全 文 ：高效液相色谱法测定接骨木茎叶果实中芦丁的含量*
胡彦武1，2，关颖丽1，2，张立威2，王朝辉3
(1．通化师范学院吉林省长白山药用植物研究重点实验室，通化 134002;2．通化师范学院制药与食品科学学院，
通化 134002;3．长春中医药大学针灸推拿学院，长春 130117)
摘 要 目的 测定接骨木茎、叶、果实等不同部位中芦丁的含量，为接骨木资源的合理开发和综合利用提供依据。
方法 采用 Agilent ZOＲBAX Eclipse XDB C18(150 mm ×4． 6 mm，5 μm)色谱柱，甲醇-0． 1%磷酸水溶液(45∶ 55)，柱温
25 ℃，流速为 0． 8 mL·min －1，检测波长为 360 nm。结果 芦丁在 0． 105 ～ 0． 525 μg 范围内呈良好的线性关系(r =
0． 999 6)，平均回收率 97． 86%，ＲSD = 0． 49%。测得接骨木茎、叶、果实中芦丁含量分别为 0． 171，0． 522，0． 165 mg·g －1。
结论 接骨木茎、叶、果实中均含有芦丁，但差异较大，以叶中芦丁含量最高。
关键词 接骨木;芦丁;色谱法，高效液相
中图分类号 Ｒ282． 71;Ｒ927． 2 文献标识码 B 文章编号 1004 － 0781(2014)09 － 1222 － 03
Content Determination of Ｒutin in Stems，Leaves，and Fruits of Sambucus williamsii
Hance by HPLC
HU Yan-wu1，2，GUAN Ying-li1，2，ZHANG Li-wei2，WANG Zhao-hui3(1． Key Laboratory of Changbai Mountain
Medicinal Plants Ｒesearch of Jilin，Tonghua Normal University，Tonghua 134002，China;2． College of
Pharmaceutics and Food Science，Tonghua Normal University，Tonghua 134002，China;3． College of
Acupuncture and Tuina，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China)
ABSTＲACT Objective To determine the content of rutin in fruits，stems，and leaves of Sambucus williamsii Hance，and
provide an essential reference for the exploitation and utilization of the resources． Methods The content of rutin was analyzed
on an Agilent ZOＲBAX Eclispse XDB C18 column(150 mm ×4． 6 mm，5 μm)． The mobile phase was methanol-0． 1% phosphoric
acid (45∶ 55)，the column temperature was set at 25 ℃，the flow rate was 0． 8 mL·min －1，and the detection wavelength was set
at 360 nm． Ｒesults The linear range of rutin was 0． 105 － 0． 525 μg (r = 0． 999 6)，the average recovery was 97． 86%，and
ＲSD was 0． 49% ． The content of rutin in stems，leaves，and fruits of Sambucus williamsii Hance was 0． 171，0． 522，and
0． 165 mg·g －1，respectively． Conclusion The stems，leaves and fruits of Sambucus williamsii Hance all contain rutin，but at
a significant different content level． The leaves contain the highest level of rutin．
KEY WOＲDS Sambucus williamsii Hance;Ｒutin;Chromatography，high performance liquid
接骨木(Sambucus williamsii Hance)为忍冬科接骨
木属植物，收载于《本草纲目》中，别名马尿骚、公道
老、续骨草，其野生资源丰富，广泛分布于我国东北、华
北、西北、西南等地，具有祛风利湿、舒筋活血之功效，
民间多用于风湿性关节炎、骨折、跌打损伤、痛风、大骨
