全 文 ：［收稿日期］ 2010-01-20
［第一作者］ 宋睿，硕士研究生，研究方向中药分析，Tel:
15110120182，E-mail:psysr@ 126. com
［通讯作者］ * 周亚伟，教授，Tel:010-62538501，E-mail:ywzhou
@ pku. edu. cn
香青兰中总黄酮和单体的含量测定
宋睿1，金传山1，周亚伟2*
(1. 安徽中医学院药学院，合肥 230038;2. 北大世佳研究中心，北京 100084)
［摘要］ 目的:考察香青兰中单体(刺槐素-7-o-β-D-葡萄糖苷)、总黄酮的含量。方法:采用紫外分光光度法(UV)测定总
黄酮含量;采用高效液相色谱法(HPLC)测定单体含量，RP-C18柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0. 1%磷酸水(26∶
74)，流速为 1. 1 mL·min － 1，柱温室温，检测波长为 326 nm。结果:单体(刺槐素-7-o-β-D-葡萄糖苷)含量为 0. 33%，回收率为
98. 62%;总黄酮含量为 1. 90%，回收率为 97. 59%。结论:所建方法准确、简便，为科学地评价香青兰药材的质量提供依据。
［关键词］ 香青兰;总黄酮;高效液相色谱;刺槐素-7-o-β-D-葡萄糖苷
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ B ［文章编号］ 1005-9903(2010)12-0071-04
To Determine Content of Total Flavonoids and
Robinin-7-o-β-D-xylosylglucoside from Dracoephalum mololarie
SONG Rui1，JIN Chuan-shan1，ZHOU Ya-wei2*
(1. Anhui College of Traditional Chinese Medicine，Hefei 230000，China;
2. Shi Jia Research Center of Peking University，Beijing 100084，China)
［Abstract］ Objective:To determine the content of total flavonoids and robinin-7-o-β-D-xylosylglucoside
fron Dracoephalum mololarie. Method: The content of total flavonoids was determined by ultraviolet
spectrophotometry(UV). The content of robinin-7-o-β-D-xylosylglucoside was determined by HPLC. The analysis
was performed on a RP-C18 column(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)with aceconitrile-0. 1% phosphoric acid (26∶ 74)as
mobile phase at a flow rate of 1. 1 mL·min － 1，and at room temperature. The detection of wave length was set at 326
nm. Result:The content of robinin-7-o-β-D-xylosylglucoside was 0. 33%，and recovery rate was 98. 62% . The
content of total flavonoids was 1. 90%，and recovery rate was 97. 59% . Conclusion:The method is suitable for the
determination of flavonoids components from D. mololariea.
［Key words］ Dracoephalum mololarie;total flavonoids;HPLC;robinin-7-o-β-D-xylosylglucoside
香 青 兰 药 材 取 自 唇 形 科 植 物 香 青 兰
Dracocephalum moldovica L.干燥地上部分［1］，又名巴
德尔吉布亚。分布于华北、东北、西北等省区，新疆
以南疆和东疆栽培较多。其药用全草为干燥地上部
分，有泻火、清热、止痛、止血等功效。在维吾尔医和
民间常用于治疗冠心病及高血压病、寒性神经性头
痛、寒性感冒、气管炎等疾病［2］。近年来经药物成分
分析，香青兰主要含有挥发油［3］、氨基酸、微量元
素［4］、萜类、黄酮类［5］、多糖［6］等，而黄酮是其主要
有效成分之一［7］。黄酮类化合物具多种多样的生理
活性，如对降血脂、抑制血小板聚集凝结和血栓的形
成。此外，还有保肝、抗炎、抗病毒、抗菌等作用［8］。
王建芬［9］等采用 RP-HPLC 同时测定了香青兰药材
中山奈素、洋芹素、异鼠李素等黄酮类成分的含量。
田树革［10］等用芦丁作对照品，应用硝酸铝、亚硝酸
钠法测定香青兰中总黄酮含量。为了对香青兰进行
有效的质量控制，本试验以一种从香青兰中分离得
到的单体为指标，以香青兰药材为对象，建立了高效
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DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2010.12.023
液相色谱法测定其单体的含量方法，并采用紫外分
光光度法对其中的总黄酮进行了含量测定，为香青
兰的药材质量评价提供参考方法。
1 材料
1. 1 仪器 岛津 LC-10AT 高效液相色谱仪;SPD-
10AT 紫外检测器;岛津 UV-2501PC 型紫外分光光
度计;SARTROIUS BP211D 型 1 /万电子分析天平;
昆山市超声仪器有限公司 KQ-250DB 型数控超声清
洗器。
1. 2 试药 单体对照品，公司自制 (纯度为
95. 31%);甲醇为色谱纯，康科德科技有限公司;乙
腈为色谱纯，Dimka 公司;水为重蒸水;其他试剂均
为分析纯。香青兰产于新疆，经中国中医科学院中
药研究所郝近大教授鉴定为唇形科植物香青兰 D.
