全 文 ：林业科技开发 2015 年第 29 卷第 2 期 127
doi:10． 13360 / j． issn． 1000－8101． 2015． 02． 031 中图分类号:S763． 1
防治榉树枯萎病室内杀菌剂的筛选
刘侃诚1，许伟1，郁世军2，李英2，韩正敏1*
(1．南京林业大学林学院，南京 210037;2．江苏农景生态建设有限公司)
摘 要:榉树枯萎病是近几年在句容茅山地区发生严重的一种新病害，每年榉树的生产都因此病害而损失巨大。
以筛选防治榉树枯萎病的有效药剂为目的，采用菌丝生长速率法及孢子萌发率的测定对比了 7 种杀菌剂针对榉树
枯萎病病原(尖孢镰刀菌)的毒力。结果显示，分别设置的不同浓度的 7 种杀菌剂对榉树枯萎病病原菌的生长均存
在抑制，多菌灵对病原菌丝的生长和孢子的萌发抑制作用最强，致死中浓度 CEC50为 0． 954 7 mg /L，建议在田间试验
和推广应用时应选用多菌灵。
关键词:榉树枯萎病;尖孢镰刀菌;杀菌剂;多菌灵
Screening on effective fungicide for blight disease of Zelkova on culture medium∥LIU Kancheng，XU Wei，
YU Shijun，LI Ying，HAN Zhengmin
Abstract:The blight disease of Zelkova is a new disease which occurred in Maoshan area of Jurong city in recent years． The
outbreak of this disease has led to a huge loss on propagation of Zelkova during these years． In order to screen an effective
fungicide for blight disease of Zelkova，seven fungicides were screened against Fusarium oxysporum (pathogen of Zelkova
blight)with mycelium growing method and spore germination method in lab． The results were reported as follow:inhibition
of mycelia growth of the pathogen by 7 fungicides was assayed on PDA medium． 7 fungicides presented certain inhibition on
the growth of pathogen in the setting of different concentrations． Among the 7 fungicides，carbendazim presented highest
inhibition to the mycelia and spore sprouting of the pathogen with CEC50 0． 954 7 mg /L． Using carbendazim in field trials
and application was suggested．
Key words:blight disease of Zelkova;Fusarium oxysporum;fungicides;carbendazim
First author’s address:College of Forestry，Nanjing Forestry University，Nanjing 210037，China
收稿日期:2014－11－15 修回日期:2014－12－18
基金项目:江苏省农业科技支撑计划项目“榉树用材林优良家系选
育”(BE2013409)。
作者简介:刘侃诚(1987 －) ，男，博士生，研究方向为森林微生物。通
信作者:韩正敏，男，教授。E-mail:zmhan@ njfu． edu． cn
近年来在茅山地区发现有大量榉树枯萎死亡，有
的地区甚至出现成片死亡现象。不仅林间的大树出
现死亡，苗圃内的幼苗也会出现枯萎死亡。该病害的
发生，严重影响了榉树繁育和扩大发展。
由于榉树枯萎病的发生日益严重，对其采取适当
的防治措施已经变得越来越重要。虽然化学防治方
法存在诸多弊病，但在其他防治方法还不成熟的情况
下，化学防治是唯一可选的，能够达到快速抑制病害
流行、及时扑灭病害疫点的目的。本研究在前期病原
分离和鉴定的基础上［1］，针对榉树枯萎病病原菌———
尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)进行室内杀菌剂的