节病、水肿、荨麻疹等疾病的治疗。而有关接骨木的确
切入药部位，说法不一，有资料记载接骨木以茎、叶入
药［1］，亦有资料称其全株皆可入药［2］。目前国内学者
已对接骨木抗炎、促进骨折愈合等药理作用进行报道，
收稿日期 2013 － 10 － 14 修回日期 2014 － 01 － 17
基金项目 * 吉林省教育厅“十一五”科学技术研究项目
(2008374)
作者简介 胡彦武(1980 －)，男，吉林梨树人，副教授，在
读博士，研究方向:生药有效成分的分离鉴定及生物活性。电
话:(0)13844545298，E-mail:hywcz@ 163． com。
通讯作者 王朝辉(1973 －)，女，吉林长春人，副教授，硕
士生导师，博士，研究方向:中医基础及中药新药。电话:0431
－ 86045460，E-mail:wzhqiwei@ 126． com。
但与其功效相关的物质成分，笔者未见详实报道。考
虑到忍冬科其他植物中黄酮类成分含量较高，为此，本
实验以长白山区野生接骨木茎、叶、果实等不同部位为
实验材料，采用超声提取法对其所含芦丁成分进行提
取，并以高效液相色谱(HPLC)法进行含量测定，以期
了解接骨木不同药用部位中芦丁的含量差异，为探析
接骨木中黄酮类成分的含量、筛选接骨木最佳入药部
位、深入研究接骨木中与功效相关的物质基础提供参
考。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 Agilent1100 高效液相色谱仪(四元梯度
泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、紫外检测器);
KQ-200KDB型高功率数控超声波清洗机(昆山市超声
波仪器有限公司);Sartorius-CP225D型电子天平(北京
赛多利斯仪器有限公司)。
1． 2 试药 接骨木茎、叶、果实均采自通化师范学院
后山(长白山余脉)，经通化师范学院制药与食品科学
·2221· Herald of Medicine Vol. 33 No. 9 September 2014
学院于俊林教授鉴定为忍冬科接骨木属植物接骨木
(Sambucus williamsii)的干燥茎、叶及成熟果实;芦丁
对照品(中国食品药品检定研究院，批号:1097-
060918);甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限
公司，批号:20090817)，磷酸为分析纯(天津市科密欧
化学试剂有限公司，批号:20110721)，水为娃哈哈纯净
水(杭州娃哈哈集团有限公司，批号:20121030)。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 Agilent ZOＲBAX Eclipse XDB C18
(4． 6 mm × 150 mm，5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-
0． 1%磷酸溶液(45∶55);检测波长为 360 nm;流速
0． 8 mL·min －1;柱温 25 ℃;理论板数以芦丁峰计算应
不低于 2 000。
2． 2 对照品溶液制备 取 120 ℃干燥至恒重的芦丁
对照品 5． 25 mg，精密称定，置于 10 mL 量瓶中，用甲
醇溶解并定容，摇匀，即得质量浓度为 0． 525 g·L －1的
芦丁对照品溶液。
2． 3 供试品溶液制备 取干燥接骨木茎、叶、果实粉
末(过孔径 0． 425 mm 筛)各约 1． 0 g，精密称定，分别
置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 20 mL，浸泡
30 min，称定质量，温度 45 ℃、超声功率 100 W、频率
40 kHz条件下超声处理 20 min，放冷，再称定质量，用
甲醇补足减轻的质量，摇匀，经孔径 0． 45 μm 微孔滤
膜滤过，弃初滤液，取续滤液，即得。
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 线性关系考察 精密吸取“2． 2”项对照品溶
液 1 mL，置于 25 mL 量瓶中，甲醇定容，摇匀，吸取稀
释后的标准品溶液 5，10，15，20，25 μL，在“2． 1”项色
谱条件下进样并测定峰面积，并以对照品进样量为横
坐标(X)，峰面积积分值(Y)为纵坐标，进行线性回
归［3-5］，得回归方程为 Y = 2 011． 80X － 254． 80，r =
0． 999 6，结果表明芦丁对照品进样量在 0． 105 ～
0． 525 μg范围内线性关系良好。
2． 4． 2 精密度实验 精密吸取“2． 2”项对照品溶液
20 μL，在“2． 1”项下色谱条件下进样，连续进样 6 次，
并测定芦丁色谱峰面积，结果 ＲSD 为 1． 31%，提示仪
器精密度良好。
2． 4． 3 稳定性实验 精密吸取“2． 3”项下同一供试
品溶液(接骨木茎)20 μL，在“2． 1”项色谱条件下进
