全 文 ：月2 4 日 )进行高接 , 采用一次 高 接 全 树 , 不
留拉水枝 。 妹接后放水 , 即在枝 条 茎部 纵切
三刀 , 深达木质部。 接穗 枝萌 芽开 始生 长后
( 5 月2 9日 ) 调查统 计成 活率 , 分 析试 验结
果。
二 、 试验结果及分析
1
. 大树整形修剪改造结果
从 19 8 8年 6月对单山的试验调查结果可知 ,
盛果期的核桃树 , 合理地修剪整形改造效果非
常显著 , 处理树的座果率 ( :’9 . 8% ) 是对照树
座果性私 ( 4 1 . 8% ) 的 1 9 0 . 8 % 。
2
. 初结果树夏季修剪试验结果
由调查结果可知 , 绞缴 、 绞缴加去雄 , 花
期环 剥 和 对 照的 核 桃 树的 座 果 率分 别 为
4 4
.
0夕石、 5 2 . 1% 、 1 7 . 6% 不东119 . 9% 。 绞缴 、 绞
缘加去雄处理效果好 , 平均座果率分别是对照
的 2 2 1 . 1% 和 26 1 . 8 % 。 其中绞绕加去雄效果更
好 。 因为绞级本身就截断了枝芽贮藏和新叶制
造养分的下运 , 使营养集中于开花座果 , 去雄
后减少树体营养消耗 , 又强化 了这种作用 , 提
高座果率 。 花期环剥效果很差 , 座果率比对照
还低 。
3
. 高接换优试验结果
从调查可知 , 皮下贴接 、 插皮舌接和带木
质 芽 接 的 成 活 率 分 别为 :!2 . 6% 、 67 . 4%和
4。 . 7 % 。 差瘫检验表明 , 它们之间有显著差异 。 说明不同嫁接方法的效果差异大 , 核桃树
对嫁接反应敏感 。 插皮舌接的接穗与砧木的形
成层接触面积大 , 接触紧密 ; 而砧穗皮层与木
质部撑离的空隙小 , 同时操作方便 、 迅速 , 因
而大大减少了伤口氧化面积和时间 , 伤口愈合
快 , 成活率高。 而皮下贴接和插皮舌接的砧穗
形成层接触面积小 , 撑离空 隙 大 , 故成 活率
低。 由此可见 , 对产生愈伤组织困难的核桃树
来说 , 用插皮舌接比其它方法好 , 应在生产中
广泛推广应用 。
不同砧木年龄对嫁接成活的影响差异不显
著 , 小于 10 年生 、 10 一 20 年生和 20 年以上的砧
木嫁接的接穗成活率分别为 45 . 9% 、 37 . 1%和
5 3
.
3%
。 由此说明 , 只要砧穗正常 、 嫁接方法
和时期选择适 当, 30 年以下的低劣单株均可高
接换优 。 当然 , 树龄过大 会出 现嫁 接部 位升
高 , 或接口伤面过大的矛盾 , 从而影响换优效
果 。
三 、 小结及讨论
1
. 盛果期核桃树实行整形修剪改造 , 可
明显提高座果率和产量 。 绞缴也是较好的方法
之一 。 环状剥皮在仁果类果树 中使用效果好 ,
但在核桃树上试验或应用这种方法时应慎重 。
2
. 核桃高接换优用插皮舌接方法较好 ,
可推广应用 。
3
. 接枝茎部纵切三 刀的放水措施作用不
明显 , 而采用横向连三锯效果较好 。 几种嫁接
方法的接穗成活率普遍较低 , 这与嫁接技术不
够熟练有关 。 由此可见 , 嫁接核桃等含单宁物
质多且有伤流影响 、 嫁接不易成活的果树 , 对
嫁接方法和操作技术要求较高 。
(责任编辑 黎拈深 )
束U槐和紫穗槐根瘤菌的分离和鉴定
中国 林业 什学研究院林研所 王 守宗 陈立十 史景照
拍 要
人: 、 碟 邢花科固 氮树种 刹愧和 紫穗化根充中
介 离 浮到 13 林积 瘤菌 , 它们 都具有根瘤菌央型
的 望 态特 征 。 回接鉴定表明 、 6 株菌对其各自
宿主 、 幼根均具有佼 染能 力 , 使 宿主结 瘤。 利
枚根 价 团 找活 力达 1 . l l x l 『 ’ ` 1、 。 i厂克鲜重 · h 夕
试验证实其确 属根瘤 菌。
主题词 固氮树种一根瘤菌一 分离 刺槐 常
德槐
蝶形花科固氮树种通过根瘤菌固定空气中
的氮素来满足其生长和发 育的 需要 已早 为人
知 。 但我国林业科研单位对这个领域的研究还
较为薄弱 。 到 目前为止 , 还没有研究出被全国
DOI : 10. 13456 /j . cnki . l ykt . 1989. 07. 008
公认和被生产单位使用 的高 效固 氮菌 株 。 为
此 , 19 8 4年我们对刺槐和紫穗槐的根瘤菌进行
了分离和鉴定 。
一 、 材料和方法
(一 ) 材料
试验所用样品 - -一刺槐和紫穗槐根瘤 , 于
19 8 4年 5 月采 自中国林业科学研 究 院 林业 研
究所苗圃 。
(二 ) 菌种分离
取新鲜根瘤 , , 用流动自来水充分清洗 , 以
9 5 %的乙醇表面消毒 20 一 30 秒钟 , 迅速用无菌
水冲洗 4 次 , 再以 0 . 01 %的酸性升汞溶液表面
灭菌 5一 7 分钟 , 用无菌水冲洗 6 次以上 , 除
去消毒剂 。 将根瘤置于灭过菌的研钵中研磨 ,
加少量无菌水 研匀 , 通过玻璃棉滤去根瘤律
片。 取稀释液用划线法和连续稀释法接种于琼
脂斜面或平板上 , 在 28 一 3 o o c 下培养 。 经纯化
培养 , 选生长一致 , 大小一 致的 菌 落进 行分
离 , 以 _ L均以无菌操作并在超净工作室进行 。
培养基选用蔗糖一酵 母膏无氮培养基 , 其
成分 为 : 蔗 糖 1 0 9、 K H Z p 0 0 0 . s g 、 M g S O ; ·
7H
: 0 0
.
