0.312 0.512
8 0.615 0.528 0.471 0.309 0.261 0.401
14 0.592 0.496 0.449 0.296 0.220 0.302
21 0.586 0.480 0.434 0.272 0.212 0.241
30 0.568 0.469 0.302 0.259 0.201 0.184
　　从表 2 可见 ,自然光照射对蜀葵色素的影响较大 , 只有在强酸性条件下 , 色变速度才比较缓慢 , 而在弱酸性到碱性情况下 , 经 30d照射后 ,色素颜色几乎完全褪去。因此 , 最好在酸性条件和避光下保存与使用。
2.2.2　温度对色素稳定性的影响:结果如表 3 所示。表 3　温度对蜀葵色素稳定性(吸光度)
吸光度(A) 25℃ 45℃ 65℃ 85℃
0h 0.636 0.634 0.632 0.628
1h 0.635 0.633 0.630 0.572
2h 0.634 0.632 0.629 0.528
14　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　生　物　技　术　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 13 卷第 1期
吸光度(A) 25℃ 45℃ 65℃ 85℃
3h 0.633 0.631 0.627 0.483
4h 0.631 0.630 0.625 0.401
　　从表 3可见 , 蜀葵色素随着温度和加热时间的延长 , 吸光度值有所降低的趋势 , 但在 65℃温度以下 , 吸光度变化极小 ,只有在超过 85℃以上较高温度时变化才较大。表明该色素可以控制在 65℃以下温度内使用。
2.2.3　pH值对色素稳定性的影响:结果如表 4 所示。表 4　pH 值对蜀葵色素稳定性的影响
pH 值 对照 2 3 4 6 8
吸光度(A) 0.338 0.412 0.362 0.318 0.246 0.201
颜色 红色 紫红色紫红色 红色 淡红色淡蓝色
　　从表 4可见 , 蜀葵色素在 pH 值为 3 时呈紫红色 , 在 pH 值为4 时则呈红色。其稳定性随 pH 值的降低而增加。因此 , 该色素可作为高级酸性食品的着色剂使用 ,可广泛应用于果冻 、果酱和果汁饮料等的着色。
2.2.4　氧化剂对色素稳定性的影响:结果如表 5所示。表 5　氧化剂对蜀葵色素稳定性的影响
H2O 2(%) 0 0.5 1.0 1.5 2.0
吸光度(A) 1h 0.630 0.282 0.092 0.014 0.010
　　从表 5可见 , 蜀葵色素的耐氧化性较差 ,在各种浓度 H2O2的作用下 ,其吸光度值变化较大。因此 ,在使用与保存该色素时 ,应避免 H2O2 等氧化剂的混入 。
2.2.5　还原剂对色素稳定性的影响:结果如表 6所示。表 6　Na2SO3 对蜀葵色素稳定性的影响
Na2SO3(mol l) 0 6.25×10-3 12.5×10-3 25.0×10-3 50.0×10-3
吸光度(A) 1h 0.636 0.525 0.400 0.100 0.078　　从表 6 可见 , 还原剂 Na2SO3 对蜀葵色素的稳定性影响很大。当Na2 SO3 浓度增大时 ,吸光度急剧下降 , 色素液颜色变化显著 ,由紫红色变为淡红色至近于无色 , 表明该色素对还原剂非常敏感 ,因此在使用与保存该色素时应避免混入还原剂。
2.2.6　蔗糖对色素稳定性的影响:结果如表 7所示。表 7　蔗糖对蜀葵色素稳定性的影响
蔗糖浓度(%) 0 1.0 3.0 5.0 7.0 9.0
吸光度(A)
2h 0.636 0.635 0.632 0.631 0.630 0.629
4h 0.633 0.633 0.632 0.630 0.629 0.624
6h 0.631 0.631 0.630 0.629 0.625 0.618
　　从表 7可见 , 当蔗糖浓度在 1%-9%时 , 蜀葵色素液的色泽无变化 ,吸光度也只呈现缓慢下降的变化 , 波动极微。表明蔗糖对该色素的稳定性无不良影响 ,可以在色素制品中使用。
2.2.7　防腐剂对色素稳定性的影响:结果如表 8所示。表 8　防腐剂苯甲酸钠对蜀葵色素稳定性的影响
苯甲酸钠(mol l) 0 1×10-3 2×10-3 3×10-3 4×10-3
吸光度(A) 2h 0.636 0.633 0.632 0.630 0.627
4h 0.636 0.632 0.630 0.628 0.621　　从表 8可见 , 苯甲酸钠对蜀葵色素色泽的稳定性无不良影响 ,吸光度值变化很微。表明苯甲酸钠可以用于该色素的防腐。
2.2.8　不同金属离子对色素稳定性的影响:结果如表 9所示 。
从表 9可见 , 除 Cu2+ 、Fe3+ 、Sn2+和 Pb2+四种金属离子对吸光度有较大影响 ,且发生了色变 ,应避免该色素与这些离子的试剂共用 ,其余多数供试离子对吸光度值影响均极其微弱 ,
其颜色也基本未发生变化。因此 , 除去 Cu2+、Fe3+、Sn2+和
Pb2+四种离子以外的供试离子 , 对该色素不存在不良影响。