筛选，为林间及苗圃的榉树枯萎病防治提供基础。
1 材料与方法
1． 1 供试菌株
病原菌(Fusarium oxysporum)分离自句容茅山
地区榉树枯萎病典型病株(经单孢分离，纯培养后
进行鉴定，保存于南京林业大学病理实验室)。供
试菌株于 PDA 平板培养基培养(25 ℃，5 d)，待测
试用［2］。
1． 2 供试药剂
试验共选择 7 种杀菌剂，分别为:①世高(苯醚
甲环锉) ，10%水分散粒剂，瑞士先正达作物保护有
限公司生产;②甲基托布津(甲基硫菌灵)，70%可湿
性粉剂，乳山华日化工制品有限公司生产;③多菌灵，
50%可湿性粉剂，江苏省新沂农药有限公司生产;④
百菌清，75%可湿性粉剂，江苏和纯化学有限公司生
产;⑤代森锰锌(代森锌质量分数 80%)，70%可湿性
粉剂，南通市第三化工厂生产;⑥阿米西达(嘧菌酯
1． 096 g /mL)，25%悬浮液，广州市恒欣化工有限公
司生产;⑦福美双(福美甲胂 12． 5%，福美双 25%，福
美锌 12． 5%) ，50%可溶性粉剂，石家庄市绿丰化工
有限公司生产。
1． 3 供试培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):去皮马铃薯
欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗 森林经营与保护
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200 g、葡萄糖 20 g、琼脂 20 g、蒸馏水 1 L。
含药平板培养基:用无菌水将供试农药分别配制
成不同浓度梯度的药液，将药液加入 9 倍体积的灭菌
并降温至 50 ℃的 PDA 培养基中，混合均匀，制成含
药平板。
1． 4 菌丝生长速率测定
将直径 4 mm 的供试菌落菌饼接种于含药平板
中央。每个处理设置 3 个重复。无菌水代替药液制
成的培养基作为空白对照。25 ℃培养 4 d，“十”字交
叉法测量菌落直径，计算不同杀菌剂对病原菌菌丝生
长的抑制率［3］。
1． 5 孢子萌发率测定
接种环刮取供试菌株平板(培养 6 d)表面的孢
子，于 40 mL灭菌水中充分搅动后，纱布过滤，制备成
孢子悬浮液。经血球平板计数器测定和灭菌水调整，
使孢子悬浮液浓度达 6 × 105 个 /mL。分别将 1 mL
孢子悬浮液加入 9 mL浓度为各初筛药剂致死中浓度
(CEC50)的药液中，黑暗条件下培养(25 ℃) ，重复 3次，
并设置空白对照。12 h后取孢子悬浮液于显微镜下观
察孢子萌发情况，计算各处理的孢子萌发抑制率［4－5］。
1． 6 室内生物测定计算方法与数据处理
“十”字交叉法测量菌落直径，计算菌落扩展相
对抑制率并进行差异显著性分析。
菌落扩展相对抑制率计算公式:抑制率 =(对照
菌落生长直径 －处理菌落生长直径)/对照菌落生长
直径 × 100%。
使用最小平方法计算杀菌剂针对病原菌的毒力
回归方程(y = a + bx，x 为浓度对数，y 为抑制菌落生
长百分率的几率值)、相关系数 Ｒ和 CEC50
［4］。
选择初筛药剂的 CEC50测试孢子萌发率，孢子萌
发率 =萌发的孢子 /总孢子数 × 100%;孢子萌发抑制
率 =(对照孢子萌发率 －药剂处理孢子萌发率)/对
照孢子萌发率 × 100%。
2 结果与分析
2． 1 供试杀菌剂的初筛结果
初筛中 7 种供试杀菌剂浓度分别设置为:6，10，
60，300 mg /L，分别制成含药平板培养基，进行菌丝生
长速率的测定，设立空白对照。7 种供试杀菌剂对榉
树枯萎病菌菌丝生长的影响以及显著性分析结果见
表 1。
根据以上初筛结果，选择多菌灵、甲基托布津、阿
米西达、代森锰锌这 4 种杀菌剂来进行下一步的毒力
测定试验。
表 1 7 种供试杀菌剂对榉树枯萎病菌菌丝生长的影响
药剂
浓度 /
(mg·L －1)
4 d后菌落
直径 / cm
抑制率 /
%
最大抑制率 /
%
CK 0 4． 50 0 0
6 0 100． 00
多菌灵
10 0 100． 00
100． 0 aA60 0 100． 00
300 0 100． 00
6 3． 63 19． 30
甲基托布津
10 2． 98 33． 70
100． 0 aA60 1． 67 62． 80
300 0 100． 00
6 2． 03 54． 80
阿米西达
10 1． 98 56． 10
87． 5 bB60 1． 01 77． 50
300 0． 56 87． 50
6 2． 14 52． 40
代森锰锌
10 1． 76 60． 80
83． 1 bB60 1． 32 70． 60
300 0． 76 83． 10
6 4． 46 0． 88
福美双
