全 文 ：落葵薯提取物清除氧自由基及抗脂质过氧化作用
仇　洁1　周永标2　谭玉兰3　叶红梅4
(1.广州白云山中药厂 ,广州 510515;　2.广州市药品检验所 ,广州 510160;　3.广州市荔湾区骨伤科医
院 ,广州 510140;　4.广州市中医医院 ,广州 510130)
　　摘要　目的:研究落葵薯提取物的体外抗氧化作用。方法:采用 HX和 XO 系统产生的超氧阴离子自由基 , 观
察了落葵薯提取物对氧自由基的清除作用;用 Vc-Fe2+系统诱导大离肝匀浆及线粒体所产生的脂质过氧化物 ,研究
了落葵薯提取物的抗脂质过氧化作用。结果:落葵薯提取物对 HX 和 XO 系统产生的 O-·2 有较强的清除能力 , 并
能抑制肝匀浆自氧化和 Vc-Fe2+系统诱导的脂质过氧化。结论:落葵薯提取物对氧自由基有清除作用 ,并能对抗超
氧阴离子自由基引起的氧化损伤作用。
关键词　落葵薯　脂质过氧化　丙二醛
　　落葵薯是落葵科植物落葵薯 Anredera cordi fo-
lia (Tenre)Van Steen.的珠芽及块茎〔1〕 。原产于
美洲热带地区 ,近年来国内已有栽培 ,地下部分为块
茎 ,国外亦有人作保健食品 ,相传有延年益寿作用 。
本文报道落葵薯醇提物对体外产生的超氧阴离子自
由基的清除作用和对 Vitc-Fe2+系统诱导大鼠肝匀
浆线粒体产生脂质过氧化物的影响 。
1 　材料
1.1 　药品　落葵薯为落葵科植物落葵薯 Anredera
cordi fol ia(Tenre)Van Steen.的珠芽及块茎 。采
集于澳大利亚 ,并经广州华南植物研究所李泽贤教
授鉴定 。干鲜品粉碎 ,加入 70%乙醇室温浸泡 1 h ,
加热回流 2 h ,滤过 ,滤液浓缩 ,干燥 ,粉碎 ,加水搅
匀 ,再加饱和正丁醇搅拌 ,放置 2h。取上清液减压
浓缩成 1 g 生药/ml。
1.2 　试剂　黄嘌呤(HX)、黄嘌呤氧化酶(XO)、硫
代巴比妥(TBA)、超氧化物歧化酶(SOD), 3000 u/
mg),细胞色素 C(Cy toc),均为 Sigma公司产品;四
甲氧基丙烷为日本和光纯药工业株式会社产品 ,牛
血清白蛋白 、考马斯亮兰进口分装为北京医药公司
供应站提供。三氯醋酸等试剂均为国产分析纯。
1.3 　仪器　双光束紫外分光光度计(uv2401PC 日
本岛津);空气振荡器(H2Q-C 哈尔滨东明医疗仪器
厂);低温高速离心机(德国 Heraeus);恒温水浴箱
(BY-500广州白云电器设备厂)。
1.4 　动物　SD 大鼠 ,雄性 ,体重 200g ±10g ,由广
东省 医学 实 验 动物 中 心 提 供。 合 格 证号:
2002A024 。
1.5 　肝线粒体的制备　大鼠实验前禁食 12 h ,断
头处死 ,立即开腹取出肝脏 ,按照文献〔2〕方法制备
肝线粒体混悬液。取混悬液涂片 ,用1%詹钠斯绿 B
染液染色 20 min ,镜检 ,可见呈亮绿色形态为棒状
或哑铃状的线粒体 。混悬液用考马斯亮兰法测定蛋
白 ,使含蛋白量 10 mg/ml。保存于 0 ～ 4℃冰箱备
用 。
1.6 　数据处理　以 x ±s表示结果 ,用 Excel软件
进行 t检验 。
2 　方法与结果
2.1 　落葵薯提取物对 O-·2 生成的影响〔3〕　HX在
XO的作用下产生O-·2 ,O-·2 可使 Cy toc还原 。细胞
色素 C 的最大吸收峰由 557 nm 迁移至 550 nm ,用
双波长双光束紫外分光光度计测定其吸收值之差
■A(550 ～ 557 nm)。
O
-·
2 的抑制率的测定:在反应体系中加入 HX
0.1 mol/L;EDTA:0.1 mol/L ;Cy toc 0.01 mol/L;
PH7.8的磷酸钾缓冲液以及用缓冲液稀释成不同
浓度的落葵薯提取物。空白对照组用等体积缓冲液
代替 。最后以 6.25 u/L XO 启动反应 。以前两分
钟的反应速度 V0 的变化来计算提取物对 O-·2 的抑
制能力 ,提取物的抑制率(Inh%)以下式计算:Inh%
=(V0对照-V0提取物)/V0对照×100%,结果见表 1 。
　表 1　　　　落葵薯提取物抑制 HX和 XO体
产生 O-·2 的影响( x±s , n=10)
组别 浓度(g/ L) ■A 抑制率%
对照 - 0.082±0.002 -
落葵薯提取物 1 0.065±0.003 20.7＊
3 0.050±0.002 39.0＊＊
6 0.032±0.001 61.0＊＊
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01 , ＊＊＊P<0.001 ,下同
2.2 　落葵薯提取物对大鼠肝匀浆脂质过氧化的影
响〔4〕　大鼠实验前禁食 12h ,断头处死 ,打开腹腔 ,
迅速取出肝脏在 4℃冰冷的生理盐水中漂洗 ,除去
污血 ,滤纸吸干水份 ,称重 ,用 4℃冰冷的生理盐水
