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贵州续随子主要病害病原菌的分离鉴定
王晓敏，张 燕，龚德勇
(贵州省亚热带作物研究所，贵州兴义 562400)
摘要:通过柯赫氏法则，采用组织分离法结合病原菌显微镜形态观察，对在贵州栽培种植的续随子发生的立枯病、
褐斑病及灰霉病病原菌进行鉴定。结果表明，立枯病病原菌为木贼镰孢菌［F． equiseti (Corda)Sacc．］，褐斑病病原菌
为假尾孢属(Pseudocercospora spegazzini)真菌，灰霉病病原菌为灰葡萄孢真菌(B． cinerea Pers．)。
关键词:续随子;病害;病原菌;鉴定
中图分类号:S435． 671 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2013)09 － 0121 － 02
收稿日期:2013 － 03 － 11
基金项目:贵州省农业科学院研究生创新基金［编号:黔农科合(创
新基金)2010014 号］;贵州省科研院所创新能力建设项目［编号:
黔科合院所创能(2010)4007 号］。
作者简介:王晓敏(1982—) ，女，贵州安顺人，助理研究员，主要从事
特种油料植物创新利用研究。E － mail:wxmgzu@ 163． com。
续随子(Euphorbia lathyris L．) ，又叫千金子、小巴豆。为
大戟科大戟属植物，在全国多个地区均有分布，可作为中药治
疗小便不通、水肿等病症。近几年研究发现，续随子种子含油
率达 45%以上，提取的油脂以 C16、C18脂肪酸为主，与理想柴
油替代品的分子组成相类似，是一种理想能源作物［1］。
贵州亚热带作物研究所通过对续随子环境适应性、生物
学特性及栽培技术等一系列的研究发现，续随子在贵州的生
长环境为海拔 400 ～ 2 000 m，年均温 14 ～ 20 ℃的地区。但受
高温高湿气候条件的影响，续随子在整个生育期均可发生病
害。一般发病率 10% ～15%，严重的高达 30% ～ 40%。经调
查，初步确定有立枯病、褐斑病、灰霉病等病害［2 － 5］。但对这
几种病害的病原菌种类尚不明确，为了有效控制续随子病害
的发生及蔓延，本研究采用常规组织分离法结合病原菌形态
观察，对续随子病害的病原菌进行分离、鉴定。
1 材料及方法
1． 1 材料
供试续随子病样采集于贵州亚热带作物研究所兴义续随
子种植试验基地。
培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)。
1． 2 病菌的分离培养与纯化
按常规组织分离法进行病菌分离，分离病原菌前准备好
已经滴入 1 ～ 2 滴 25%乳酸溶液 PDA 平板。采回发病植株，
选取发病部位，用自来水冲洗干净，取病健交界处病斑组织数
小块(3 ～ 5 mm) ，在无菌条件下先放入 70%乙醇浸泡 10 s再
转移至 0． 1%升汞 2 ～ 3 min 浸泡进行消毒处理，经无菌水洗
3 次后移入 PDA平板上，PDA 平板置 25 ℃培养箱培养，定期
观察记载，并及时对分离组织长出的菌落进行纯化培养。
1． 3 致病性测定
按柯赫氏法则，将分离纯化后得到的病原菌菌落转接斜
面培养基进行扩大培养。待分生孢子大量产生后用无菌水配
成孢子悬浮液，用小型喷雾器将孢子悬浮液喷洒在健康续随
子的叶片正背面，使其充分湿润，喷毕立即放入人工气候箱进
行保温(25 ～ 30 ℃)保湿(99%)培养直至出现初期症状，试
验设喷清水作对照，并作相同管理。接种后，每天对植株发病
情况进行观察记载，出现典型症状后，取发病部位进行再分
离，并与原接种菌比较。
1． 4 病原菌鉴定
将菌株接种于 PDA平板，放入 25 ～ 30 ℃恒温条件下培
养，待菌落长成后，观察菌落颜色、形状、气生菌丝的疏密程度
等;产孢后在显微镜下观察其产孢结构及分生孢子的形态，并
用带测微尺的显微镜测量分生孢子大小等。并取子实体进行
显微镜观察，根据其形态特征和测量结果，参照文献［6］，进
行病原菌鉴定。
2 结果与分析
2． 1 立枯病症状及病原菌特征
病害症状:续随子立枯病发病期主要在播种出苗至开花
—121—江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 9 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2013.09.080
结实前(一般为当年 8 月至次年 3 月) ，从幼苗期到结实期都
可发生，特别是幼苗期发病较重，容易造成猝倒死苗。在子叶
