全 文 ：第 20卷第 2期（2015） Vol．20 No.2（2015）
收稿日期：2015－03－13
基金项目：陇南师专 2014 年校级重点科研项目（2014LSZK01003）.
作者简介：田凤鸣（1986—），女，甘肃礼县人，讲师.研究方向：微生物及生物技术.
葎草提取物抑菌活性的研究
田凤鸣，王 瀚，赵淑玲，卓平清，何九军，陈文东
（陇南师范高等专科学校 农林技术学院，甘肃成县 742500）
摘 要：本实验采用两种不同溶剂分别对葎草进行提取，同时研究提取物对 6种供试菌抑菌
活性的实验结果发现：70%的醇提取物对金黄色葡萄球菌有抑制作用，而对大肠杆菌、枯草芽
孢杆菌、黄杆菌、成团泛菌均无抑制作用；70%与 1%HCl的混合液的提取物对枯草芽孢杆菌具
有较强的抑制作用，而对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黄杆菌、成团泛菌均无抑制作用.因此，不
断获得有效成分的提取物对葎草资源在植物源农药方面的开发利用具有重要的意义.
关键词：葎草；抑菌活性；杀菌剂；提取物
中图分类号：Q946.83 文献标志码：A 文章编号：1008－9020（2015）02-036－04
葎草为桑科，葎草属草本植物，具有清热、利尿、
消疲、解毒之功.[1]在我国主要分布于东北、华北、中
南、西南、陕西、甘肃，葎草主要生长在海拔 500～
1500 m 的沟边、路旁、荒地、田边、林地、草地、果园、
沙荒地、住宅附近及垃圾堆等处[2].通常群生，呈现优
势或单一群丛，生长迅速，可自播繁殖在肥沃而开阔
的地上，能长成多枝的大株丛[3].
随着人们环保意识的增强，从植物中筛选具有
一定抗菌活性的天然抗菌剂已成为目前研究热点之
一. 葎草资源丰富， 为了更好地开发与利用葎草资
源，本实验拟开展葎草茎叶不同溶剂提取物对大肠
杆菌、金黄色葡萄球菌、黄杆菌、枯草芽孢杆菌、成团
泛菌、肺炎双球菌等 6种供试菌抑菌活性的研究，为
葎草资源的合理开发利用提供理论参考.
1. 材料与方法
1.1材料、菌种及培养基
1.1.1材料：葎草采自陇南师范高等专科学校校园.
1.1.2 供试菌：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、
黄杆菌、大肠杆菌、成团泛菌、肺炎双球菌均为陇南
师专农林技术学院微生物实验室保存.
1.1.3菌种活化培养基：
牛肉蛋白胨培养基：蛋白胨 10g，牛肉膏 3g，Na-
Cl 5g，用蒸馏水定容至 1000mL，pH 7.0~7.2.
LB 培养基：胰蛋白胨 10g，酵母提取粉 5g，NaCl
5g，蒸馏水定容至至 1000 mL，pH 7.0~7.2.
1.2方法
1.2.1 葎草醇提取与浓缩：采集新鲜葎草，冲洗
干净， 剪成 2~3cm小段，45℃干燥箱中烘干，FW800
粉碎机粉碎，过 60 目筛子.以固液比为 1:15 的比例
将葎草粉末加入 70%乙醇和 70%乙醇与 1%HCl 的
混合液（体积比为 1:1）中.将两种混合液在 60℃提取
4h 后，过六层纱布，取两种滤液在60℃水浴锅中浓
缩至膏状，称量膏状的质量，将其膏状物用无菌水
稀释成 6.75mg/mL、12.5mg/mL、25mg/mL、50mg/mL、
100mg/mL 五个梯度，保存在 4℃.
1.2.2 抑菌效果的测定：将供试细菌在 37℃培养
箱中液体培养基中活化， 取活化后的菌液稀释至
600nm处的 OD值为 0.1，取 100μL菌液涂布于细菌
固体培养基上，37℃恒温培养 1h备用.
