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中药黄金菊汤剂君药的6种抗炎药效组分含量测定



全 文 :中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
中药黄金菊汤剂君药的 6种抗炎药效组分含量测定 *
张春晖 张贵君 杨晶凡 崔相微
北京中医药大学中药学院, 北京 100102
【摘 要】: 目的: 分析中药黄金菊君药野菊花中 6 种抗炎组分含量。 方法: 反相高效液相色谱法 (RP-HPLC)。 结果: 分析得到了君
药中 6 种抗炎组分含量, 即绿原酸, 木犀草素, 木犀草苷, 蒙花苷, 3,5 二咖啡酰奎宁酸。 结论: 野菊花在黄金菊汤剂中的抗炎药效组分为
绿原酸-咖啡酸-木犀草素-木犀草苷-蒙花苷-3,5 二咖啡酰奎宁酸 (10:1:1:4:17:6), 为组分中药的发现和中药药效组分质量评价方法的建立
提供了科学基础数据。
【关键词】: 野菊花; 药效组分; RP-HPLC; 组分中药
【中图分类号】 R284.1 【文献标识码】 A 【文章编号】 1007-8517 (2009) 07-0001-03
The analysis of principal drug active compositions alignment in HuangJinju decoctions
Zhang Chun-hui,Zhang Gui-jun*,Yang Jingfan, Cui Xiang-wei
(School of Chinese Pharmacy of Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102)
Abstract Objective: Assay the active compositions of Chrysanthemum indicum L in HangJinju decoctions. [Methods] Reversed phase high-
performance liquid chromatography (RP-HPLC) . [ Results] The six active composition are Chlorogenic acid,Caffeic acid,Luteolin,Luteoloside,
Buddleoside,3,5-Dicaffeoylquinic acid. [Conclusions] The ratio of active composition is10:1:1:4:17:6 .The active components alignment of HangJinju
decoctions can be used as the science index of quality control.
Key words: Chrysanthemum indicum L.; RP-HPLC ; active components alignment
中药黄金菊是由黄芩、 野菊花、 金莲花组成, 功效清
热解毒。 临床上治疗上呼吸道感染疗效确切。 君药野菊花
清热解毒、 泻火明目, 佐金莲花、 黄芩合用, 共奏降火润
燥、 清热解毒、 利咽止痛之效。 对于复方制剂的质量控制
不应从单一的化学成分入手, 而应对起效的全成分进行控
制, 即对其药效组分进行控制, 药效组分在传统复方中具
有量和比例的关系 [1-2], 笔者采用高效液相色谱法 (RP-
HPLC 法) 测定了该制剂君药抗炎药效组分的含量及比例关
系, 揭示野菊花在黄金菊汤剂中发挥抗炎作用的物质基础,
现报道如下。
1 仪器与材料
岛津 LD-2100HPLC。
对照品 : 绿原酸 Chlorogenic acid、 咖啡酸 Caffeic
acid、 木犀草素 Luteolin、 木犀草苷 Luteoloside、 蒙花苷
Buddleoside、 3,5 二咖啡酰奎宁酸 3,5-Dicaffeoylquinic acid
(购自中国药品生物制品检定所)。
供试品: 黄芩, 野菊花, 金莲花 (购自安国祁新饮片
厂) ,经张贵君教授鉴定依次为唇形科植物黄芩 Scutellaria
baicalensisGeorgi 的干燥根; 菊科植物野菊 Chrysanthemum
indicum L.的干燥头状花序 ; 毛茛科植物金莲花 lius ch
inensis Bunge 的干燥花。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱 :agela Venusil HPLC Clumns 型号 (250mm×
4.6mm,5μm);
流动相及检测波长:
基金项目: 广东省教育部产学研项目, 编号: 03032
* 通讯作者: 张贵君, 教授/博导, 北京中医药大学中药学院, 研究方向: 中药鉴定方法学; 组分中药及中药药效组分质量标准体系研究。
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中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
绿原酸、 咖啡酸流动相: 0.4%磷酸-乙腈 (88: 12) 检
测波长: 327 nm;见图 1。
蒙花苷、 3,5 二咖啡酰奎宁酸流动相: 0.5%磷酸-乙腈
(78: 22) 检测波长: 334nm; 见图 2。
木犀草素流动相: 四氢呋喃-甲醇-1.5%磷酸 (27: 4:
69) 检测波长: 353 nm;见图 3。
木犀草苷 0.04%磷酸-乙腈 (81: 19) 检测波长: 350
nm; 见图 4。
(以上流速均为 1.0 ml/min)
柱温: 室温 (25℃) 理论板数按各对照品峰计算均大
于 3 000.
