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(2012-10-10 收稿 2012-12-19 修回)
基金项目:国家自然科学基金项目(编号:81173501) ;黑龙江中医药大学博士创新基金项目(编号:B201003)
通讯作者:匡海学 Tel:(0451)82110803 E-mail:hxkuang@ hotmail． com
接骨木根皮促进骨折愈合的初步药理机制研究
韩华 杨炳友 夏永刚 王秋红 匡海学 (黑龙江中医药大学北药基础与应用研究教育部重点实验室，黑龙江省中
药及天然药物药效物质基础研究重点实验室 哈尔滨 150040)
摘 要 目的:观察接骨木根皮促进骨折愈合的作用机制。方法:采用家兔桡骨骨折模型，观察接骨木对骨折区骨密度
( BMD) 、骨矿含量( BMC) 及骨痂面积( Area) 及血清钙、磷的影响。结果:同模型组比较，接骨木各剂量组骨折区 BMD、BMC
和 Area均处于较高水平，其中接骨木中剂量组 BMC和 Area与模型组比较，差异有统计学意义( P ＜ 0． 05) ;接骨木中剂量组骨
化的成骨细胞胞核大而圆，内有丰富的粗面内质网和线粒体。给药 24 和 36 d，接骨木各组血清钙水平与模型组比较，差异均
有统计学意义( P ＜ 0． 05或0． 01) ; 用药 24 d，接骨木中剂量组血清磷与模型组比较，差异有统计学意义( P ＜ 0． 05) ;接骨木各剂
量组血清钙磷乘积与模型组比较，差异均无统计学意义。结论:接骨木通过促进胶原合成和无机盐的沉积，提高骨痂质量，达
到促进骨折愈合的作用。
关键词 接骨木;骨密度;骨矿含量;骨痂面积;钙; 磷
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2013)04-0482-04
Pharmacological Mechanism of Sambucus williamsii Hance in Promoting Fracture Healing
Han Hua，Yang Bingyou，Xia Yonggang，Wang Qiuhong，Kuang Haixue (Key laboratory of Chinese Materia Medica，Heilongjiang U-
niversity of Chinese Medicine;Ministry of Education，Heilongjiang Key Laboratory of TCM Pharmacodynamic Material Bases，Harbin
150040，China)
ABSTRACT Objective:To study the pharmacological mechanism of Sambucus williamsii Hance in promoting fracture healing．
Method:Rabbit models of radius fracture were used to observe the effect of Sambucus williamsii Hance on BMD，BMC，fracture area
and serum Ca，P and Ca × P． Result:BMD，BMC and fracture area in the Sambucus williamsii Hance group were higher than those in
the model group，and there were significant differences in BMC and fracture area (P ＜ 0． 05)． After 24-and 36-day treatment，signifi-
cant difference in serum Ca level was shown between the Sambucus williamsii Hance group and the model group (P ＜ 0． 05 or P ＜
0． 01)． After 24-day medication，significant difference in serum P level was found between the two groups (P ＜ 0． 05)． Serum Ca × P