样，分别在 0，2，4，6，8，24 h 进样，记录芦丁色谱峰面
积，结果 ＲSD 为 1． 08%，表明供试品溶液中芦丁在
24 h内稳定。
2． 4． 4 重复性实验 取同一供试品(接骨木茎)，按
“2． 3”项方法制备供试品溶液，平行操作 6 份，按
“2． 1”项色谱条件测定芦丁含量，结果 ＲSD为1． 10%，
表明方法的重复性良好。
2． 4． 5 加样回收率实验 取同一已知芦丁含量供试
品(接骨木茎，芦丁含量为 0． 171 mg·g －1)6 份，每份
约 0． 5 g，精密称定，分别加入一定量的芦丁对照品溶
液(约为样品中芦丁含量的 1． 0 倍量)，按“2． 3”项方
法制备供试品溶液，在“2． 1”项色谱条件下进样，每次
进样 20 μL，对芦丁进行分析，计算加样回收率，结果
见表 1。芦丁平均回收率为 97． 86%，ＲSD 为 0． 49%，
表明芦丁的加样回收率良好。
表 1 芦丁加样回收率实验结果
Tab． 1 Ｒecovery results of rutin n = 6
取样量 /
g
原有量 加入量 测得量
mg
回收率 /
%
0． 501 0． 086 0． 086 0． 170 97． 67
0． 500 0． 086 0． 086 0． 170 97． 67
0． 500 0． 086 0． 086 0． 170 97． 67
0． 500 0． 086 0． 086 0． 170 97． 67
0． 500 0． 086 0． 086 0． 171 98． 84
0． 500 0． 086 0． 086 0． 170 97． 67
2． 5 样品含量测定 取接骨木茎、叶、果实粉末各约
1． 0 g，精密称定，同一样品平行操作 3 份，按“2． 3”项
方法制备样品溶液，在“2． 1”项色谱条件下进行检测，
接骨木茎、叶、果实中芦丁的含量分别为 0． 171，
0． 522，0． 165 mg·g －1，ＲSD 分别为 1． 14%，1． 09%，
1． 11%。
3 讨论
本实验采用超声提取法首次对接骨木茎、叶、果实
中芦丁进行提取，参照《中华人民共和国药典》2010 年
版中芦丁的定量检测方法，并结合预实验，针对待测组
分与其他组分分离情况及保留时间两项指标，对
HPLC测定芦丁的测定条件进行了摸索，最后将色谱
条件确定为:流动相为甲醇-0． 1%磷酸溶液(45∶55)，
流速为 0． 8 mL·min －1，检测波长 360 nm，柱温 25 ℃。
通过本实验研究得知，接骨木叶、茎、果实均含有
芦丁，以叶中芦丁含量最高，其次为茎，果实中芦丁含
量较少，如以芦丁作为质量评价依据，应主要以茎叶为
接骨木的入药部位。本研究结果印证了此前有资料报
道的以接骨木茎、叶为入药部位的观点，进而提示，接
骨木中含有的黄酮类成分可能是与祛风利湿、舒筋活
血等功效相关的重要物质基础。
参考文献
［1］ 严仲铠，李万林，刘桂荣，等．中国长白山药用植物彩色图
·3221·医药导报 2014 年 9 月第 33 卷第 9 期
志［M］．北京:人民卫生出版社，1997:394．
［2］ 南京中医药大学．中药大辞典［M］． 2 版．上海:上海科学
技术出版社，2006:2093．
［3］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)［M］． 北
京:中国医药科技出版社，2010:333．
［4］ 耿旦，马雯芳，甄汉深，等． ＲP-HPLC 测定桑椹中芦丁的
含量［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(14):63 － 65．
［5］ 李利华． HPLC 测定鱼腥草不同部位绿原酸和芦丁的含
量［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18(19):94 － 97．
DOI 10． 3870 /yydb． 2014． 09． 031
高效液相色谱法同时测定
补肾化瘀浸膏中淫羊藿苷及柚皮苷含量*
欧阳露1，2，夏勇2，夏鹏2，李洪亮1，2，汪选斌1，2
(1．湖北医药学院附属人民医院中药药理实验室，十堰 442000;2．湖北医药学院药学院，十堰 442000)
摘 要 目的 建立高效液相色谱法同时测定补肾化瘀浸膏中淫羊藿苷及柚皮苷含量。方法 C18柱(4． 6 mm ×
250 mm，5 μm)，以乙腈-磷酸溶液(0． 2%磷酸，pH = 2． 9)为流动相，梯度洗脱，流速 0． 8 mL·min －1，检测波长 269 nm，柱
温 30 ℃。结果 淫羊藿苷在 0． 3 ～ 3． 0 μg范围内线性关系良好(r = 0． 999 9)，加样回收率 105． 6%，ＲSD 为 0． 95%;柚
皮苷在 0． 12 ～ 1． 20 μg范围内线性关系良好(r = 0． 999 9)，加样回收率 94． 0%，ＲSD 为 0． 52%。结论 该方法操作简
便，准确稳定，重复性好，可作为补肾化瘀浸膏的质量控制标准。
关键词 补肾化瘀浸膏;柚皮苷;淫羊藿苷;色谱法，高效液相
