全 文 ：第 41 卷第 2 期
2012 年 2 月
应 用 化 工
Applied Chemical Industry
Vol． 41 No． 2
Feb． 2012
收稿日期:2011-11-02 修改稿日期:2011-11-15
作者简介:刘莹(1970 －) ，男，辽宁阜新人，辽宁工程技术大学副教授，硕士，师从东北师范大学张丽萍教授，从事生物化
学研究。电话:15941853933，E － mail:liuyingfx02@ 126． com
接骨木多糖的理化性质分析
刘莹
(辽宁工程技术大学 理学院，辽宁 阜新 123000)
摘 要:以接骨木叶为原料，脱脂后，采用水提醇沉法来提取多糖，采用双氧水脱色，木瓜蛋白酶法-三氯乙酸正丁醇
联合法进行除蛋白，得到接骨木精多糖。对接骨木多糖的含水量、灰分含量、糖含量、蛋白质含量等理化性质进行
分析。结果为:接骨木多糖的蛋白质含量为 5． 38%，多糖含量为 33． 62%，水分含量为 12． 56%，灰分含量为 1． 7%。
关键词:接骨木多糖;理化性质;分析
中图分类号:TQ 317;Q 599 文献标识码:A 文章编号:1671 － 3206(2012)02 － 0362 － 03
Analysis of physical and chemical properties of elderberry
polysaccharide
LIU Ying
(College of Science，Liaoning Technical University，Fuxin 123000，China)
Abstract:Elderberry leaves were used as the raw material，after degreasing，water extract-alcohol can ex-
tract the polysaccharide，and then hydrogen peroxide was used to bleach，papain method-combined method
of trichloroacetic acid butanol was used to remove the protein and get the elder fine polysaccharide． Then
the elderberry extraction rate，moisture contents，ash content，sugar content，protein content and other
physical and chemical properties were analyzed． The results indicated that the elder polysaccharide of pro-
tein content was 5． 38%，the polysaccharide was 33． 62%，moisture content was 12． 56%，ash content
was 1． 7% ．
Key words:elderberry polysaccharide;physical and chemical properties;analysis
接骨木是一种资源丰富的野生药用植物，但对
其研究较少，尤其应用研究方面更少，且尚有更多的
化学成分未被阐明，其应用开发研究亦有大量的工
作需要继续深入开展［1］。目前，随着近年来国内外
对接骨木的研究日趋深入，已开展了大量工作。但
国内目前大多数研究主要倾向于接骨木的无土栽培
及繁殖方法的研究，对接骨木中多糖的研究很
少［2-3］。因此，本文对接骨木多糖的分离纯化、理化
性质进行了分析，对促进接骨木多糖的进一步开发
和应用提供必要的理论基础。
本文主要以接骨木叶为原料，采用石油醚进行
脱脂，采用水提醇沉法来提取多糖，采用双氧水脱
色，木瓜蛋白酶法-三氯乙酸正丁醇联合法进行除蛋
白，对接骨木多糖进行纯化。对接骨木多糖的含水
量、蛋白质含量、溶解性、粘度等理化性质进行分析。
1 实验部分
1． 1 试剂与仪器
接骨木叶(辽宁阜新地区) ;石油醚、木瓜蛋白
酶、正丁醇、三氯乙酸、无水硫酸铜、三氯化铁、二甲
基亚砜、甲醇、考马斯亮蓝 G-250、牛血清蛋白、
D(+)-葡萄糖等均为分析纯。
SHB-IIIA循环水式多用真空泵;KDC-160HR高
速冷冻离心机;TU-1810 紫外可见分光光度计;RE-
52A旋转蒸发仪。
1． 2 接骨木多糖的提取
1． 2． 1 接骨木多糖的提取 将摘取的接骨木叶子
粉碎，烘干，装袋，放在干燥器里，取 100 g 接骨木粉
末，用滤纸包裹，卷成筒状，放入索氏提取器中。向
索氏提取器中加入石油醚至烧瓶的 1 /2 处，60 ℃脱
脂 3 h，取出风干。将脱脂粉末按 1∶ 40(g /mL)加入
60 ℃蒸馏水，放入 60 ℃水浴锅，水提 3 h。将水提
后的接骨木粉末液真空抽滤，滤渣继续按1∶ 20加入
蒸馏水，水提 2 h。滤液收集后进行旋转蒸发，浓缩
100 ～ 200 mL。浓缩后的滤液按 1∶ 4 加入无水乙醇，
醇沉后静置 24 h。进行离心，取沉淀，60 ℃烘干，即
为粗多糖。
第 2 期 刘莹:接骨木多糖的理化性质分析
1． 2． 2 接骨木多糖的分离纯化 用氨水将多糖液
调 pH = 9，按 50 ∶ 1 的比例加入双氧水，脱色。按