moldovica L.干燥地上部分。
2 方法与结果
2. 1 HPLC 测定香青兰中单体的含量
2. 1. 1 色谱条件 色谱柱 RP-C18柱(4. 6 mm × 250
mm，5 μm);流动相乙腈-0. 1% 磷酸水(26 ∶ 74)，检
测波长 326 nm，流速 1. 1 mL·min － 1，柱温室温。在
该色谱条件下，样品中的单体与其他峰均能达到基
线分离，保留时间在 26. 5 min 左右，对照品与样品
的色谱图见图 1。
2. 1. 2 对照品溶液的制备 精密称取单体对照品
(纯度为 95. 31%)1. 61 mg，甲醇定容于 25 mL 量
瓶，摇匀，即得0. 061 38 g·L － 1对照品储备液。
2. 1. 3 供试品溶液的制备 称取香青兰药材粉末
约 1. 0 g，精密称定，用 70%甲醇加热回流提取 2 次，
每次 50 mL，提取 1 h，过滤，合并滤液于 100 mL 量
瓶中，定容，摇匀，0. 22 μm 滤膜滤过，取续滤液即得
供试品溶液。
2. 1. 4 线性关系考察 精密量取对照品储备液
0. 5，1. 0，2. 0，5. 0，8. 0 mL 分别置于 10 mL 量瓶中，
图 1 刺槐素-7-o-β-D-葡萄糖苷含量测定 HPLC
A.对照品;B.香青兰样品
加甲醇定容，摇匀，分别吸取上述各浓度对照品溶液
及对照品储备液各 10 μL 依次注入液相色谱仪，按
上述色谱条件测定，以对照品浓度为横坐标(X)，峰
面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程为 Y
= 2. 067 6 × 107X － 1. 309 9 × 104，r = 0. 999 6，结果
表明在0. 003 07 ～ 0. 061 38 g·L － 1浓度和峰面积的
线性关系良好。
2. 1. 5 精密度考察 制备同一份香青兰药材供试
品溶液，分别精密吸取 10 μL，连续进样 6 次，RSD
为 2. 36%，表明仪器精密度良好。
2. 1. 6 稳定性考察 精密吸取同一供试品溶液 10
μL，分别于 0，1，2，4，6，24 h 测定峰面积，结果显示
RSD 为 1. 40%，表明本品在室内正常条件下 24 h 内
稳定性良好。
2. 1. 7 重复性考察 取同一批香青兰药材 6 份，分
别独立按供试品溶液制备方法制成样品溶液，在上
述色谱条件下测定，测得的平均含量为 0. 33%，RSD
为 2. 69%，表明本法重复性良好(表 1)。
表 1 单体含量测定方法学重复性试验结果
No.
