全 文 ：[ 基金项目] 湖南省教育厅资助项目(编号:05c084);湖南省卫生厅中医药科研基金项目(编号:8424302) [ 作者简介] 熊艳 ,女 ,硕士 ,讲师,
电话:0732-8293876 , E-m ail:xiongyan2006@yahoo.com.cn
正交试验优选淡竹沥的制备工艺
熊艳1 ,吴学文1 ,蒋孟良2 ,潘浪胜1 (1.湘潭大学化工学院 , 湖南 湘潭 411105;2 湖南中医药大学药学院 , 湖南 长沙
410007)
[ 摘要] 目的:优选回流提取法制备淡竹沥的工艺。方法:采用正交设计法 , 以总氨基酸和愈创木酚为评价指标。结果:回流
提取法最佳工艺是 10 倍量 70%乙醇提取 2次 , 提取时间为 2 h。结论:回流提取法方便 、稳定 、可行。
[ 关键词] 淡竹沥;正交设计;总氨基酸;愈创木酚
[中图分类号] R944.1 [ 文献标识码] A [文章编号] 1001-5213(2008)15-1253-03
Optimization of process technology of Danzhuli by orthogonal test method
XIONG Yan
1 ,WU Xue-wen1 , JIANG Meng-liang2 , PAN Lang-sheng1(1.Chemical Engineering Co llege o f Xiang-
tan Unive rsity ,H unan Xiang tan 410005 , China;2.College of Pharmacy , H unan Univ ersity o f T raditional Chinese Medicine ,
Hunan Chang sha 410007 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To optimize the refluxing process fo r Danzhuli .METHODS The experiment wa s designed with o r-
tho gonal test me thod , and the y ield o f total amino acid and guaiaco l w ere used as the te sting index.RESULTS The optimum
so lution refluxing conditions w ere as follow , adding 10-fo ld 70% ethanol , and extr acting fo r 2 hours by solution reflux.CON-
CLUSION The processing technolog y is easy , feasible.
KEY WORDS:Danzhuli;o rthogonal test;to tal amino acid;guaiaco l
淡竹沥系禾本科刚竹属淡竹 Phyl lostachys nigra
(Lodd.)Munro var.henonis(Mitf.)Stapf ex Rendle和
其他一些竹种的秆用火烤灼流出的淡黄色澄清的液
汁。具有清热化痰 ,开窍定惊的作用 ,用于治疗痰热
咳嗽 ,痰黄气促 ,中风痰盛 ,惊风 、破伤风等证[ 1] 。根
据文献[ 2-4] 报道 ,淡竹沥中主要含有氨基酸类 、酚性成
分 、无机元素以及有机酸类成分。淡竹沥中祛痰止咳
作用的有效成分被认为主要是愈创木酚及氨基酸
类[ 5-7] 。早前曾用柱前衍生法测定了淡竹沥中氨基酸
含量[ 8] ,同时建立淡竹沥的愈创木酚 HPLC 测定方
法[ 9] ,比较了 4种不同制备方法中总氨基酸和愈创木
酚 2个质量控制指标的差别[ 10] ,发现提取法中总氨
基酸和愈创木酚含量均高于其他 3种方法制备的淡
竹沥。淡竹沥的传统制备方法易受天气变化 、环境的
影响;收率低 、原材料消耗大且污染环境不适于工业
化大生产 ,所以本试验采用正交试验优选淡竹沥制备
工艺 ,为工业化大生产提供科学依据。
1 材料
淡竹采自湖南长沙岳麓区 ,经湖南中医药大学
生药教研室周日宝教授鉴定;标本存于湖南中医药
大学中药教研室;亮氨酸对照品(中国药品生物制品
检定所 , 批号 0876-9903);愈创木酚对照品(中国药
品生物制品检定所 ,批号 1510-200101 ,供含量测定
用);其他试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 对照品溶液的制备 精密称取亮氨酸适量配
制成 200 mg·L-1对照品溶液备用 。精密称取愈创
木酚适量 ,加甲醇配制成0.107 8 g·L -1的对照品溶
液备用。
2.2 供试品溶液的制备[ 9] 精密吸取淡竹沥样品
溶液25.0 mL 置于烧杯中 ,加入 50 mL 注射用水和
1.0 g 活性炭 ,加热煮沸 ,滤过 ,用 30 ～ 40 mL 热水
少量多次洗涤活性炭 ,滤过 , 浓缩 , 收集滤液于 50
mL 量瓶中 ,加注射用水稀释至刻度 ,摇匀 ,即为总
氨基酸供试品溶液 。
精密吸取淡竹沥样品溶液 20.0 mL ,用稀盐酸
调节pH 至 1 ～ 2 ,用乙醚萃取 3次(20.0 ,10.0 , 10.0
mL),合并萃取液用 5%碳酸氢钠溶液洗涤 ,取乙醚
层。合并乙醚萃取液 ,自然挥干 , 残渣用甲醇 2.0
mL 溶解 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即为愈创木酚
供试品溶液。
2.3 标准曲线的制备 (1)氨基酸:以亮氨酸的浓
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度为横坐标 ,以 568 nm 处吸收度为纵坐标绘制标
准曲线 ,并以亮氨酸的浓度(X)对吸收度(Y)进行线
