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36 2中国生物防治 C h in e s e Jo urn a l o B fio lo g i e a l e o n t ro l 20() 8年 1 1 月
嗜酸柏拉红菌 P SB ·01 菌株对竺麻根腐线虫病
的防治效果
成飞雪` , 2
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何明远“ , 张战乱 , , 戴建平“ , 张德咏2 , 4 , 肖启明` , 刘勇“ ,4 `
湖南农业大学生物安全科学技术学院 , 长沙 41 0 12 8 ; 2 . 湖南省植物保护研究所 ;
3
. 湖南省蔬菜研究所 ; 4 . 中南大学研究生院隆平分院 )
摘要 : 于污水中分离的嗜酸柏拉红菌 ( hR o do blas tu 、 ac idor hi lu 、 )在应用 中发现对芒麻根腐线虫
(咖啡短体线虫 raP trl enc h us 。ofe ae 和穿刺短体线虫 尸
.
eP ne tra n 、 )病有很好的防治效果 。 室 内
毒力测定表明 : 嗜酸柏拉红菌 SP B一 01 发酵原液对咖啡短体线虫具有很强的毒杀作用 , 24 h 后
死 亡率达 10 % 。 发病麻 园施用 10 0 倍 SP B一01 发酵液 , 60 d 后芒麻根内及根际周围土壤中的线
虫减退率分别为 93 . 8% 和 9 0 . 9 % 。 田 间试验表明 , PS B一01 菌剂不仅能有效防治芒麻根腐线虫
病 , 对芒麻还有较大的增产效应 , 增产率达 23 . 3% , 明显优于对照药剂吠喃丹 。
关 键 词 : 兰麻 ; 根腐线虫病 ; 嗜酸柏拉红菌 ; 生防菌剂
中图分类号 : 54 35 . 63 ; 54 76 文献标识码 : A 文章编号 : 10 05 一 926 1 (2 0 8) 以一03 59 一。
B io c o nt r o l of aR 而 e R o o t 一 r o t N e m a t o d e s b y R h o do b俪at s ac i内P h ilu s
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收稿 日期 :
基金项 目 :
作者简介 :
2X() 8
一
0 1
一
23
国家 86 3 计划项 目 ( 2 (X场A 1A 0 4Z O I ) ; 国家十一五科技支撑计划项 目 ( 2侧拓 B A1D 7 B08 , 2〕 巧B A 0D 8 AO)S ; 行业科
技专项 ( n y hy幻 7一 05 0 )
成 飞雪 ( 19 73 一 ) , 女 , 博士 生 , 助 研 , E 一 m ial : C fx 9 37 20 7 @ 126 . C o m ; * 通 讯作者 , eT l : 86一 73 1一46 9 17 36 , E 一m al :
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as l i u @ 16 3
.
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3 5 9
DOI : 10. 16409 /j . cnki . 2095 -039x . 2008. 04. 010
中 国 生 物 防 治 第 24 卷
竺麻 ( Bo eh me ri o ni vea )是重要的农业经济作物之一 。 根腐线虫病广泛发生于我国各竺麻
种植区 ,发病率最高达 80 % 以上 , 造成芒麻减产 20 % 一 30 % , 严重时导致绝收 ,我国每年因此
损失的麻约 5 万吨 , 已成为竺麻生产的主要障碍 〔’ , “ 〕。 引起竺麻根腐病的病原主要是寄生于
竺麻的咖啡短体线虫 [ arP 妙le n e h u s e ofe a e ( z im m e mr a n 。 , 189 8 )」和穿刺短体线虫「arP ylt e cn 乙us
eP en atr sn ( co b
,
19 1 7 )][
’ , 4 ] 。 目前生产上防治芒麻根腐线虫病主要利用吠喃丹 、克线丹等 t’ 〕剧
毒或高残留的化学杀线剂 , 由于多年使用 ,产生抗药性 ,防治效果逐年下降 , 而且常造成严重的
环境污染 、农田土壤质量退化等现象 [“ 〕。 因此 ,筛选高效 、低毒无残留的竺麻根腐线虫病生 防
制剂显得尤其重要 。
本课题从污水中分离了一株光合细菌 SP B一 01 , 经鉴定为嗜酸柏拉红 菌 ( hR 。面6al st u 、 二`-
dor ihl o feP mr is)
〔’ 〕 , 田间试验结果显示该菌可促进作物生长 , 防治作物病毒病害 [8 一 ’ “ 〕。 2 0 02 年
以来 , 以该菌株为核心开发的艾格里生物肥在全国多种作物上大面积推广 ,在应用 中发现该菌
剂对竺麻根腐线虫病有很好的防治效果 。 本文利用室内毒力测定验证 了 SP B一01 发酵液对竺
麻根腐线虫的毒杀效果 , 以及 PS B一01 发酵液对大 田竺麻根腐线虫病的防治效果 。
1 材料与方法
1
·
1 P s -B ol 发酵液的制备
飞 B一01 菌株由本课题组分离保存并提供 [ 7〕。 从多年种植 兰麻 的田块中取耕层土 , 参照刘
勇等 [`〕方法进行富集培养 ,采用孙军德等 〔” ;双层平板夹心法分离纯化 , 获得纯培养物 。 利用
分离纯化的 PS B一01 菌种进行发酵培养 ,在无菌条件下以 l : 10 比例将菌种接人 iN s s on & Dun -
d a s 培养基中 。 置于 28 一 30 ℃ , 4 OW 白炽灯或光照强度为 2 0 0 一 30 Ol x 光源环境中厌氧培养 5
一 7 d ,观察到培养基变成玫瑰红色 。 利用 M PN 法对 PS B一01 菌株发酵液进行计数 , 直至发酵液
中活菌数达到 or s 个 / 耐 以上 。
1
.