10 4． 21 6． 40
58． 1 cC60 3． 43 23． 70
300 1． 89 58． 10
6 3． 87 14． 10
世高
10 4． 03 10． 40
43． 5 dC60 3． 67 18． 40
300 2． 54 43． 50
6 3． 76 16． 40
百菌清
10 3． 64 19． 10
27． 1 eD60 3． 34 25． 70
300 3． 28 27． 10
注:不同小写字母表示 0． 05 水平差异显著，不同大写字母表示
0． 01水平差异显著。
2． 2 初筛药剂的毒力比较
2． 2． 1 初筛药剂对病菌菌丝的影响
将 9 个浓度梯度(0． 01，0． 1，0． 5，1． 0，2． 5，5． 0，
10． 0，25． 0，50． 0 mg /L)的多菌灵、甲基托布津、阿米
西达、代森锰锌分别制成含药平板培养基，设立空白
对照，进行菌丝生长速率的测定。
根据所测量的榉树枯萎病菌在 4种杀菌剂各个不
同浓度下的菌落直径，计算出 4 种杀菌剂对菌株菌丝
生长的抑制率(图 1)以及抑制的毒力曲线(图 2)［4－6］。
图 1 4 种药剂对榉树枯萎病菌株菌丝生长的影响
森林经营与保护 欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗
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图 2 杀菌剂对菌丝生长抑制作用的毒力曲线
从图 1 可以看出，4 种初筛药剂对病菌菌丝生长
的抑制作用均随着药剂浓度的增加而增强。多菌灵
在浓度较低时亦表现抑菌效果;甲基托布津在低浓度
时抑菌效果不显著，在较高浓度时具有良好的抑制菌
丝生长的作用;阿米西达与代森锰锌情况类似，抑制
率相似。浓度为 0． 01 ～ 2． 50 mg /L时，在同等浓度下
代森锰锌抑制率基本大于阿米西达。
2． 2． 2 初筛药剂对孢子萌发率的影响
选取多菌灵、甲基托布津、阿米西达、代森锰锌这
4 种杀菌剂的 CEC50浓度进行孢子萌发率测定。12 h
后观察孢子萌发情况，计算各处理的孢子萌发抑制
率，结果见表 2。
表 2 4 种杀菌剂对孢子萌发的影响
药剂
浓度(CEC50)/
(mg·L －1)
孢子萌发率 /
%
孢子萌发抑制率 /
%
多菌灵 0． 954 7 45． 5 51． 2
甲基托布津 27． 099 0 42． 0 53． 1
阿米西达 5． 854 9 59． 0 30． 5
代森锰锌 5． 787 5 34． 5 61． 5
CK 0 89． 5 －
杀菌剂对病原菌孢子萌发的影响的试验结果显
示，4 种药剂不但对菌丝有较高抑制作用，对孢子萌
发也有较好的抑制作用。其中在各自的致死中浓度
下，代森锰锌对病菌孢子萌发的抑制作用最强，其次
是甲基托布津、多菌灵。阿米西达对病菌孢子萌发的
抑制作用最弱。从菌丝生长抑制率、孢子萌发抑制率
再结合使用浓度来综合评定，多菌灵对病菌的抑制作
用最强。
3 结论与讨论
本研究采用 7 种杀菌剂对榉树枯萎病病原菌株
进行了室内生物测定，经初筛选出 4 种高效杀菌剂:
多菌灵、甲基托布津、阿米西达和代森锰锌。对这 4
种杀菌剂又进一步进行毒力比较，分别通过最小平方
法获得各杀菌剂对病原菌的毒力回归方程，进而得出
它们的致死中浓度 CEC50(0． 954 7，27． 099 0，5． 854 9，
5． 787 5 mg /L)。然后分别在各自的 CEC50浓度下测
得对病菌的孢子萌发抑制率(51． 2%，53． 1%，
30． 5%，61． 5%)［6］。试验结果表明:
1)不同杀菌剂对病原菌菌丝的抑制作用强弱不
同，这表明榉树枯萎病病原菌对不同杀菌剂的敏感性
不同［7］。在试验所测浓度范围中，杀菌剂对病原菌
最大抑制率:多菌灵≥甲基托布津 ＞阿米西达 ＞代森
锰锌 ＞福美双 ＞世高 ＞百菌清。
2)在试验所测浓度范围中，7 种杀菌剂对病原菌
菌丝的抑制作用随浓度升高而增强，最高达 100%，
可完全抑制病原菌菌丝生长［8］。
3)初筛选出的 4 种杀菌剂能强烈地抑制菌丝生
长，也能高效地抑制病原菌孢子的萌发［9］。这为榉
树生产上枯萎病的防治提供可靠依据。
4)综合多方面因素比较，多菌灵在 4 种杀菌剂
中抑制效果最佳。多菌灵为内吸性治疗剂，植物吸收
后可长期起作用。但需要轮换杀菌剂使用或混合使
用，否则长期单一使用容易出现抗药性。甲基托布津
也是内吸性杀菌剂，试验显示其杀菌效果也很好，可
以在生产中考虑与多菌灵交替使用。
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(责任编辑 田亚玲)
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