性回归 , 回归方程:Y =0.044 5 X -0.038 8 , r =
0.999 8 ,在 4 ～ 20 mg·L-1范围内线性关系良好[ 8] 。
(2)愈创木酚:以愈创木酚浓度为横坐标 ,吸收度为
纵坐标绘制标准曲线 ,并以愈创木酚的浓度(X)对
760 nm处吸收度(Y)进行线性回归 ,回归方程:Y =
0.635 4X -0.065 6 , r=0.999 9 ,在0.43 ～ 1.29 mg
·L -1范围内线性关系良好[ 9] 。
3 正交试验法优选工艺
3.1 实验因素水平 本试验以总氨基酸 、愈创木酚
含量为指标 ,考察溶媒种类 、溶媒用量 、提取时间 3
个因素 ,每个因素各为 3 个水平 ,选取 L9(34)正交
设计表 ,实验因素水平见表 1。
表 1 回流提取法试验因素水平表
Tab 1 Facto r and level of o rthogonal design fo r reflux ing
pro cess
水平 因素
A 乙醇浓度/% B溶媒用量/倍 C提取时间/ h D空白
1 60 8 1.0
2 70 10 1.5
3 80 12 2.0
3.2 回流提取法工艺优选 准确称取淡竹粗粉
50.0 g ,分别根据表 1条件进行实验 ,为避免引入顺
序误差 ,用随机化方法决定实验顺序 ,每组实验平行
3份。所得提取液回收乙醇至无醇味 ,抽滤 ,注射用
水洗至 250 mL 量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,样品溶液
的制备方法和测定方法同上 ,分别精密吸取2.0 ,0.1
mL 来测定总氨基酸和愈创木酚含量 ,结果见表 2。
方差分析结果见表 3 ,表 4。
表 2 回流提取法正交试验方案及结果
Tab 2 Orthogonal design and analy sis on ex traction rate for total amino acid and guaiaco l
试验
因 素 测定结果
A B C D
总氨基酸
/mg·(100 g)-1
愈创木酚
/mg·(100 g)-1
1 1 1 1 1 152.694 26.853
2 1 2 2 2 266.583 28.054
3 1 3 3 3 275.472 41.581
4 2 1 2 3 248.250 20.767
5 2 2 3 1 328.250 33.054
6 2 3 1 2 193.250 19.682
7 3 1 3 2 177.694 28.597
8 3 2 1 3 141.583 18.171
9 3 3 2 1 192.417 24.953
总氨基酸 K 1 694.750 578.639 487.528 673.361
K 2 769.750 736.417 707.250 637.528
K 3 511.694 661.139 781.417 665.306
R 258.056 157.778 293.889 35.833
愈创木酚 K 1 96.488 76.217 64.705 84.860
K 2 73.504 79.279 73.775 76.333
K 3 71.721 86.217 103.233 80.519
R 24.767 10.000 38.527 8.527
表 3 总氨基酸含量方差分析表
Tab 3 Ana ly sis o f variance fo r to tal amino acid
方差来源 方差平方和 自由度 均方 F值
A 11 747.46 2 5 873.73 49.86a
B 4 151.88 2 2 075.94 17.62
C 15 572.17 2 7 786.09 66.09b
D 235.62 2 117.81 1.00
注:与空白(D)比较 ,将空白作为误差 , a P<0.05 , bP<0.01
表 4 愈创木酚含量方差分析表
Tab 4 Ana ly sis o f variance fo r guaiaco l
方差来源 方差平方和 自由度 均方 F值
A 127.21 2 63.61 10.50a
B 17.50 2 8.75 1.44
C 270.47 2 135.24 22.32 b
D 12.12 2 6.06 1.00
注:F 0.05(2 , 2)=19.00 , F0.01(2 , 2)=99.00 ,与空白(D)比较, 将空白作
为误差 , a P<0.05 , bP<0.01
4 结果与讨论
由表 2的 R 值分析 ,以总氨基酸含量为考察指
标 ,各因素对实验结果的影响顺序依次为 C>A >
B ,回流提取的时间(C)具有显著影响 ,乙醇浓度
(A)次之 ,溶媒用量(B)的影响最小;以愈创木酚含
量为考察指标 ,各因素对实验结果的影响顺序依次
也为C>A>B 。根据方差分析结果可知 ,因素A 与
因素 C 对总氨基酸含量的影响差异有显著性 ,从直
观分析比较 A 2较 A 1 、A 3好 ,C3较 C1 、C2好 ,因素 B
可任选一水平;因素 C 对愈创木酚含量的影响差异
有显著性 ,从直观分析比较C3较C1 、C2好 ,但因素A
对总氨基酸含量的影响差异有显著性 ,故因素 A 可
选水平 2。因素 B可任选一水平 ,结合实际选 B2 。
回流提取法的最佳方案为 A 2B2 C3 ,该方案在正交表
中存在 ,实验表明该方案所得总氨基酸和愈创木酚
含量最高 ,故可确定回流提取的最佳工艺为 70%乙
醇提取 2次 ,溶媒用量分别为 10倍 ,提取时间分别
为 2 h 。
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参考文献:
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[ J] .时珍国医国药 , 2006 , 18(3):631-632.