2 室内毒力测定
将采集的芒麻病根削成碎片 , 在室温下 ( 25 ℃ 士 1℃ )用 贝氏漏斗法分离线虫 。 采用 48 孔
酶标板 (每孔容积约为 50 川)进行毒力测定 。 每个处理选取 20 0 条活的供试线虫 ,用 0 . 0 2 %
放线菌酮和 0 . 1% 的硫酸链霉素的混合液进行表面消毒后 , 加人不 同稀释倍数的 SP B一01 发酵
液 , 每处理重复 3 次 , 以培养液处理线虫作为对照 。 先放 25 ℃培养箱 中 12 h , 然后置 自然条件
下 1h2 。 在 24 、 4 h8 用倒置显微镜检查线虫的死活 ,将在生理刺激下无反应的确定为死亡线虫 ,
并对死亡线虫进行定时计数 。 根据死亡率计算生物杀线虫毒素的药效 。
1
.
3 田间防治效果试验
1
.
3
.
1 试验方法 试验地设在湖南省 沉江市共华镇阜丰村一农户家 , 地势平坦 、 肥力中等 ,
p6H
.
9
,有机质含量较丰富 , 为中等发病麻园 , 竺麻品种为 7 年生湘竺二号 ,种植密度为 2 0(x〕莞
/ 667 衬 。 共 12 个小区 , 每小区 65 衬 , 约 20 穴麻莞 ,小 区随机区组排列 , 每小区间间隔一行 。 试
验共设 4 个处理 : ①于竺麻头麻苗高 30 一 4 c0 m 时 ,用 PS B一01 发酵液 10 倍稀释液按 50 祖 /蓖
直接灌根 , 7 d 后再浇灌一次 , 连续浇灌 3 次 ; ② SP B 一01 发酵液 30 倍稀释液 , 方法 同处理① ;
③3 % 吠喃丹 (武汉农药厂产品 )用量为 6k g / 6 67 衬 ,拌细土 2k5 g ,每兜用药土约 0 . ol 2k5 g 埋莞 ,
用药一次 ; ④空 白对照 。 每个处理重复 3 次 。
1
.
3
.
2 调查方法 施药前采用随机五点取样法 ,调查芒麻根及根际 30 ~ 5 c0 m 范围内 、 深 or -
ZO c m 土层 的土壤中线虫数量 。 施药 6 d0 后 , 以同样方法调查麻克和根际土壤中的线虫数 。 麻
3 6 0
第 4 期 成飞雪等 : 嗜酸柏拉红菌 PS B一01 菌株对竺麻根腐线虫病的防治效果
克内线虫分离采用浅盆法 ,土壤线虫分离采用贝氏漏斗法 。 并于头麻 、 二麻和三麻收获的前一
天测定株高 、茎粗 、皮厚 , 收麻后测定产量 。 根据施药前后线虫数量计算虫 口减退率以及防效 ,
统计增产率 。 所有数据均用 DSP 软件进行分析 。 .
2 结果与分析
2
.