中图分类号 Ｒ286;Ｒ927． 2 文献标识码 B 文章编号 1004 － 0781(2014)09 － 1224 － 03
Simultaneous Determination of Icariin and Naringin in Bushen Huayu Extract by HPLC
OUYANG Lu1，2，XIA Yong2，XIA Peng2，LI Hong-liang1，2，WANG Xuan-bin1，2(1． Laboratory of Chinese Herbal
Pharmacology，Affiliated People’s Hospital of Hubei University of Medicine，Shiyan 442000，China;2． School of
Pharmacy，Hubei University of Medicine，Shiyan 442000，China)
ABSTＲACT Objective To establish a method for simultaneous determination of icariin and naringin content in bushen
huayu extract by HPLC． Methods Ｒeverse-phase high performance liquid chromatography (ＲP-HPLC) separation was
performed one C18 column (4． 6 mm × 250 mm，5 μm)． The mobile phase was acetonitrile containing 0． 2%H3PO4(pH = 2． 9)．
Gradient elution with a flow rate of 0． 8 mL·min －1 was applied to achieve the separation． The detection wavelength was set at
269 nm，and the column temperature was 30 ℃ ． Ｒesults Icariin had a good linear range from 0． 3 － 3． 0 μg (r = 0． 999 9)．
The recovery rate was 105． 6%，and ＲSD was 0． 95% ． Naringin was linear within the range of 0． 12 － 1． 20 μg (r = 0． 999 9)．
The recovery rate was 94． 0% and ＲSD was 0． 52% ． Conclusion The method is simple，stable，accurate，and reproducible，
which can be used as the quality control standard for bushen huayue extract．
KEY WOＲDS Bushen huayu extract;Icariin;Naringin;Chromatography，high performance liquid
补肾化瘀浸膏由淫羊藿(Epimedium brevicornum
Maxim．)、骨碎补［Drynaria fortune (Kunze)J． Sm］等
收稿日期 2013 － 07 － 10 修回日期 2013 － 10 － 30
基金项 目 * 十 堰 市 科 学 技 术 研 究 与 开 发 项 目
(ZD2011023);湖北省教育厅项目(B20082412);湖北省 2011
协同创新中心基金资助项目(4)
作者简介 欧阳露(1972 －)，女，湖北监利人，副主任药
师，副教授，硕士，研究方向:中药新制剂研发。电话:0719 －
8637260，E-mail:ouyanglu-sy@ 163． com。
通讯作者 汪选斌(1971 －)，男，湖北十堰人，主任药师，
教授，博士，研究方向:中药药理。电话:0719 － 8843185，E-
mail:xuanbin． w@ 163． com。
药材组方制成，实验研究证实，该方具有补肾壮骨、活
血镇痛之功效，对原发性骨质疏松症有良好的治疗作
用，具有很高的临床应用和开发价值［1-2］。为了保证该
制剂在临床应用安全有效，笔者参考相关文献［3-4］，建
立了高效液相色谱(HPLC)法同时测定制剂中淫羊藿
苷和柚皮苷含量的方法，为有效控制补肾化瘀浸膏的
质量提供参考标准。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 SHIMADZU LC-20 系列高效液相色谱仪:
工作站 LC solution，LC-20AD泵，SIL-20A自动进样器，
SPD-M20A检测器。分析天平(FA2004 型，上海天平
仪器厂)。超声波清洗机(KQ3200 型，昆山市超声仪
·4221· Herald of Medicine Vol. 33 No. 9 September 2014