level had no statistical significance bwtween the two groups． Conclusion:The promoting fracture healing of Sambucus williamsii Hance
are related with the enhancemnet of collagen synthesis and inorganic salt deposition to improve the quality of callus．
KEY WORDS Sambucus williamsii Hance;BMD;BMC;Fracture area;Ca;P
接骨木(Sambucus williamsii Hance)为忍冬科
(Caprifoliaceae)接骨木属(Sambucus linn)植物，又名
续骨木、大接骨丹、公道老、扦扦活、马尿骚等［1，2］。接
骨木民间用药由来已久，大量临床观察表明，其治疗
骨折有疗程短、恢复功能快、疗效高的特点。前期实
验已确定接骨木根皮促进骨折愈合的有效部位主要
为环烯醚萜和木脂素类成分［3，4］，同时采用 HPLC法，
以莫诺苷为指标成分，测得环烯醚萜类成分占该有效
部位的 50%以上。为了进一步探讨该有效部位在骨
折愈合中的作用，从动物实验角度设计了本实验，旨
在探讨接骨木根皮促进骨折愈合的作用机制，从而为
接骨木更广泛的应用于临床提供理论依据。
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1 材料与方法
1． 1 动物
新西兰大白兔，雌雄各半，体质量2． 0 ～ 2． 5 kg，
合格证号 SYXK(黑)20020018 号，由黑龙江中医药
大学实验动物中心提供。
1． 2 试药
接骨木有效部位(黑龙江中医药大学药学院中
药化学教研室自行制备，1 g相当于29． 4 g生药) ;跌
打丸(哈药集团世一堂制药厂，批号:0505129) ;戊
巴比妥钠(上海化学试剂公司，批号:F971104)。
1． 3 仪器
A-6 型半自动生化分析测定仪(北京松上技术
有限公司) ;TGL-16 型离心机(上海医疗器械厂) ;
S648 型恒温水浴箱(国营创新医疗器械厂) ;DPX-
MD型双能 X线骨密度仪(美国 GE公司)。
1． 4 动物模型制作
新西兰大白兔适应性喂养 1 周。戊巴比妥钠
(30 mg·kg －1)耳缘静脉麻醉。左前肢硫化钠脱
毛，常规碘酒、酒精消毒及铺巾。无菌条件下，切开
皮肤、筋膜，沿肌间隙钝性分离肌肉达桡骨，剥离桡
骨中下段，用锯片造成宽度约 2 mm，深度为桡骨直
径 1 /2 的不完全性骨折。生理盐水冲洗后，缝合皮
下组织及皮肤，切口用无菌纱布包扎。
1． 5 分组及给药方法
造模新西兰大白兔 45 只，体质量2． 0 ～ 2． 5 kg，
雌雄各半，随机分为 5 组，每组 9 只，分别为模型对
照组、阳性药跌打丸组(0． 28 g·kg －1)、接骨木低
(0． 17 g·kg －1)、中(0． 34 g·kg －1)、高(0． 68 g·
kg －1)三个剂量组。另有 8 只为空白对照组，未造
模。所有大白兔单笼饲养，每日喂养两次。阳性药
和接骨木各剂量组先给加药饲料，待吃完后再给正
常饲料;空白对照组和模型对照组两次均给正常饲
料。用药组于手术第 2 日开始连续给药 36 d。
1． 6 观测指标
1． 6． 1 骨密度、骨矿含量及骨痂面积 末次给药
后，手术组每组取 9 只，气栓处死，以骨折处为中心
取桡骨段 3 cm，剔除其上的软组织，用骨密度测定
仪测定骨密度(BMD)、骨矿含量(BMC)及骨痂面积
(Area)。
1． 6． 2 钙、磷及钙磷乘积 分别于药后 12，24，36 d
耳缘静脉取血，离心取血清，－ 20℃保存，用于血清
Ca、P的测定。
1． 6． 3 电镜观察 末次给药后，手术组每组取 2
只，气栓处死，以骨折处为中心取桡骨段 1 cm，剔除
其上的软组织，固定于 3%戊二醛中，用于电镜观
察。
2 结果
2． 1 接骨木对骨密度、骨矿含量及骨痂面积的影响
结果见表 1。同模型组比较，接骨木各剂量组
骨折区 BMD 均处于较高水平，但差异无统计学意
义;BMC 和 Area 均处于较高水平，其中中剂量组
BMC和 Area差异有统计学意义意义(P ＜ 0． 05) ，与
空白组基本相同。
2． 2 接骨木对血清 Ca的影响
结果见表 2。模型组、阳性组及接骨木各剂量
组血清 Ca水平在用药后一直处于较低水平。与模