1 室内毒力试验结果
从表 1 看出 , SP B一01 发酵液原液处理竺麻根腐线虫 24 、 4 h8 后 , 根腐线虫死 亡率均为
10 % ; SP B
一
01 发酵液 20 倍液处理竺麻根腐线虫效果稍差 , 24 与 4 h8 后根腐线虫死亡率分别
为科 . 0 % 和 56 . 9 % ; 但对照培养液对竺麻根腐线虫几乎没有毒杀作用 。
表 l 不 同稀释倍数的 SP -B ol 发酵液对线虫作用效果
总线虫数 24 h 4 8h不同浓度处理 涤 ) 雨而死薪不祝不而丁丽顶万靳丽 不骊而不玩诬靳面乓疏丽函不订
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08576402137954910213098川75光合细菌发酵原液
10 倍发酵液
50 倍发酵液
10 倍发酵液
2X() 倍发酵液
培养液 (对照 )
注 : 表中大 、小写字母分别表示达到 1% 与 5% 水平差异显著性 ,下同 。
2
.
2 田间药效试验结果
2
.
2
.
1 对线虫的防治效果 从表 2 中看到 ,病麻地施用 SP B一01 发酵液后 60 d , 芒麻根内与周
围土样中的根腐线虫数量明显减少 , SP B一01 菌液浇灌麻蓖后竺麻根及周围土样中的线虫数量
与对照药剂吠喃丹 的作用效果 没有显著性 差异 ; 但与空 白对照相 比其差异极显著 。 10 倍
巧 B一01 发酵液浇灌麻克对竺麻根腐线虫病的药效与吠喃丹药效相当 ,均在 90 % 以上 。
表 2 发酵液对竺麻根腐线虫病病情的影响
10 9 土样中处理
19 鲜麻根中
线虫数 (条 ) 线虫减退率 (% ) 防效 (% ) 线虫数 (条 ) 线虫减退率 ( % ) 防效 (% )
10 倍发酵液
3X() 倍发酵液
吠喃丹
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2
.
2 对竺麻的促生作用 施用菌剂后竺麻各项经济性状都有非常明显 的提高 , 特别是 10
倍 sP B一01 发酵液浇灌后使竺麻 的株高 、 茎粗 、 皮厚均有所增加 ,有效株增加 7 3 株 / 6 67 衬 , 纤
维产量增产率达 23 . 3% ,与对照药剂吠喃丹及空 白对照处理差异显著 (表 3 ) 。
表 3 不同处理后三季麻平均株高 、 茎粗 、 皮厚与产 t
处理 株高 c( m ) 茎粗 c( m ) 皮厚 (~ ) 有效株 (株 / 6 7衬 ) 无效株 (株 / 6 7 m , ) 产量 ( k岁 6 7 m , ) 增产率 (% )
10 倍发醉液
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峡喃丹
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3 结论与讨论
寻找稳定而有效并能大规模生产的生防因子来防治植物寄生线虫病害是国内外研究人员
3 6 1
中 国 生 物 防 治 第 24 卷
长期努力的方向 ,在这方面已经有了许多成功的报道 〔” 一 ” ] 。 目前国外已有了多种商品化的
生防制剂如 DI eT ar 、 Roy al 350 、 iB oc on 等用于植物寄生线虫的防治 [ ’ “ 〕。 国内对线虫生防资源的
研究开发起步较晚 ,但也有了商品化的线虫生防制剂 ,如我国科研人员已研制出的以厚垣轮枝
抱 ( ve irt icl ilu m hc la l孙妞o sP ior u m )为生防菌的商品制剂 “ 线虫必克 ” , 以及 以淡紫拟青霉 ( aeP
-
ic lo 阴 , c/ es il al ic n us )为生防菌的商品制剂 “ 灭线宁 ” 〔’ 7〕。
光合细菌类微生物的研究已有 70 多年的历史 ,光合细菌中的多种次生代谢产物对农作物
的抗性具有诱导作用 。 我们的研究表明 : 光合细菌能促进作物生长并对多种病害有独特的防
治作用 (尤其是病毒病 ) 〔’ , 9 , ’ 8 〕。 我们首次报道光合细菌嗜酸柏拉红菌对植物线虫具有防治作
用 。 进一步研究表明 : 嗜酸柏拉红菌不仅对竺麻根腐线虫病有很好的防治效果 , 还能显著提
高芒麻抗其它病虫害的能力 , 有效防止竺麻的烂克现象 , 对兰麻也有显著的增产效果 ; 通过调
节叶绿素的合成 ,进而提高光合效率 ,促进植物组织分化 (未发表 ) 。 嗜酸柏拉红菌对竺麻根腐
线虫的有效成分及其作用机理 、 是否可以用于防治其他线虫还有待进一步的研究 。
陈洪福 ,
段玉玺 ,
程湖瑞 ,
15 1 一 154
李笃肇 .
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