表 9　不同金属离子对蜀葵色素稳定性的影响
金属离子 离子浓度(mol L) 吸光度(A) 颜色
空白 0 0.635 紫红色
Al3+ 50.0×10-3 0.632 紫红色
Na+ 50.0×10-3 0.631 紫红色
Mg2+ 50.0×10-3 0.633 紫红色
K + 50.0×10-3 0.629 紫红色
Cu2+ 50.0×10-3 0.409 黄褐色
Zn2+ 50.0×10-3 0.583 淡红色
Pb2+ 50.0×10-3 0.406 黄褐色
Fe3+ 50.0×10-3 0.401 黄褐色
Fe2+ 50.0×10-3 0.623 紫红色
Ca2+ 50.0×10-3 0.625 紫红色
Sn2+ 50.0×10-3 0.396 褐色
3　结论
3.1　蜀葵花紫红色素最佳提取条件为:0.5% HCl+50%
C2H5OH 与干花物料比为 10∶1;提取时间为 8h;提取温度为
60℃。
3.2　蜀葵花紫红色素属于花色素苷类色素 , 易溶于水 、盐酸 、乙醇和甲醇等极性较强的溶剂 , 而不溶于苯 、石油醚 、乙醚和四氯化碳等非极性溶剂;其盐酸-乙醇色素提取液在可见光内最大吸收峰在 533nm 处。
3.3　葵花紫红色素在 pH 值为2 时 ,自然光对其稳定性几乎无影响。
3.4　温度在 65℃以下 , pH 在 4 以下时 , 对蜀葵花紫红色素的稳定性无不良影响 , 很适合在酸性食品中使用。
3.5　该色素对氧化剂和还原剂皆较敏感 , 在使用与保存时应尽量避免与之接触。
3.6　蔗糖和防腐剂苯甲酸钠对该色素的稳定性无不良影响 ,可以作为添加剂与该色素共用。
3.7　金属离子 Cu2+ 、Fe3+ 、Sn2+和 Pb2+对该色素稳定性有不
良影响 , 应避免共用;Zn2+只有轻微影响;Al3+、Na+、Mg2+、
K+、Fe2+和 Ca2+则皆无不良影响 ,可作添加剂共用。
3.8　该色素有清热解毒 、利尿通便 、理心气不足 、治带下 、肠炎 、痢疾 、尿路感染 、肿瘤水和血润燥等多种药效 , 并应用于临床 ,花瓣可以直接鲜食等 ,可省去进一步的毒理学试验 , 同时 ,很可能开发出一种新的 、优良的食药兼用的功能性食用天然色素。参考文献:[ 1]彭子模 ,吕海英 ,刘玉祥 ,等.榆叶梅天然色素及其稳定性研究[ J] .生物技术 , 2001 , 11(3):26-29.[ 2]彭子模 ,惠寿年 ,李进 , 等.玫瑰花红色素及其稳定性研究[ J] .西北植物学报 , 1999 , 19(2):349-353.[ 3]吴春 ,孔琪.赤豆皮色素的提取及其稳定性[ J] .食品工业 , 2000(6):34-35.[ 4] 王宗训.中国资源植物利用手册[ M] .北京:中国科技出版社 ,
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猪链球菌 RAPD分析反应条件优化的研究倪宏波 ,王兴龙(解放军军需大学动物科学系 ,吉林 长春 130062)摘要:为了建立猪链球菌的基因分型方法 ,对影响猪链球菌 RAPD分析的两个主要因素进行了反应条件的优化 , 结果在 25μl
反应体系中 DNA 模板的添加量为 50ng ,Mg2+的添加量为 2.5mmol L时 , 可获得理想的扩增结果 ,并筛选出了多态性好且稳定的随机引物 ,为猪链球菌的基因分型方法的建立奠定了基础。关键词:RAPD;反应条件;优化;猪链球菌中图分类号:S852.611　　文献标识码:A　　文章编号:1004-311X(2003)01-0015-03
收稿日期:2002-09-02;修回日期:2002-12-21作者简介:倪宏波(1972-),男 ,满族 ,黑龙江北安人 ,博士生 ,讲师 ,从事动物微生物学与免疫学的教研工作。
　　猪链球菌病是由链球菌感染所引起的猪的一类疾病的总称。随着我国集约化养猪业的发展 , 猪链球菌病已成为危害养猪业的一种重要疾病。该病一年四季均可发生 , 侵害各种
年龄的猪 ,还常常与其它疾病发生合并感染[ 1-4] ,发病率和死亡率较高 , 因此 , 快速而准确地对该菌进行分型 , 不仅为该病
的诊断 、治疗和预防提供依据 ,而且在对该病的流行病学调查方面具有十分重要的意义。猪链球菌的传统分型通常是以生物学和抗原特性为基础 , 在许多方面不能令人满意。近年来 ,国内外开始应用随机扩增多态性 DNA(Random amplified poly-
morphic DNA , RAPD)等分子生物学技术对细菌进行分型鉴定和分子流行病学调查 , 并取得较理想的效果 , 具有较强的应用价值。本实验对猪链球菌 RAPD分型的反应条件进行了优化 ,旨在建立一种简便实用的分子生物学分型方法。
1　材料与方法
第 13卷第 1 期:15
2003 年 2 月 　　　　　　　　　　　　　　　　
生　物　技　术
BIOTECHNOLOGY
　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol.13 , No.1:15
Feb.2003