2 9
、
r万a e l o . l g 、 C a S O J o . Z g 、 酵母膏
1 9
、
1% 柠嵘酸铁溶液 1毫升 、 1% 硼酸溶液 1
毫 玲、 工% 硫酸锰溶液 1 毫升 、 琼脂 15 一 20 喻 、
蒸馏水 I c o o毫升 。
( 下 ) 形态特征和染色
形态特征观察选用蔗糖一一酵母膏无氮培
养基 。 按常规法迸行革兰氏染色 。
(四 ) 生理鉴定
1
. 酵母膏 、 甘露醇 、 琼脂培养基 。
2
. 刚果红 、 酵母膏 、 甘露醉 、 琼脂培养基 。
3
. 蛋 白陈 、 葡萄糖 、 琼脂培养基 。
4
. 石蕊 、 牛乳培养基 。
(
_斤) 回接试验
1
. 协心管法 : 参照 iG b s o n 法进行 , 选用
2 0 x 2
.
5工亚米的 i式管 。
( 1 ) 供试菌株的培养
将供试 菌株 R p : 、 R p l 。 、 R p : 。 、 R P 3 : 号和
A ` 、 A f , ,号接入试管斜面培养基上 , 接种后置
于 2 8 c 下培养 5 一 7 天 , 制成菌悬液备用 。
( 2 ) 无氮培养液配方
按 J e n s e n 培 养 基配 方 : C a Hp o J I . o g ,
K ZH P O
;
0
.
2 9 , M g S O
, ·
7H
Z
o o
.
Z g
,
N a C IO
.
Z g ,
F e C 1 3 o
.
l g , 琼脂 8 一 1 5克 , 水 1 0 0 0毫 Jl· 。
每升加人含有如下微 曦 元素 : B o . 05 % ,
M n o
.
0 5%
, Z n 0
.
0 0 5%
,
M o 0
.
0 0 5%
,
C u
。 . 0 0 2沁的母液 /毫升 :
氮一对照植株 的培 养液 加人 K N o 3 最终
浓度为 0 . 05 % 。
( 3 ) 种子表面灭菌及催芽
选大小均 一 , 饱 满 、 无伤 残 的 种 子在
。 . 2% 酸性 H g 1C 2 中灭 菌 10 分钟 , 用无菌水充
分冲洗 , 装入培养皿内 , 在 4 0 0 c 下无菌及种24
小时 。 种子催芽采用铺有滤纸灭过菌的大培养
皿 , 二It 2 5一 27 O c 超净工作宝内催芽 6 天 。 待主
根长到 4一 5 厘米时即可接种 。
( 4 ) 回接方法
回接共 3 个处理 , 每处理 3 个爪复。 将装
有无氮培养基斜而的试管棉塞宁f开 , 对燕和接
菌处理装人灭过菌适量的无氮培养液 , 对照加
入氮 一对照培 养液 , 盖上打孔井灭苗灼汽水瓶
盖 。 将用灭菌棉花 包裹灼幼苗 靠近 一户 }十的主
根 , 插人试管盖孔内 , 使其与液 .沉于安砍 , 延斜
面生长 。
( 5 ) 培养条件
植株 庄光照培 荞橱中培养 。 光 :!找强度 2 0 0。
呢
L X , 时间每天 12 小时 , 根部 遮光 、 适时 分别
滴加灭过菌的无氮培养液和氮一对照培养液 。
2
. 蚝石盆栽法
将蜓石置人表面灭过菌的小花 盆中 , 用高
压 灭 菌 器 在 12 0 “ e 下消 一毒 1 小时 , 介,1歇 2 4
小时 , 再消毒 1 小时 , 再间歇 2 4小时 , 再进行
第三次消毒 ( 1 小时 ) 。 待迁石冷却后 , 在超
净工作室内将表 面灭菌 , 分别用无菌水 、 氮一
对照培养液和菌液浸 2 4小时的种子种在小花盆
中 , 表面覆盖一层灭过菌的石英砂 , 送入光照
培养橱内培养 。 适时浇无氮培养 i夜和氮一对照
培养液 。
(六 ) 根瘤固氮活性测定
用乙炔还原法测定根瘤固氮活性 , 采用国
1 7 一
产 Sp 2 3 o s型气相色谱仪 , G D x s o Z 为固 定
相 , 以 50 毫升白色滴瓶为反应瓶 , 加盖翻 口橡
皮塞 。 根瘤量为 0 . 5一 1 9 。 混合气 体 为 : 空