1.2.3 滤纸片的制备： 用打孔器将滤纸打成 6
mm 的滤纸片 ，121℃高压灭菌 . 将滤纸片浸渍在
1.2.1 五个梯度的提取液中备用，同时将滤纸片浸渍
在无菌水中作为对照组. 将备好的滤纸片放入 1.2.2
的细菌涂布板上，24h后观察抑菌情况.
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2. 结果与分析
2.1不同溶剂对葎草的提取率
分别称取葎草粉末 10g， 按固液比 1:15 的比例
加入 70%的乙醇和 70%乙醇与 1%HCl 的混合液的
两种溶剂， 提取方法按照 1.2.1， 最后净重分别为
2.4g和 2.8g，提取率分别达到 24%和 28%.
2.270%乙醇溶剂提取物的抑菌效果
提取液经浓缩后，用无菌水溶解成 5 个梯度分
别为：6.75mg/mL、12.5mg/mL、25mg/mL、50mg/mL、
100mg/mL， 对供试菌的抑菌实验结果表明：70%的
醇提取物对金黄色葡萄球菌具有抑制作用 （图 1所
示），从测量抑菌圈大小的结果表明：随着葎草提取
物浓度的增加， 其对金黄色葡萄球菌的抑制作用也
逐渐增强， 当浓度为 100mg/mL 时， 抑菌圈可达到
15mm， 而在 6.75mg/mL 和 12.5mg/mL 两个梯度时，
对金黄色葡萄球菌均无抑制作用，而对大肠杆菌、枯
草芽孢杆菌、黄杆菌、成团泛菌、肺炎双球菌均无抑
制作用.
A.100mg/mL；B.50mg/mL；C.25mg/mL；D.12.5mg/mL；E.6.75 mg/mL；F.无菌水
Figure 1. A different gradient humulus extract to Staphylococcus aureus inhibitory effect
A.100mg/mL；B.50mg/mL；C.25mg/mL；D.12.5mg/mL；E.6.75mg/mL；F.aseptic water
图 1 不同梯度葎草提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果
浓度（mg/mL） 抑菌圈相对直径（mm）
CK 无抑菌圈
6.75 无抑菌圈
12.5 12.0
25 14.0
50 16.0
100 22.0
田凤鸣等：葎草提取物抑菌活性的研究
2.370%乙醇和1%HCl 混合液的提取物的抑菌效
果
对供试菌的抑菌实验结果表明：提取物对枯草芽
孢杆菌具有较强的抑制作用（如图 2所示），当浓度达
到 12.5mg/mL 时就开始产生抑菌效果， 随浓度的增
大，其抑制作用也越强，在浓度为 100mg/mL 时，其抑
制圈直径可达 22mm（表 1）.而对大肠杆菌、金黄色葡
萄球菌、黄杆菌、成团泛菌、肺炎双球菌均无抑制作用.
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图 2 不同浓度葎草提取物对枯草芽孢杆菌的抑菌效果
A.100mg/mL；B. 50mg/mL；C.25 mg/mL；D. 12.5mg/mL；E.6.75 mg/mL；F.无菌水
Figure 2. A different gradient humulus extract to Bacillus subtilis inhibitory effect
A.100 mg/mL；B.50 mg/mL；C.25 mg/mL；D.12.5mg/mL；E.6.75 mg/mL；F.aseptic water
表 2 不同提取时间对枯草芽孢杆菌抑圈的影响
Table 2 Different extraction time to influence of inhibition circle of Bacillus subtilis
提取时间（h） 抑菌圈直径 I 抑菌圈直径 II 抑菌圈直径 III 平均抑菌圈直径（mm）
2 14.5 15.2 14.8 14.8
4 17.9 18.4 18.6 18.3
6 16.7 17.8 17.9 17.5
8 16.6 16.7 16.4 16.5
2.4单因素试验法研究提取时间对枯草芽孢杆
菌抑制作用的影响
以抑菌圈直径为指标，研究提取时间对葎草提
取物抑菌效果的影响.取 10g 葎草粉末，按照固液比
1:15，加入 70%乙醇和 1% HCl 的混合液，提取温度
为 60℃，分别提取 2、4、6、8 h制备提取液，观察对枯
草芽孢杆菌的抑菌情况.