2.2 标准品溶液的制备
分别精密称取绿原酸、 咖啡酸、 木犀草素、 木犀草苷、
蒙花苷、 3, 5 二咖啡酰奎宁酸对照品适量 ,分别置 10ml 量
瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,作为对照品溶液,绿原酸、 咖
啡酸、 木犀草素、 木犀草苷、 蒙花苷、 3, 5 二咖啡酰奎宁
酸 其 中 的 浓 度 分 别 为 0.0434、 0.0216、 0.066、 0.0408、
0.0256、 0.0262mg/ml。
2.3 供试品溶液的制备
取黄金菊 (黄芩 3g, 野菊花 6g, 金莲花 5g), 加 12 倍
量的水, 浸泡 30min, 先煎黄芩, 水沸后煎煮 15min, 再和
余药共煎至 30min,滤过, 残渣加 12 倍量的水, 水沸后再煎
20min,趁热滤过; 合并两次滤液, 浓缩, 冷至常温, 加水定
容至含 100ml 的容量瓶中。
精密吸取 1.0ml 置 10ml 量瓶中,用水稀释至刻度,作为蒙图 4 黄金菊汤剂中对木犀草苷测定的相关 HPLC 图
A:黄金菊水煎液 HPLC 图 B:咖啡酸标准品 HPLC 图 C:绿原酸标准品 HPLC 图
图 1 黄金菊汤剂中对绿原酸、 咖啡酸测定的相关 HPLC 图
A:黄金菊水煎液 HPLC 图 B:蒙花苷标准品 HPLC 图 C:3,5-二咖啡酰奎宁酸标准品 HPLC 图
图 2 黄金菊汤剂中对蒙花苷、 3,5-二咖啡酰奎宁酸测定的相关 HPLC 图
A:黄金菊水煎液 HPLC 图
B:木犀草素标准品 HPLC 图
图 3 黄金菊汤剂中对木犀草素测定的相关 HPLC 图
A:黄金菊水煎液 HPLC 图
B:木犀草苷标准品 HPLC 图
药 物 研 究
The medicine study2· ·
中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
花苷, 3, 5-二咖啡酰奎宁酸供试品溶液。 精密吸取 2.0ml
置 10ml 量瓶中, 绿原酸、 咖啡酸、 木犀草素、 木犀草苷、
用水稀释至刻度, 作为供试品溶液。
2.4 标准曲线绘制
精密吸取各对照品溶液进样不同体积 ,按各成分的色谱
条件测定峰面积 (RSD), 以峰面积积分值为纵坐标 (A,),
对照品进样量 (μg) 为横坐标 (C, x), 进行线性回归, 得回
归方程:
绿原酸 y=2291.1x-33.407, R2=0.9999 (n=5); 线性范围
0.34688-0.69376μg;
咖啡酸 y=5181.5x-2.822; R2=0.9998 (n=5); 线性范围
0.0216-0.108μg;
3, 5-二咖啡酰奎宁酸 y=2432.9x+5.792, R2=0.9998 (n=
5); 线性范围 0.0524-0.262μg;
木犀草素 y=2973.9x+3.3461, R2=0.9996 (n=5); 线性范
围 0.066-0.33μg;
木犀草苷 y=2679.1x-2.9265, R2=0.9999 (n=5); 线性范
围 0.0408-0.204μg;
蒙花苷 y=2261x-4.8734, R2=0.9995 (n=5) ;线性范围
0.2048-0.4096μg;
2.5 精密度实验
分别精密吸取蒙花苷, 3, 5-二咖啡酰奎宁酸 、 绿原
酸、 咖啡酸、 木犀草素、 木犀草苷对照品溶液, 连续进样 5
次, 按各成分的色谱条件测定峰面积, RSD 分别为 0.17%、
0.34%、 0.45%, 0.83%, 0.77%1.21%。
2.6 稳定性实验