制成 5%肝匀浆 。实验设给药组和空白对照组 。给
·608· 中药材第 27 卷第 8期 2004 年 8 月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2004.08.029
药组每管加入落葵薯提取物的生理盐水稀释液 0.1
ml ,药液浓度分别为 6.0 、3.0 、1.0 mg/ml ,空白对照
组加等体积生理盐水 。上述各管分别加入 1.5 ml
肝匀浆 ,于 37℃恒温振荡器中振荡孵育 1.5 h ,各管
分别迅速加入 20%三氯醋酸 1.5 ml ,静置10 min中
止反应 ,然后 1000 g 离心 10 min ,吸取上清液 1.5
ml ,加入 0.67%的 TBA 1 ml , 沸水浴中加热 10
min ,取出 ,迅速冰水冷却 ,于 532 nm 波长处测定各
管吸收度(A),另外 ,在做样品反应时同条件同时制
备 MDA标准曲线组。待测得样品(A)直线 ,分别换
算成 MDA 的含量(湿干重),并计算抑制百分率 。
结果进行统计学处理 ,见表 2。
2.3 　落葵薯提取物对 Vitc-Fe2+诱导的大鼠肝线
粒
体脂质过氧化的影响〔2〕　取上述制备的线粒体蛋
　表 2　　　　落葵薯提取物对大鼠肝匀浆脂质
过氧化的影响( x±s , n=10)
组别 浓度(g/ L) MDA(n mol/ g) 抑制率%
对照 - 289.2±15.6 -
落葵薯提取物 1 263.2±11.5 9.0＊
3 202.3±14.5 30.0＊＊
6 155.8±12.0 46.1＊＊＊
　表 3　　落葵薯提取物对 Vitc-Fe2+诱导的大鼠肝
线粒体脂质过氧化的影响( x±s , n=10)
组别 浓度(g/ L) MDA(nmo l/g) 抑制率%
对照 - 190.8±4.2 -
落葵薯提取物 1 175.1±3.1 8.2
3 160.2±2.0 16.0＊＊
6 150.4±3.6 21.2＊＊
白 ,反应最终体积为 1 m l ,内含 0.5 ml线粒体蛋白 ,
VitC 1 mmol/L , FeSO4 1 mmol/ L , Tris-HCl 20
mmol/ L , PH7.0 , KCl 175mmol/ L 及各种浓度的药
物或缓冲液 。以上各反应管迅速置 37℃空气振荡
器中振荡孵育。1 h 后各管取 0.1 ml测定 MDA。
结果见表 3。
3 　讨论
近年来 ,大量的研究表明 ,多种疾病的发生 、发
展与自由基对组织细胞的损伤有关〔5〕 。体内自由
基反应亦与多种疾病的发生 、发展和机体的老化过
程有着密切的关系 。脂质过氧化产物 MDA 含量的
增加 ,是细胞老化的标志。本试验表明 ,落葵薯提取
物能抑制 HX和 XO 体系产生 O-·2 ,对 Vitc-Fe2+诱
导大鼠肝线粒体脂质和肝匀浆脂质过氧化均有抑制
作用 。以上结果提示 ,落葵薯民间相传有益寿作用
可能与其具有的抗超氧阴离子自由基和抗脂质过氧
化作用有关 。
参 考 文 献
1 　江苏新医学院编.中药大辞典(下册).上海:上海人民
出版社 , 1977∶2695
2 　龚国清 ,等.西红花酸的体外抗氧化作用的研究.中国
药科大学学报 , 2001 , 32(4)∶306
3 　黄诒森等.中国药理学与毒理学杂志 , 1990 , (4)∶275
4 　陈奇主编.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版
社 , 1993∶942
5　莫简.医用自由基生物学导论.北京:人民卫生出版社 ,
1989∶93
(2004-03-16收稿)
·制剂与质量·
三七通络膏的质量标准研究
吕雪斌1　袁志雄1　侯少贞2　张华林2　李　耿2　苏子仁2
(1.广州市香雪制药股份有限公司 ,广州 510530;　2.广州中医药大学 ,广州 510405)
　　摘要　目的:建立三七通络膏的质量标准。方法:薄层色谱鉴别三七通络膏中的三七 、两面针 、红花;薄层扫描
法测定制剂中人参皂苷 Rb1、Rg1含量。结果:TLC 法均能检出三七 、两面针 、红花;人参皂苷 Rb1 、Rg1在 0.5 ～ 2.5 μg
范围内 , 线性相关系数 r 分别为 0.9995 、0.9995 , 回收率分别为 97.5%、97.3%。结论:建立的方法稳定可靠 ,可作
为该产品质量控制方法。
关键词　三七通络膏　三七　人参皂苷　薄层扫描法
　　三七通络膏由三七 、两面针 、红花 、牛膝 、川乌等
组成 ,具有活血化瘀 、行气止痛的功效 ,主要用于各
种跌打损伤 、关节疼痛等症 。本研究对三七 、两面
针 、红花进行了薄层色谱鉴别 ,用薄层扫描法测定制
剂中人参皂苷 Rb1 、人参皂苷 Rg1含量。现将结果报
道如下 。
·609·中药材第 27 卷第 8 期 2004 年 8 月