[ 9] 熊艳 ,吴学文 ,蒋孟良.HPLC测定鲜竹沥中愈创木酚的含量
[ J] .中国中药杂志 , 2007 , 32(8):747-748.
[ 10] 熊艳 ,吴学文 ,蒋孟良.淡竹沥四种不同制备工艺的比较研究
[ J] .中成药 , 2007 , 28(12):1825-1826.
[收稿日期] 2007-09-24
[ 基金项目] 武汉市科技攻关计划项目《中药新药鱼腥草鼻喷雾剂的临床前研究》 (编号:20046001050) [ 作者简介] 汤杰 ,男 , 硕士 ,主管药
师 ,电话:027-83649095 , E-m ail:tangjie100@sina.com
鱼腥草鼻用喷雾剂拮抗大鼠实验性鼻炎的药效学研究
汤杰 ,方建国 ,万进 ,施春阳 ,王文清 (华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部 , 湖北 武汉 430030)
[ 摘要] 目的:观察鱼腥草鼻用喷雾剂对克雷伯肺炎杆菌所致实验性大鼠鼻炎的影响及其抗炎活性。方法:以克雷伯肺炎杆
菌感染大鼠鼻腔 ,造成鼻黏膜炎症;采用醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加 , 二甲苯致小鼠耳廓肿胀 、大鼠棉球肉芽肿试
验 ,观察其抗炎活性。结果:鱼腥草鼻用喷雾剂能够有效改善鼻炎动物的一般状态及鼻黏膜局部状况;对鼻炎的病理学改变
具有抑制修复作用及有效控制致病细菌的局灶性感染。药物能够抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加 , 明显减轻二
甲苯所致小鼠耳廓肿胀的程度 ,有效控制大鼠棉球肉芽组织的炎性生长。结论:鱼腥草鼻用喷雾剂具有显著的抗炎活性 ,具
备拮抗急 、慢性鼻炎的药效学基础。
[ 关键词] 鱼腥草鼻用喷雾剂;鼻炎模型;抗炎
[中图分类号] R285.5 [ 文献标识码] A [文章编号] 1001-5213(2008)15-1255-04
Pharmacodynamic study on effect of Yuxingcao nasal spray on pathological model of rhinitis in
rats
TANG Jie , FANG Jian-guo , WAN Jin , SHI Chun-yang ,WANG Wen-qing (Depa rtment of Pharmacy , Tong ji
Hospital A ffiliated to the Tongji Medical College , Huazhong University of Science and Technolog y , Hubei Wuhan 430030 , Chi-
na)
ABSTRACT:OBJECTIVE To obse rve effect of Yuxingcao na sal spray on pa tho log ical model of rhinitis in rats induced by K leb-
siella pneumoniae and its anti-inflamma to ry activity.METHODS A nasal mucosa inflamma tion mode l w as set up by dropping
suspension o f Klebsiella pneumoniae into ra ts na sal cavity.Effects of Yuxingcao nasal spray on the inflammation w ere ob-
serv ed w ith the me thod of measuring capillary pe rmeability induced by intr aperitoneal injection with acetic acid , swelling of the
pinna in mice induced by xy lene and gr anuloma in rats induced by transplanting co tton ball into rats inguina.RESULTS I t
could ma rkedly im prove the syndrome of rats rhinitis and patho lo gical change including neutrophil leucocy te penet ration in mu-
cous membrane and gland pro lifer ation after administe red to rats nasal cavity.The fo cal infection induced by K lebsiella pneu-
moniae was lessened through bacteriological ex aminations.I t could inhibit three experimental animal inflammato ry model above
mentioned.CONCLUSION It is shown that Yuxingcao na sal spray has a remarkable anti-inflamma to ry activity , it can be used
for treating acute and chronic rhinitis in clinical application.
KEY WORDS:Yuxingcao nasal spray;pathological model o f rhinitis;anti-inflammatory
鼻炎是一类由病毒或细菌引起的鼻黏膜感染性
炎症 ,属于中医伤风鼻塞 、鼻窒等病症范畴 ,多系感
受风邪 、气滞血淤 、邪毒留恋所致 ,临床症状表现为
鼻黏膜充血 、鼻分泌物增多 、鼻塞 ,是困扰人类的一
类顽症[ 1] 。根据鱼腥草的有关药理作用及理化性
质 ,在鱼腥草注射液雾化喷鼻治疗方法的基础上[ 2] ,
·1255·中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 15期 Chin H osp Pharm J , 2008 Aug , Vol 28 , No.15