实验结果表明（图 3所示）：葎草提取物的抑菌活
性随提取时间的不同出现先增大后减小的趋势，在 4 h
时，提取物的抑菌圈平均直径达到最大：18.3 mm（表 2
所示），说明 4 h为提取葎草中有机物的最佳时间.
3. 讨论
随着人们生活水平的提高，人们的保健意识也
逐渐增强， 从植物中寻找更为环保的农药和药品的
替代品越来越受到人们的重视[4].我国的葎草资源非
常丰富，从中寻找高效杀菌、抑菌成分，不仅环保且将
丰富的资源变废为宝[5].葎草具有丰富的营养成分，在
饲喂畜禽方面不仅降低了饲料的成本， 且提高饲养
效益.同时，葎草中含有一些抗菌消炎、健胃等活性
物质，经常饲喂畜禽，可以预防一些疾病，如口腔炎、
胃肠炎、消化不良、伤风感冒等，从而提高畜禽的抗
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责任编辑：蒲向明
The Study of Antibacterial Activity of Humulus Extract
TIAN Feng-ming，WANG Han，ZHAO Shu-ling，
ZHUO Ping-qing，HE Jiu-jun，CHEN Wen -dong
（College of Life Science, Longnan Teachers College, Chengxian Gansu 742500）
Abstract:In this study, two different solvent extraction Humulus respectively, also studied extracts on bacteria of six kinds to tested
antibacterial activity results found: 70% of the alcohol extract inhibited Staphylococcus aureus, And Escherichia coli, Bacillus subtilis,
Flavobacterium, Pantoea no inhibition: 70% and 1% HCl mixture of the extract of Bacillus subtilis has a strong inhibitory effect, and
Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Flavobacterium, Pantoea no inhibition. Therefore, continue to receive the active ingredients
of the extract on humulus resources in the development and use of botanical pesticides is of great significance
Key words:Humulus；antibacterial activity；fungicide；extract
8
mm
抑
菌
圈
平
均
直
径
18.5
12.5
16.5
14.5
10.5
8.5
42 6 8
提取时间（h）
图 3 葎草提取时间对抑菌效果的影响
Figure 3 Humulus extraction time impact on inhibitory effect
田凤鸣等：葎草提取物抑菌活性的研究
病力和抗应激能力[6].葎草资源丰富，尤其在卫生条件
落后的偏远山区应用广泛[7].《唐本草》说葎草能清热
利尿，“主五淋、止水痢、除疟、虚热口、煮汁及生汁服
之”[8].孙平阳等研究表明，葎草为众多应试材料中保
水最有效的一类植物，并确立了葎草在水土保持方面
的强大地位[9].葎草也可作为工业原料，在工业上，可
作为植物性杀虫剂等农药，具有较高的开发价值[10].
在本试验中，用两种不同的溶剂对葎草进行提
取，结果显示：溶剂不同，提取物的有效成分完全不
同，从而产生的抑菌效果也不一样.70%乙醇提取物
对金黄色葡萄球菌具有抑制效果，但不明显；70%的
乙醇和 1%HCl 混合液的提取物对枯草芽孢杆菌产
生明显的抑菌效果，抑菌圈直径可到 22mm；在单因
素的试验中，4h是提取葎草有效成分的最佳时间.要
发展植物农药，萃取、分离植物中的有效成分是关
键， 适宜的提取方法对制备植物农药保持有效成分
的活性具有重要意义 [11].不同试剂、不同的提取方法
对同一植物农药的有效成分的影响效果也不同.因
此，要开发、生产无公害农药，必须对其提取技术进
行不断的探索和研究.
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