全 文 ：《内陆水产》2008年第 8期
摘要:本试验以林荫千里光水相、氯仿相提取液,
葎草乙酸乙酯相、石油醚相、正丁醇相提取液为原料,
测定了鳗弧菌对其的敏感性。结果表明:葎草乙酸乙酯
相提取液、葎草石油醚相提取液、林荫千里光氯仿相提
取液抑菌作用明显,最小抑菌浓度(MIC)均≤25
mg/mL;林荫千里光水相提取液有一定的抑菌作用,
最小抑菌浓度为50mg/mL;葎草正丁醇相提取液无
抑菌作用。
关键词:林荫千里光;葎草;鳗弧菌;最小抑菌浓度
鳗弧菌(Vibrisisangnilarumz)是引起大菱鲆烂鳍
病及细菌性败血感染症的主要病原菌[1],是养殖及淡海
水养殖的主要病原菌。长期以来,国内外渔药大多数采
用化学性农药(如敌百虫等有机磷类和菊脂类)或兽药
(甲苯咪唑、阿维菌素)等作为母体药源,这些化学药物
不但在水体中不易降解、污染环境和容易在动物体内
富集,而且长期使用易产生耐药性[2]。而中草药防治鱼
病在我国已有1000多年的历史,因其具有生物活性,
并且对热稳定、易溶于水和不污染环境等特点,越来越
被水产养殖业所接受和重视。而且,从植物中寻找具有
抑菌活性的物质,特别是具有新型分子结构和特殊作
用机理的化合物,是新药研发的一条重要途径[3]。我国
有丰富的中药资源,这是开发植物源农药的理想来源
[4]。本试验在查阅中药学及其他相关文献的基础上,从
众多的中草药中选择了具有典型意义的林荫千里光与
研究较少的葎草进行较深入的研究。
林荫千里光SenecionemorensisLinn.为菊科千里
光属多年生草本。千里光有清热解毒、杀虫、明目、凉
血、生肌、驱风除湿的功效 [5]。有关千里光抗菌作用的
研究较多,例如:贵州省独山县药检所[6]研究发现林千
里光煎剂对金黄色葡萄球菌、白喉杆菌、伤寒杆菌、大
肠杆菌、变形杆菌和痢疾杆菌显示明显的抑制作用。袁
昌衡等[7]研究了80种中药水煎液对淋球菌的作用 ,发
现淋球菌对千里光高度敏感。
中药葎草为桑科植物葎草 Hu-
mulusscandens(Lour.)Mer.的全草。味
甘、苦,性寒。具有清热解毒,利尿通
淋。主治肺热咳嗽,肺痈,虚热烦渴,
热淋,水肿,小便不利,湿热泻痢,热
毒疮疡,皮肤瘙痒[8],葎草民间尚有治
疗消渴症的应用[9],但未见有关药理
的研究报道。
本试验以林荫千里光,葎草的各
相提取液对病原菌鳗弧菌进行抗菌
作用的研究,以期为鱼病防治提供参考,为新渔药开发
提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
林荫千里光、葎草分别采集于烟台昆嵛山和威海
环翠区。鳗弧菌(Vibrisisangnilarumz)来源于中国海洋
大学。
1.2 方法
1.2.1药液的制备 林荫千里光5000g,粉碎后,用甲
醇浸泡,过滤,滤液蒸发干燥,得总浸膏,加水溶解,再
用氯仿(CHCl3)萃取,得氯仿相、水相提取液。用真空干
燥仪将提取液中溶剂干燥完全,得两相提取物干样,称
重,再加极少量乙醇(相对水的体积可忽略不计)溶解
提取物干样,最后加水至 100mg/mL的浓度(即 1mL
提取液中含生药 100mg),121℃灭菌 20min,保存备
用。
葎草 4900g,粉碎后,用乙醇浸泡,过滤,滤液蒸
发干燥,得总浸膏,加水溶解,再依次用石油醚、乙酸乙
酯、正丁醇萃取,得三相提取液。其他步骤同上。
1.2.2鳗弧菌菌悬液的制备 将鳗弧菌转接于2216E
培养基上培养,37℃培养48h后,采用平板计数法[10],
用无菌生理盐水稀释至3.5×105cfu/mL后备用。
1.2.3最小抑菌浓度的测定 采用 2倍稀释法进行。
将林荫千里光、葎草各相提取液作为1组,每组8个无
菌试管,皆加入液体2216E培养基1mL。于1号试管
中加入药液1mL,混匀。从1号试管中吸取1mL加入
2号试管,混匀。再从2号试管中吸取1mL加入3号
试管,以此类推,进行2倍稀释至 7号试管,最后吸取
的1mL弃去。8号试管仅加1mL液体2216E培养基
作为对照。最后分别向 8支试管中加入 100μL菌悬
液,混匀。37℃恒温振荡培养48h后观察,根据试管内
药液菌液的浑浊度判断管内菌体的生长情况。
1.2.4最小杀菌浓度的测定 在各种药物的MIC和高
林荫千里光、葎草
提取液对鳗弧菌的药敏试验
●刘海涛 杨春华 杨 柳 陶晓璇
[基金项目]：山东大学威海分校大学生科技作品
立项项目（A06050）