型组比较，各组用药 12 d，即骨折愈合初期，血清 Ca
差异无统计学意义;用药 24 和 36 d，即骨折愈合中、
末期，接骨木各组血清 Ca 水平与模型组比较，差异
有统计学意义(P ＜ 0． 05或0． 01)。
表 1 接骨木对骨密度、骨矿含量及骨痂面积的影响(珋x ± s)
组 别 例数 剂量(g·kg －1) BMD(gms·cm －2) BMC(grams) Area(cm2)
空白对照组 8 － 0． 226 ± 0． 019 0． 259 ± 0． 054 1． 125 ± 0． 248
模型对照组 9 － 0． 196 ± 0． 035 0． 155 ± 0． 089 0． 738 ± 0． 368
阳性药跌打丸组 9 0． 28 0． 217 ± 0． 021 0． 196 ± 0． 083 0． 882 ± 0． 324
接骨木低剂量组 8 0． 17 0． 222 ± 0． 002 0． 188 ± 0． 084 0． 825 ± 0． 283
接骨木中剂量组 9 0． 34 0． 224 ± 0． 025 0． 251 ± 0． 128a 1． 110 ± 0． 240a
接骨木高剂量组 9 0． 68 0． 219 ± 0． 016 0． 202 ± 0． 065 0． 918 ± 0． 265
注:与模型组比较，aP ＜ 0． 05。
2． 3 接骨木对血清 P的影响
结果见表 3。模型组、阳性组及接骨木各剂量
组血清 P 在用药后一直处于较高水平。同模型组
比较，各组用药 12 和 36 d，血清 P 水平比较差异无
统计学意义;用药 24 d，接骨木中剂量组血清 P与模
型组比较，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05)。
2． 4 接骨木对血清 Ca × P的影响
结果见表 4。同模型组比较，各组血清 Ca × P
在各个时期差异无统计学意义。
2． 5 电镜观察结果
接骨木高、中剂量组:骨化的成骨细胞胞核大而
圆(见图 1A)。成骨细胞内有丰富的粗面内质网和
线粒体，细胞内有较致密的骨胶原，并可见规则的细
胞突起(见图 1B、图 1C)。
接骨木低剂量组和阳性组:成骨细胞内粗面内
质网与线粒体不尽丰富(见图2A) ，部分骨化的成
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中国药师 2013 年第 16 卷第 4 期 China Pharmacist 2013，Vol． 16 No． 4
表 2 接骨木对血清 Ca的影响(珋x ± s)
组别 例数
剂量
(g·kg －1)
Ca(mmol·L －1)
12d 24d 36d
空白
对照组
8 － 3． 65 ±0． 94 3． 60 ±0． 85 3． 36 ±0． 32
模型
对照组
9 － 3． 46 ±1． 50 3． 28 ±0． 75 3． 22 ±0． 41
阳性药跌
打丸组
9 0． 28 3． 34 ±0． 63 2． 94 ±1． 42 2． 98 ±0． 38
接骨木低
剂量组
8 0． 17 3． 33 ±0． 89 2． 55 ±0． 47a 2． 67 ±0． 33a
接骨木中
剂量组
9 0． 34 2． 38 ±0． 93 2． 34 ±0． 86a 2． 31 ±0． 49b
接骨木高
剂量组
9 0． 68 2． 72 ±0． 61 2． 36 ±0． 69a 2． 45 ±0． 52a
注:与模型组比较，aP ＜0． 05，bP ＜0． 01。
表 3 接骨木对血清 P的影响(珋x ± s)
组别 例数
剂量
(g·kg －1)
P(mmol·L －1)
12d 24d 36d
空白
对照组
8 － 1． 71 ±0． 36 1． 62 ±0． 32a 1． 63 ±0． 32a
模型
对照组
9 － 1． 84 ±0． 53 1． 93 ±0． 23 1． 99 ±0． 26
阳性药跌
打丸组
9 0． 28 1． 91 ±0． 48 2． 10 ±0． 37 2． 15 ±0． 41
接骨木低
剂量组
8 0． 17 1． 74 ±0． 37 1． 99 ±0． 18 1． 66 ±0． 20
接骨木中
剂量组
9 0． 34 2． 03 ±0． 60 2． 28 ±0． 27a 2． 39 ±0． 55
接骨木高
剂量组
9 0． 68 1． 95 ±0． 40 2． 11 ±0． 61 2． 23 ±0． 37