气 : 乙炔为 9 : 1 , 在 2 8 O e 培养 3 小时 , 用 I N
硫酸终 _止反应 。
二 、 结果分析
(一 ) 形态特征及染色
刺槐和紫穗槐根瘤菌在蔗糖一酵母膏琼脂
培养基上菌落为圆形 , 直径 2一 4 毫米 , 凸起 ,
边缘整齐 , 乳 白色 , 粘稠 。 光学显微镜下 , 细
胞短杆状 , 1 . 5 一 3 x o . 5微米 , 能运动 , 革兰
氏阴性反应 。
(二 ) 生理特征
R p ,
、
R p
. 。 、
R , :
。 、
R p , : 号 菌 株 和 A f , ,
A ; : , 号菌株在酵母一甘露醇 .涪养 基上一 天内
生长很少 , 4一 7 天大量生长 ; 对刚果红不吸
色或微吸 色 , 在蛋白膝一葡萄糖琼脂培养基上
不生长或生长极慢 , P H 变化小 ; 在 牛乳一石
蕊培养基中无酸碱反应 。
(三 ) 回接试验
以两种方法 , 两种介质进行回接试验 , 均
获得满意结果 。 详见表 1 和表: 2 。
通过试管法回接试验观察到 , 人选的 6 株
根瘤菌对宿主的浸染能力是明显的 。 接菌 8 天
后 , 刺槐和紫他愧幼根开始出现瘤状突起 , 半
个月后形成明显的根痛 。 R , 、号菌株在前批回接
试验时 , 结瘤情况 良好 , 此次试验未结瘤 , 可
能与菌株老化有关 。 未接菌的对照和对照加氮
处理 没有一株结瘤 。 将 紫穗 槐根 瘤菌 A : , 和
A f l : 接于刺槐 , 也能使刺槐 结瘤 , 但 瘤出 现
较晚 , 说明刺槐对根瘤菌要求 专一性不很强 。
表 2 中的数据是处理后 65 天检查结果 , 数
值为三个重复的平均数 。 接 菌 植株 与对 照相
比 , 接 R p 、 、 号菌的刺槐株高增 加 87 . 8% , 鲜
重增加 l 倍多 , 千重增加 9 9% ` , 比对照加氮处
理株高也略有增加 ,但干 、鲜重是减少趋势 。 紫
穗槐回 接认验 , 以接 A f 、 号 菌为例 , 株高 、
农 , 回接宿主俊染结 . 能力
各菌株刺槐结瘤
(个 )
各菌株紫穗槐结瘤
刺槐接杯紫穗傀根瘤菌结有
(个 )
A f z -
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、 _ 、 丫 , 卜卑
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.
3 5
.
7 3
.
7 5
表 2 回接宿主俊染结右和苗木生长情况
:…粉…: …艰猛
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.
{ _ }对 照 }不榕 } 。 11 ,
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0
1
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3 4
}
0
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0 6
:…:…惫介…奢…}…{·…{·{…{·{
干 、 鲜重比对照和对照加氮处理均有增加 。 接
菌结瘤数和不接菌结瘤 数差 异显 著 。 到 检查
时 , 对照因严重缺氮 , 已变得枝叶桔黄 , 叶片
凋落 , 而接菌的植株 , 仍枝叶繁茂 。 说明由于
根瘤菌的固氮作用 , 已明显改善了刺槐 、 紫穗
槐植株的氮素营养状况 。
(四 ) 根瘤固氮活性
对蜓石盆栽刺槐根瘤进行乙炔还原能力洲
定 , 结果表现出明显的固氮活力 。 刺槐根瘤乙
炔还原活力为 1 . l l x 10 一 s m o I Zg鲜重 · h J
通过形态特征 、 生理特性 、 回接试验的结
果及固氮活力的测定 , 证实了选出的 6株 l勤株
确为根瘤菌 。
(责任编耕 杨 超 )
一 1只 一