精密吸取同一供试品溶液,间隔一定时间 (每 2h 进样 1
次,共测 5 次), 按各成分的色谱条件, 依照标准曲线测定方
法测定峰面积。 绿原酸, 蒙花苷, 3, 5-二咖啡酰奎宁酸、
咖啡酸 、 木犀草素 、 木犀草苷稳定性 RSD 分别为 1.04%,
0.92%,0.62%,0.64%,1.15%,0.57%。 在测定时间内 11 种成分
稳定性良好。
2.7 重现性实验
精密吸取同一供试品溶液, 按各成分的色谱条件, 依
照标准曲线测定方法连续测定 5 次, 以峰面积计算。 绿原
酸,蒙花苷, 3, 5-二咖啡酰奎宁酸、 咖啡酸、 木犀草素、 木
犀草苷重现性 RSD 分别为 0. 36%,1.14%,0.94%,0.58%,
0.89%,1.25%.表明本方法重现性良好。
2.8 样品含量测定
取金莲花、 野菊花、 黄芩, 按上述样品制备方法, 平
行制备 3 份样品按各成分的色谱条件, 依照标准曲线测定
方法测定峰面积,根据标准曲线计算各成分的含量。
精密吸取供试品溶液进样, 按各成分的色谱条件, 依
照标准曲线测定方法测定峰面积 ,根据标准曲线计算各成分
的含量。 测得绿原酸,咖啡酸、 木犀草素、 木犀草苷、 蒙花
苷 、 3, 5 二 咖 啡 酰 奎 宁 酸 含 量 分 别 为 : 0.0163% 、
0.0017%、 0.0019%、 0.0074%、 0.0292%、 0.0102%各药效
组分之间的比例关系为: 10:1:1:4:17:6。
2.9 加样回收实验
精密称取已知各成分含量的供试品溶液 5 份, 精密加
入对照品适量,按供试品溶液制备方法处理, 按各成分的色
谱条件, 依照标准曲线测定方法测定, 各成分的平均加样
回 收 率 分 别 为 100.12% 、 99.87% 、 99.24% 、 100.24% 、
99.98%、 100.68%、 有 RSD 值均<3%。
3 讨论
3.1 本课题也将单味药和复方在相同药量相同条件下同时
煎煮, 所得指标成分含量并不一致, 进一步解释说明多数
复方仅仅体现单味药的一种或几种功效特征。 配伍后的中
药在功效上有所侧重, 说明其组分发生了变化, 即量和质
的改变, 这就是复方功能和单味药功能存在差异的根本原
因。
3.2 方法学考察表明: 这些方法在较大范围内线性关系良好,
指标性成分含量均在线性范围之内; 所选用的各方法具有
较好的精确度、 稳定性、 重现性和回收率。 所得到的指标
性成分百分含量的比例关系, 为控制黄金菊汤的内在质量
提供了依据,打破了以一种成分的含量为质量控制的传统方
式。 指标性成分的比例关系制约着中药的疗效, 同时为黄
金菊汤的进一步研发提供了科学数据。 所选色谱条件对黄
金菊中各药效组分分离效果好 , 线性范围宽 , 灵敏度高 ,
适用于该制剂的含量测定。
3.3 中药是否符合用药要求, 是通过质量标准来控制的,
实现质量标准有效控制的经典方法是使用中药的标准物质
标化。 中药的标准物质是衡量中药质量的物质, 这类物质
是中药的本身、 具备中药疗效及本质特征, 是药效组分 ,
它具有高度的均匀性﹑量值的准确性﹑良好的稳定性, 它
可以准确地标化出中药质量的特征。
参考文献
[1] 张贵君.中药研究的误区思考与创新研发的新思路.中国中药杂志, 2007,6
(3) :26-27.
[2] 张贵君,罗容,王亦杰 .中药药效组分理论与中药组分学 .中药材, 2007,39
(2) :1-2.
(收稿日期: 2009.2.18)
药 物 研 究
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