注:与模型组比较，aP ＜0． 05。
表 3 接骨木对血清 P的影响(珋x ± s)
组别 例数
剂量
(g·kg －1)
Ca × P
12d 24d 36d
空白
对照组
8 － 6． 24 ±1． 24 5． 83 ±1． 27 5． 40 ±1． 42
模型
对照组
9 － 6． 37 ±0． 80 6． 33 ±1． 17 6． 41 ±1． 11
阳性药跌
打丸组
9 0． 28 6． 37 ±1． 30 6． 17 ±1． 53 6． 41 ±1． 16
接骨木低
剂量组
8 0． 17 5． 79 ±1． 33 5． 07 ±1． 08 4． 93 ±1． 07
接骨木中
剂量组
9 0． 34 5． 26 ±1． 56 5． 34 ±1． 23 5． 52 ±1． 27
接骨木高
剂量组
9 0． 68 5． 30 ±1． 24 5． 30 ±1． 42 5． 46 ±1． 19
骨细胞周围偶有骨陷窝(见图 2B)。
模型组:成纤维细胞内粗面内质网丰富(见图
3A) ;大量成纤维细胞周围可见丰富胶原纤维，偶见
淋巴细胞(见图 3B) ;可见骨细胞因缺乏营养而死
亡，只留下骨陷窝(见图 3C)。
3 讨论
骨折愈合是一个复杂的过程，经历胶原合成，胶
原纤维钙化、骨化等过程，最终形成一个具有生物力
学特性的骨组织。骨折断端的新骨组织必须恢复到
足够结构强度才能去承担肢体负重载荷［5］。新骨组
织的机械强度与基质钙化的程度密切相关，其钙化程
度则以骨的矿化程度来衡量。因此，骨的矿化程度便
作为评价新骨质和量的重要标准之一。骨折区 Area、
A．接骨木高、中剂量组 400 × B．接骨木高、中剂量组 400 ×
C．接骨木高、中剂量组 400 ×
图 1 接骨木高、中剂量组电图
A．接骨木低剂量组和阳性组 400 ×
B．接骨木低剂量组和阳性组 400 ×
图 2 接骨木低剂量组和阳性组电镜图
A．模型组 400 × B．模型组 400 × C．模型组 400 ×
图 3 模型组电镜图
BMC、BMD可定量评价骨折区的骨痂面积、骨矿含
量、骨密度的情况，客观地反映了骨痂的质量［6，7］。本
次实验观察到接骨木各剂量组尤其是中剂量组 BMC
和 Area与模型组比较差异有统计学意义(P ＜0． 05) ，
与空白组水平相当。提示接骨木能促进胶原合成和
无机盐的沉积，迅速提高骨痂质量。
骨的生长、更新及修复均与钙和磷的代谢有密切
关系，人体绝大部分钙磷分布于骨中，其存在形式主
要为羟磷灰石结晶，少量为无定形的磷酸氢钙，一般
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将以上两部分统称骨盐，它决定着骨的硬度。骨盐沉
积依赖于成骨细胞产生的 ALP 和 BGP 的调节，也受
体液中 Ca2 +和 PO4
3 －浓度的影响。因此研究 Ca2 +和
PO4
3 －在骨折愈合过程中的代谢具有重要意义。一般
的说，保持血钙和血磷水平的基本恒定是维持人体基
本生理功能，骨组织正常生长、更新所必备的条
件［8、9］。本次实验观察到用药 24和 36 d，即骨折愈合
中、末期，接骨木各组血清 Ca水平与模型组比较差异
有统计学意义(P ＜0． 05或0． 01) ;用药 24 d，接骨木中
剂量组血清 P与模型组比较差异有统计学意义(P ＜
0． 05) ;血清钙磷的乘积则处于基本恒定的水平，与空
白组比较差异无统计学意义。提示接骨木能降低血
钙，促进钙盐的沉积，并能升高血磷，使钙磷乘积保持
恒定，对全身钙磷平衡无负效应。
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(2012-09-10 收稿 2013-01-09 修回)
通讯作者:贺长斌 Tel:15072297748 E-mail:524944326@ qq． com
化积方胶囊抗肿瘤活性研究
李林 贺长斌 程慧 付盈盈 司应明 (湖北中医药大学附属襄阳市中医医院 湖北襄阳 441000)
摘 要 目的:研究化积方胶囊体内外抗肿瘤活性。方法:采用 MTT法观察化积方对 S180细胞生长抑制情况;鼠肝癌 H22细
胞株接种小鼠体内观察化积方对肿瘤抑制率和对小鼠的体质量抑制率;流式细胞仪定量检测其细胞周期和凋亡发生率的影
响。结果:10，100，500 μg·ml －1化积方对小鼠 S180肿瘤细胞的增殖抑制率( % ) 分别为23． 44，40． 35，48． 79 ( P ＜ 0． 05) ，小鼠