称重
/ g
样品浓度
/ g·L － 1
标品浓度
/ g·L － 1
样品
峰面积
标品
峰面积
含量
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 1. 006 89 10. 068 9 0. 030 69 712 637 670 663 0. 32
2 1. 005 01 10. 050 1 0. 030 69 762 121 670 663 0. 35
3 1. 007 60 10. 076 0 0. 030 69 716 174 670 663 0. 33 0. 33 2. 69
4 1. 001 00 10. 010 0 0. 030 69 723 731 670 663 0. 33
5 1. 002 75 10. 027 5 0. 030 69 730 669 670 663 0. 33
6 1. 008 67 10. 086 7 0. 030 69 751 200 670 663 0. 34
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2. 1. 8 回收率试验 称取 5 份同一样品粉末约 0. 5
g，精密称定，并加入一定量的对照品，按供试品溶液
制备方法制成样品溶液，精密吸取 10 μL，在上述色
谱条件下测定，计算回收率。结果显示平均回收率
为 98. 62%，表明回收率良好(表 2)。
2. 2 紫外分光光度法测定香青兰中总黄酮含量
表 2 单体含量测定方法学加样回收率试验结果
No.
称样量
/mg
加入量
/mg
标品浓度
/ g·L － 1
样品
峰面积
标品
峰面积
含量
/%
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 501. 81 2. 07 0. 030 69 810 330 672 531 0. 74 99. 39
2 500. 72 2. 23 0. 030 69 842 535 672 531 0. 77 98. 80
3 504. 51 2. 30 0. 030 69 863 531 672 531 0. 78 98. 71 99. 81 1. 32
4 505. 15 2. 33 0. 030 69 883 665 672 531 0. 80 101. 90
5 505. 61 2. 37 0. 030 69 881 539 672 531 0. 80 100. 27
2. 2. 1 溶液的制备 对照品溶液的制备:精密称取
单体对照品(纯度为 95. 31%)2. 58 mg，置 50 mL 量
瓶中，用甲醇溶解并定容，即得。
供试品溶液的制备:称取香青兰药材粉末约
1. 0 g，精密称定，用 70%甲醇加热回流提取 2 次，每
次 50 mL，提取 1 h，过滤，合并滤液于 100 mL 量瓶
中，定容，摇匀，即得。
检测波长的选择:分别移取对照品溶液 3. 0
mL，供试品溶液 1. 0 mL 置 10 mL 的量瓶中，加甲醇
至刻度，摇匀，在 200 ～ 400 nm 波长范围内测定对照
品和供试品溶液的紫外吸收光谱，结果显示在 323
nm 处有较大吸收，且峰形相似，所以选择 323 nm 为
检测波长(图 2)。
图 2 香青兰药材及单体对照品紫外扫描
2. 2. 2 线性关系考察 分别精密吸取香青兰对照
品储备液(0. 051 09 g·L － 1)0. 2，0. 5，1. 0，2. 0，3. 0，
4. 0 mL 至 10 mL 量瓶中，甲醇定容，摇匀。以甲醇
为空白，在 323 nm 处测定吸光度值。以对照品浓度
为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。回归
方程为 Y = 5. 00 × 10X － 6. 00 × 10 － 3，r = 0. 999 9，表
明在0. 001 02 ～ 0. 020 43 g·L － 1，浓度和吸光度的线
性关系良好。
2. 2. 3 精密度考察 取同一份香青兰药材供试品
溶液，在波长 323 nm 处直接紫外测其吸光度 6 次，
RSD 为 0. 32%，表明仪器精密度良好。
2. 2. 4 稳定性考察 取同一样品溶液，分别在 0，
0. 5，1，1. 5，2，3，4 h，波长 323 nm 处测其吸光
度，RSD 为 0. 81%，表明本品 4 h 内具有良好的稳
定性。
2. 2. 5 重复性考察 取同一批次的香青兰药材 6
份，按供试品溶液制备方法操作，得到 6 份药材供试
液。分别精密吸取对照品溶液 2. 0 mL 和各供试品
溶液 0. 5 mL，置 10 mL 量瓶中，甲醇定容，在波长
323 nm 处测其吸光度，测得的平均含量为 1. 90%，
RSD 为 1. 08%，表明本法重复性良好(表 3)。
表 3 香青兰总黄酮含量测定方法学重复性试验数据
No.
