全 文 ：2012 年 月
第 卷 第 期
四川大学学报 自然科学版
一
黄蜀葵茎段植株再生体系的建立和
花各部愈伤组织总黄酮含量的测定比较
莫明雅 , 王晓萌 , 白 洁 , 陈 放
四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室 , 成都
摘 要 以黄蜀葵种子获得无菌苗的茎段为外植体 ,研究了不同浓度激素配比对愈伤组织诱
导及分化再生植株的影响 结果表明 以 酒精 。 升汞 灭菌黄蜀葵种子 ,可
获得较高发 芽率的无菌苗 愈伤组织最适诱导培养基为改良
,经愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为 一 最佳
生根培养基为 且移栽后成活率可达 用紫外分光光度法测定
花和各部愈伤组织总黄酮的含量 ,对比发现 花中总黄酮的含量高于各部愈伤组织 ,愈伤组织
中子房愈伤组织的总黄酮含量高于其他部位
关键词 黄蜀葵 茎段 愈伤组织 再生体系 紫外分光光度法 总黄酮含量测定
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 一 一 一
一 , 一 亡 , ,
一 一 , ,
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。 。
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,
收稿 日期 一 一
基金项目 十一五国家科技支撑计划项 目
作者简介 莫明雅 一 ,女 ,河南省邓州市 ,硕士 ,研究方向为资源植物学
通讯作者 白洁 一 、
四川大学学报 自然科学版〕 第 卷
引 言
黄蜀葵 系锦葵科
。 。秋葵属 的一年生至多
年生草本植物 ,花大 ,淡黄色 ,内面基部紫色 ,好似
豹子眼睛 ,有较高的观赏价值 〕`黄蜀葵全草人药 ,
具有清热凉血解毒功效 果实种子也用来治疗消化
不良 、不思饮食 ,跌打损伤等疾病 〔〕现代药理学研
究表明 ,黄蜀葵花中总黄酮具有明显的抑菌 、抗炎
和治疗心血管疾病等作用 一习
黄蜀葵是一种优良的观赏草花 ,但其花色单
一 ,应用转基因技术可改良花品质 。成功的基因转
化首先依赖于高效 、稳定且再生能力强的植物受体
系统的建立 所以研究并获得黄蜀葵外植体产生愈
伤组织的最佳培养基及由愈伤组织分化不定芽及
生根的最佳培养基 ,建立稳定的幼苗再生体系 ,可
为其遗传转化及培育新品种奠定基础 目前 ,有关
黄蜀葵组织培养的研究仅见于用子叶和下胚轴为
外植体的组培快繁体系困
黄蜀葵花 月陆续开放 ,不便于花朵集中
采收 ,从现有的黄蜀葵花中提取黄酮还远不能满足
生产需求 应用植物细胞培养技术大量生产活性成
分可以解决资源短缺等问题 ,因此本实验还比较了
花各部位愈伤组织总黄酮的含量 ,筛选总黄酮含量
高的花部 ,为今后利用植物细胞培养技术规模化和
商品化生产黄蜀葵总黄酮提供参考 目前 ,有关黄
蜀葵总黄酮含量的测定已有报道 幻 ,但黄蜀葵愈
伤组织中总黄酮含量的测定未见报道
材料与方法
材 料
组培研究材料取 自黄蜀葵种子萌发的无菌苗
茎段为外植体 黄酮含量测定实验材料取自干燥花
蕾及花各部诱导的愈伤组织
一 紫外一可见分光光度计 北京普析通
用仪器厂 , 一 型数控超声波清洗器 昆山
合创超声仪器公司 , 电子分析天平 上海
天平厂 ,对照品芦丁购 自中国药 品生物制品鉴定
所 、 。、 、无水 乙醇均为分析
纯
方 法
黄蜀葵植株再生体系的建立 在超净工作
台上消毒 ,将 粒黄蜀葵种子先用 酒精处
理 、后 ,分成 组分别用 的升汞消毒 、
、 、 ,无菌水冲洗 次 ,接种于 培养
基 。 蔗糖 琼脂中 , 暗
培养 左右 ,待种子萌动后进行光照培养 ,培养
温度为 上 ℃,光照时问为 ,光照强度
为 实验设置 次重复 后调
查污染率和出芽率 ,筛选最佳种子灭菌时间 ,并以
处理种子获得无菌苗 ,当无菌苗株高达 左右
时 ,剪取 。 作为外植体
将茎段外植体接种于以改良 为培养基 蔗
糖 ,琼脂粉 , 附加不同浓度
的 和 的愈伤诱导培养基 中黑暗培养 表
,温度 士 ℃ 每次实验重复 次 ,每次供试
茎段不低于 个 后调查成愈数 诱导率
一 成愈数 外植体数 ,筛选茎段最佳诱导愈
伤组织培养基
将已诱导出的愈伤组织在愈伤组织培养基中
继代一次后 ,选取生长旺盛 、质地致密 、表面有细颗
粒状结构 、黄绿色的愈伤组织转人以 为基本培