S180细胞的半数抑制浓度( IC50 ) 为( 0． 554 ± 0． 027) mg·ml
－1 ; 5，15，45 mg·kg －1·d －1化积方均对 H22细胞产生了抑制作用，抑
制作用( % ) 分别为26． 94，48． 34，68． 27 ( P ＜ 0． 05 ) 。10，100，500 μg·ml －1的化积方给药组的细胞凋亡率分别为5． 77%，
12． 03%和15． 48%，均明显高于阴性对照组，两组差异有统计学意义( P ＜ 0． 05) 。结论:化积方胶囊具有抗肿瘤作用，这一作
用可能与促进肿瘤细胞凋亡有密切联系。
关键词 化积方胶囊;抗肿瘤;细胞凋亡
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2013)04-0485-04
Antitumor Activities of Huajifang Capsules in vitro and in vivo
Li Lin，He Changbin，Cheng Hui，Fu Yingying，Si Yingming (TCM Hospital of Xiangyang City Affiliated to Hubei University of Tradi-
tional Chinese Medicine，Hubei Xiangyang 441000，China)
ABSTRACT Objective:To study the antitumor activities of Huajifang capsules in vitro and in vivo． Method:The inhibition of Hua-
jifang capsules on the S180 cells growth was observed by MTT． The tumor inhibition and weight suppression ratio of Huajifang capsules
on the growth of xenograft H22 cells were observed in vivo． The cell cycle and apoptosis after the intervention was detected quantitatively
using a flow ELISA． Result:The S180 cell inhibition rate (%)of Huajifang capsules with the dose of 10，100 and 500 μg·ml
－1 was
23． 44，40． 35 and 48． 79(P ＜ 0． 05) ，respectively． IC50 of S180 cells was(0． 554 ± 0． 027)mg·ml
－1 ． The H22 cell inhibition rate
(%)of the capsules with the dose of 5，15 and 45 mg·kg －1·d －1 was 26． 94，48． 34 and 68． 27(P ＜ 0． 05) ，respectively． The cell
apoptosis rate treated with the capsules with the dose of 10，100 and 500 μg·ml －1 was 5． 77%，12． 03% and 15． 48%，respectively，
which were significantly higher than those in the negative control group (P ＜ 0． 05)． Conclusion:Huajifang capsules can inhibit pro-
liferation and promote apoptosis of the tumor cells．
KEY WORDS Huajifang capsules;Anti-tumor;Apoptosis
肿瘤是严重威胁人类健康的一类疾病，肿瘤学 一直以来都是医学研究的重点难点。化学合成药物
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中国药师 2013 年第 16 卷第 4 期 China Pharmacist 2013，Vol． 16 No． 4