沅江市立新水产养殖公司大量提供斑点叉尾鮰苗种，每kg10尾~20尾、20尾~40尾。
沅江市阳罗镇斑点叉尾鮰苗种基地。联系人：陈立新 13607374024、13973784377
基 础 研 究
责 任 编 辑 / 徐 永 福
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《内陆水产》2008年第8期
表1 提取液对鳗弧菌的最小抑菌浓度试验结果
药物 最小浓度/mg·mL-1
50 2512.56.253.1251.56250.78125对照
林荫千里光氯仿
相提取液 - - + + + ++ ++ ++
林荫千里光水相
提取液 - + + ++ ++ ++ ++ +++
葎草石油醚相提
取液 - - + + ++ ++ +++ +++
葎草乙酸乙酯相
提取液 - - - + + ++ ++ +++
葎草正丁醇相提
取液 + + ++ ++ ++ ++ ++ +++
注：“+++”表示高度浑浊，“++”表示中度浑浊，“+”表示有菌生长,
“-”表示无菌生长。
于 MIC浓度的试管中,吸取 0.2mL培养物转接于 2
216E培养基上37℃培养2d,观察有无菌落形成,无
菌落形成的相应试管中的药物浓度即为该种药物对该
菌株的最小杀菌浓度。
2 结果
由表 1可知:葎草乙酸乙酯相提取液的 MIC为
12.5mg/mL,抑菌作用最好;林荫千里光氯仿相提取液、
葎草石油醚相提取液的MIC均为25mg/mL,抑菌作用
明显;林荫千里光水相提取液 MIC为 50mg/mL,抑菌
作用比较明显;葎草乙醇相提取液在该试验浓度范围
内没有发现抑菌作用。由表2可知,药物的最小杀菌浓
度(MBC)均大于最小抑菌浓度(MIC),该试验浓度范围
内没有发现林荫千里光、葎草各相提取液有杀菌作用。
3 结论与分析
3.1 从所得结果可以看出,葎草乙酸乙酯相提取液,
林荫千里光氯仿相提取液、葎草石油醚相提取液抑菌
浓度低,为理想的具有新型分子结构和有效抗鳗弧菌
的化合物的来源。因为无论是哪一种药物的那一个相
提取液,其抗菌作用主要是依靠所含抗菌有效成分,如
生物碱、帖类化合物等。
3.2 林荫千里光氯仿相提取液比同浓度林荫千里光
水相提取液提取液的效果要好,说明林荫千里光的抗
菌有效成分若水相提取液与氯仿相提取液是同一种成
分,则氯仿相提取液所含抗菌有效成分的量多于同浓
度水相提取液;若不是同一种抗菌成分,那么氯仿相提
取液的应好于水相提取液的。一般而言,植物成分中萜
类、甾体等脂环类及芳香类化合物因为极性小,易溶于
氯仿等亲脂性溶剂中;而糖苷、氨基酸等成分则极性较
大,易溶于水[11]。
3.3 对于葎草,葎草乙酸乙酯相提取液比同浓度葎草
石油醚相提取液效果好,分析同上。而葎草正丁醇相提
取液的抑菌作用不明显,估计其中所含抗菌有效成分
较少,甚至没有。石油醚相提取液的成分可能为油脂、
蜡、叶绿素、挥发油、游离甾体及三萜类化合物,乙酸乙
酯相提取液成分可能为游离生物碱、有机酸、黄酮、香
豆素的苷元等中等极性化合物,正丁醇相提取液成分
可能为苷类、生物碱盐以及鞣质等极性化合物[11]。但
是究竟哪一种成分发挥了主要抗菌作用,或者是哪几
种成分发挥了抗菌作用,有待进一步验证。
参考文献
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社,2006.18.
(通联:山东大学威海分校,264209)
药物 最小浓度/mg·mL-1
50 2512.56.253.125 1.56 0.78 对照
林荫千里光氯仿
相提取液 + + + + + + + +
林荫千里光水相
提取液 + + + + + + + +
葎草石油醚相提
取液 + + + + ++ + + +
葎草乙酸乙酯相
提取液 + + + + + + + +
葎草正丁醇相提
取液 + + + + + + + +
表2 提取液对鳗弧菌的最小杀菌浓度试验结果
注：“+”表示有菌生长,“-”表示无菌生长。
供科洋 B型钛肥、鱼鳋净、鱼虫杀星、增氧剂、大苏打、小型饲料机、小臭氧
机、凯灵牌渔塘增氧机、投饵机、1.5kW两用浮水泵(可代理全国货运)。
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基 础 研 究
责 任 编 辑 / 徐 永 福
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