期到 3 ～ 5 片真叶期受高温高湿影响续随子立枯病发生严重，
发病部位为茎部和叶片。发病初期叶片变暗绿，近土面的幼
茎基部呈红褐色或黑褐色的水渍状病斑，有的环绕茎部感染
蔓延，有的只在茎的一侧感染蔓延呈长条状，感病部位缢缩腐
烂，然后整株逐渐枯死，但叶片不脱落，雨天倒地死亡，晴天因
基部输导组织受害而失水枯死。结实期立枯病多从根部和茎
基部开始发生，然后发展到茎部或分支部位。
病原菌特征:分离的菌株在 PDA 培养基上的菌落呈白
色，气生菌丝绒状，分生孢子梗无色，无隔膜，有两种类型孢
子，大型分生孢子镰刀形，弯曲度大，顶孢尖，顶端 3 － 5 隔，基
部有突起，小型分生孢子椭圆形或短圆柱形，无色，单孢。鉴
定为半知菌亚门镰刀菌属(Fusarium Link)木贼镰孢菌［F． eq-
uiseti (Corda)Sacc．) ］(图 1)。
2． 2 褐斑病症状及病原菌特征
病害症状:续随子褐斑病传播途径以病原菌在种子或病
残植株上越冬，叶片受侵染为害后，首先形成褪绿的褐色小
点，在病斑外围的叶片呈淡黄绿色，明显浅于病斑颜色，而叶
背面病斑颜色为浅棕色，明显浅于正面病斑的颜色。然后逐
渐扩展成斑径为 1 ～ 5 mm、不规则、不同形状的黑褐色病斑，
有轮纹，病斑进一步扩展后，多个病斑会连成一块更大的不规
则病斑。随着病斑的扩大，有些叶片卷曲、枯萎、提早脱落，影
响开花和结实，严重时部分植株早衰或枯死。到后期，叶片正
面病斑上可以看到许多小黑点，而叶背面较少见，茎部病斑颜
色从中间往外由棕色逐渐加深到黑色。
病原菌特征:续随子褐斑病病原菌在 PDA 上的菌落成圆
形，边缘整齐、菌丝有隔、分枝。刚形成的菌落，气生菌丝较
平伏，呈淡黄色或浅黄绿色，培养基不呈色。随着菌落扩大，
菌丝呈淡灰黄色，棉絮状。再过数天，菌落边缘的菌丝呈灰白
色，中间部分呈灰绿色，培养基仍不呈色。而后期老化的菌落
则全部呈黑色。菌丝体内生，近无色至淡青黄色、分枝、具隔
膜。分生孢子梗浅至中度褐色，顶端颜色较浅，基部颜色较
深，紧密簇生在子座上。分生孢子梗的顶端较细，宽度不规
则，有时局部膨大，直立或稍弯，0 ～ 1 个曲膝状折点，分枝或
不分枝，具有 0 ～ 3 个分隔，多数为 1 ～ 3 个分隔，大小为
3. 55 ～ 36． 22 μm ×1． 24 ～ 4． 66 μm。在顶端着生分生孢子，分
生孢子单生，倒棍棒形，无色，具隔膜，孢痕和脐点不加厚，有
0 ～ 9 个分隔(其中 4 ～ 7 分隔较常见) ，大小范围为 16． 77 ～
103． 30 μ m ×1． 11 ～ 3． 48 μm。鉴定该菌为半知菌亚门丝孢
纲假尾孢属(Pseudocercospora Spegazzini)真菌(图 2)。
2． 3 灰霉病症状及病原菌特征
病害症状:续随子灰霉病发病期主要为开花结实期。该
病主要为害叶片和蒴果，特别在清明节前后遇低温阴雨天气
发病率较高，天气潮湿病组织上长出许多灰色霉层，往往出现
灰霉病与褐斑病交互感染发病。果实受害，变褐腐烂或病果
干枯，籽粒空瘪。花序受害，连同花轴形成无定形褐腐，不能
结实。叶片受害形成失绿斑块，干时病部易破碎，植株早衰。
病原菌特征:灰霉病病原菌在 PDA 上的菌落扩展生长，
初为白色至深灰色，后变暗褐色。菌丝无色至褐色，任意分
枝，具隔膜。分生孢子梗细长，顶端分枝，分枝末端膨大，呈树
枝状分枝，从膨大体或分枝末端小突起上聚生多数分生孢子，
外观呈葡萄穗状，无色，具隔膜，分生孢子球形，单胞 9 ～
16 μm ×6 ～ 10 μm。鉴定为葡萄孢属(Botrytis Micheli)灰葡
萄孢真菌(B． cinerea Pers．) (图 3)。
3 结论
按照柯赫氏法则，将分离纯化后的立枯病病原菌、褐斑病
病原菌、灰霉病病原菌 3 种病原菌接种到健康植株，发病后分
离得到的病原菌与原病原相同。续随子立枯病、褐斑病及灰
霉病是续随子全生育期中常发生的主要病害，这几种病的发
生，严重影响了续随子产量的提高。续随子立枯病从苗期到
结果期均可发生，发病部位主要是离地以上 2 ～ 3 cm 处茎基
部，病原菌鉴定为半知菌亚门镰刀菌属(Fusarium Link．)木贼
镰孢菌［F． equiseti (Corda)Sacc．］。续随子褐斑病和灰霉病
发病部位主要是叶片，这两种病害叠加发生，病原菌分别为半
知菌亚门的假尾孢属(Pseudocercospora spegazzini)和葡萄孢属
(Botrytis Micheli)真菌。
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