养基附加不同浓度的 一 、 和 的分化
培养基中培养 表 , 培养条件 温度 为 士
,光照强度为 ,光照时 问
实验设置 次重复 ,每次供试愈伤组织块不低于
块 后调查生长及增殖情况 ,筛选最佳不定
芽分化培基 ,
选择 一 的无根苗接种于
和 的生根培养
基中 , 实验设置 次重复 ,每次供试无根苗不低于
。个 后根据其生根和生长情况筛选最佳生
根培养基 当根长至 半木质化时进行练苗
移植 首先去掉封 口膜加人灭菌水封住培养基表
面 ,炼苗 一 后 ,取出生根苗 ,洗净根上附着的
培养基 ,移栽至蛙石与珍珠岩 , 混合的已浇透
水的基质中 ,基质中加人稀释 倍的 培养
基 植株套袋 , 后组培苗扎根后 ,可取下套袋 ,放
在温室中继续培养 , 周后调查移栽成活率 培养
条件同上
黄蜀葵干花与花各部分愈伤组织样品制备
采收 长的黄蜀葵花蕾 ,低温处理 ,自来
水下冲洗 ,再在超净工作台上用 酒精处理
,无菌水冲洗两次 , 升汞处理 ,无菌
水冲洗 次后 ,分离并分别切取黄蜀葵花瓣 、花药 、
子房和柱头作为外植体接种到愈伤诱导培养基 培
养基组成 为 一 。
蔗糖 十 琼脂 培养温度为
9 2 2 四川大学学报 自然科学版 第 卷
表 不同激素配比对茎段愈伤组织诱导的影响
出愈率 愈伤组织形态特征 生长状况
黄白色 ,不定根少 十
黄绿色 ,不定根较多
乳白色 ,不定根多
十
黄绿色 ,细胞紧实 ,无不定根
黄绿色 ,不定根少
黄白色 ,不定根少
十
十
绿色 ,无不定根 十
绿色 ,表面褐化 ,不定根少
黄绿色 , 表面褐化不定根少
十
十 十
匕,﹃口内汀盛白︺往尸︺`任口泣︸
注 十十十十表示愈伤组织长势良好 , 表示较好 , 表示长势一般 , 表示长势较差
表 不同激素配比对芽分化的影响
一 诱导发芽率 增殖倍数 小苗发育情况
只`︺,曰丹,﹄,叮了`认︺乙
。
苗纤细 ,叶卷曲
苗较粗壮 , 部分玻璃化
苗粗壮 ,叶小而薄
苗粗壮 ,叶卷曲 ,丛芽半玻璃化
苗纤细 ,叶淡绿
苗较粗壮 ,叶黄绿 ,部分玻璃化
苗粗壮 ,叶正常
平 ,但小苗呈现出不良状态 ,将 浓度降低到
时 ,芽诱导率最高 ,为 ,小苗发
育正常 , 因此认为 一
是芽分化最佳培养基 图 一
生根培养与炼苗移栽 无根苗接种于生根
培养基 后不定根开始萌动 当 浓度为
时 ,根多且粗壮 ,白色 ,生根率为 图
而当 浓度为 时 ,根较长且纤
细 ,因此确定适宜黄蜀葵幼苗生根的培养基为
十 生根苗经炼苗移栽后成活
率为
图 愈 伤组织及愈伤组织再 生苗
第 期 莫明稚等 黄蜀葵茎段植株再生体系的建立和花各部愈伤组织总黄酮含圣的测定比较
黄蜀葵干花与花各部分愈伤组织总黄酮含量
的测定
黄蜀葵干花和花各部愈伤组织总黄酮含量测
定结果显示 ,在愈伤组织中 ,子房来源的愈伤组织
总黄酮含量最高 ,为 ,其他三个部位总黄酮
含量较低 表
表 黄蜀葵花及各部分愈伤组织总黄酮含且
￡
花各部愈伤组织总黄酮含量测定结果显示花
中子房来源的愈伤组织总黄酮含量较高 ,为今后利
用组织培养技术生产黄蜀葵总黄酮选择外植体提
供了参考依据 和干花中总黄酮含量相比 , 愈伤组
织的总黄酮含量较低 ,这可能是因为离体培养条件
下的环境因素和代谢途径等有所不同 另外 ,不同
花部适应的最佳诱导愈伤组织培养基也有待进一
步筛选和优化
参考文献
工一飞刁﹃月」乙八止`亡而尸
愈伤组织各部位 总黄酮含量 干花黄酮含量
柱头
花瓣
子房
花药
讨 论
目前锦葵科的组织培养研究中多采用子叶和
下胚轴为外植体 ,朱华云 以黄蜀葵子叶为外植体
诱导的愈伤组织中没有不定芽分化 ,而以下胚轴为
外植体获得再生苗 ,不定芽平均诱导率为 本
实验以黄蜀葵无菌苗茎段为外植体 ,通过筛选最佳
愈伤组织诱导培养基和不定芽分化培养基 ,不定芽
诱导率达到 获得了以黄蜀葵无菌苗茎段
为外植体的植株再生体系 ,扩大了该科植物组培研
究中外植体的选择范围
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居文政 黄蜀葵的本草考证 〔月 时珍国药研究 ,
,
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杨志芳 , 王维娜 , 杨坤 法测定不同产地黄蜀
葵花中金丝桃昔异懈皮昔及懈皮素一 一葡萄搪昔含量
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责任编择 白林含〕