称样量
/ g
样品浓度
/ g·L － 1
标品浓度
/ g·L － 1
样品
A
标品
A
含量
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 1. 068 93 0. 534 5 0. 010 22 0. 494 0. 495 1. 91
2 1. 053 67 0. 526 8 0. 010 22 0. 479 0. 495 1. 88
3 1. 067 12 0. 533 6 0. 010 22 0. 499 0. 495 1. 93 1. 90 1. 08
4 1. 067 13 0. 533 6 0. 010 22 0. 494 0. 495 1. 91
5 1. 050 20 0. 525 1 0. 010 22 0. 486 0. 495 1. 91
6 1. 020 96 0. 510 5 0. 010 22 0. 465 0. 495 1. 88
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2. 2. 6 回收率考察 称取香青兰药材粗粉约 0. 5
g，一式 2 份，精密称定，再精密加入对照品，按供试
品溶液制备方法操作，得到药材供试液。分别精密
吸取供试品溶液 0. 5 mL 和对照品溶液 2. 0 mL，置
10 mL 量瓶中，甲醇定容，在波长 323 nm 处测其吸
光度，计算方法的回收率，测得平均加样回收率为
97. 59%，表明总黄酮回收率良好(表 4)。
表 4 香青兰总黄酮含量测定方法学加样回收率试验结果
No.
称样量
/mg
样品质量浓度
/ g·L － 1
加入量
/mg
对照品质量浓度
/ g·L － 1
样品
A
对照品
A
质量分数
/%
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 501. 26 0. 250 6 11. 21 0. 010 22 0. 498 0. 501 4. 053 96. 15
2 503. 65 0. 251 8 11. 96 0. 010 22 0. 515 0. 501 4. 171 95. 51
3 501. 42 0. 250 7 10. 91 0. 010 22 0. 500 0. 501 4. 067 99. 46 97. 59 2. 17
4 505. 36 0. 252 7 11. 81 0. 010 22 0. 526 0. 501 4. 245 100. 24
5 500. 82 0. 250 4 11. 50 0. 010 22 0. 506 0. 501 4. 121 96. 58
2. 3 样品含量测定 取 3 批样品，按 2. 1. 3 供试品
溶液的制备项下方法制备供试液，每样平行测定 3
份，并在上述色谱条件下测定，计算样品中刺槐素-
7-o-β-D-葡萄糖苷的含量，按 2. 2. 5 的方法操作，测
定样品中总黄酮含量。
3 批样品的产地均为新疆。结果 3 批样品中刺
槐素-7-o-β-D-葡萄糖苷含量依次为 0. 38%，0. 43%，
0. 35%，总黄酮含量依次为 1. 96%，1. 99%，1. 91%。
3 讨论
3. 1 提取方法的考察 比较了不同浓度的甲醇、不
同浓度的乙醇、水共 9 种溶剂的提取效果，以及超
声、回流、索式 3 种提取方法，以 70%甲醇回流提取
2 次，每次 1 h 时的单体含量最高，故选用该法提取。
3. 2 总黄酮含量测定方法的选择 比较了 Al
(NO3)3 -NaNO2-NaOH 显色法、AlCl3 显色法和直接
紫外法 3 种方法，以单体(刺槐素-7-o-β-D-葡萄糖
苷)为对照品，利用直接紫外法对香青兰中总黄酮的
含量进行测定的方法，具有简便易行及结果稳定可
靠等优点，故选用该法测定。
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化合物的研究［J］.食品科学，2007，28(8):384.
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［责任编辑 顾雪竹］
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