2%加入木瓜蛋白酶，于 40 ℃水浴 2 h。按多糖液∶
正丁醇∶三氯乙酸 = 3∶ 3∶ 1，加入正丁醇、三氯乙酸，
常温下磁力搅拌 20 min，静置 1 h后离心，取下层液
即为脱蛋白多糖液，重复 3 遍。按 1∶ 4 的比例加入
无水乙醇，醇沉，静置 24 h，离心，冷冻干燥，即得纯
化多糖。
1． 3 接骨木多糖理化性质的测定
1． 3． 1 基本理化性质［4］ 溶解性测定;三氯化铁
反应;婓林试剂反应;双缩脲试剂反应;碘-碘化钾反
应;考马斯亮蓝染色反应。
1． 3． 2 水分含量的测定 精确称取接骨木纯化多
糖 0． 5 g于已烘干的称量瓶中。用电子天平称量称
量瓶加样品重 W1，放置于 105 ℃烘箱内烘干 6 h，然
后取出称量，记录数据为 W2． 0，继续放入烘箱中干
燥，每隔 45 min取出称量一次，依次记为 W2． 1、W2． 2、
W2． 3……重复上述操作直至恒重，记下最终恒定
W2。计算公式如下:
水分含量 =
W1 －W2
W × 100%
1． 3． 3 蛋白含量的测定 考马斯亮蓝 G-250 蛋白
试剂的配制:称取 100 mg 考马斯亮蓝 G-250，溶解
于 50 mL 90%的乙醇中，加入 85%正磷酸100 mL，
加蒸馏水定容至 1 000 mL。
标准曲线溶液的配制:准确称取 100 mg牛血清
蛋白，用蒸馏水定容至 100 mL。取 6 支 10 mL干净
的离心管，分别吸取 0，0． 2，0． 4，0． 6，0． 8，1． 0 mL，
各加蒸馏水补至 1． 0 mL，然后加入配制好的考马斯
亮蓝 G-250 试剂 5 mL，盖塞后，将各试管中溶液纵
向倒转混合，放置 2 min 后，在 595 nm 波长下测吸
光度。
取待测蛋白质溶液 0． 1 mL，加入 5． 0 mL 考马
斯亮蓝 G-250 试剂，充分振荡混匀，10 min 后于
595 mL 测定光吸收值，以 0． 1 mL 重蒸水加入
5． 0 mL 考马斯亮蓝试剂作空白对照。以牛血清蛋
白(BSA)溶液为标准制作蛋白质标准曲线，得回归
方程，计算待测溶液蛋白质含量。
1． 3． 4 灰分含量的测定 用灼烧至恒重的坩埚称
取经 P2O5 干燥至恒重的多糖样品 50 ～ 100 mg(精
确至 0． 000 2 g) ，置马弗炉于 740 ℃下灼烧 3 h。取
出，冷却至室温，称重，再烧至恒重为止。
灰分(干基，%)=
坩埚与灰分重 －坩埚重
样品重 ×(100 －水分百分率)
× 10 000
1． 3． 5 糖含量的测定［5］ 采用苯酚-硫酸法。
1． 3． 5． 1 制作标准曲线 准确称取干燥恒重的葡
萄糖 20 mg于 500 mL容量瓶中，加水至刻度。分别
吸取 0． 4，0． 6，0． 8，1． 0，1． 2，1． 4，1． 6，1． 8 mL，各加
蒸馏水补至 2． 0 mL，加入 6%苯酚 1． 0 mL及浓硫酸
5． 0 mL，静止 10 min，摇匀，室温放置 20 min 后于
490 nm波长测吸光。以 2． 0 mL水按同样显色操作
为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为吸光度，得
标准曲线。
1． 3． 5． 2 样品含量测定 吸取样品液 1． 0 mL
(0． 1 mg /mL的多糖) ，按上述步骤操作，测吸光度，
以标准曲线计算多糖含量。
2 结果与讨论
2． 1 理化性质
接骨木纯化多糖为淡黄色粉末，易溶于水，不溶
于高浓度的甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯等有
机溶剂，说明接骨木纯化多糖具有一般多糖具有的
性质。与婓林试剂反应呈阴性，说明不含还原糖。
与 I2-KI反应呈阴性，说明不含淀粉。与三氯化铁
反应呈阴性，说明不含多酚类物质。与双缩脲反应
呈阳性，与考马斯亮蓝反应呈阳性，说明接骨木纯化
多糖中含有蛋白质。
2． 2 接骨木多糖水分含量
样品重 W = 0． 5 g，干燥前称量瓶加样品重 W1
= 22． 468 0 g，烘干后称量瓶加样品重 W2 =
22． 405 2 g。计算得接骨木纯化多糖中水分含量为
12． 56%。
2． 3 接骨木多糖蛋白含量
接骨木多糖蛋白含量见表 1。
表 1 蛋白质标准曲线数值
Table 1 Protein standard curve
含量 /μg 吸光度
0． 2 0． 244
0． 4 0． 37
0． 6 0． 545
0． 8 0． 676
1． 0 0． 784
多糖样液 0． 743
用 Excel软件分析在 595 nm 波长处测得的吸
光度，得回归方程为 Y = 0． 006 9X + 0． 108，R2 =
0． 994，呈良好的线性关系。其中接骨木多糖样品
液浓度为 2 mg /mL。经计算，接骨木纯化多糖蛋白
质含量为 107． 67 μg。
2． 4 接骨木多糖灰分含量
计算得接骨木纯化多糖中灰分含量为 1． 7%。
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应用化工 第 41 卷
2． 5 接骨木多糖含量
接骨木多糖含量见表 2。
表 2 葡萄糖标准曲线数值
Table 2 Glucose standard curve
体积 /mL 含量 /μg 吸光度
0． 4 16 0． 090
0． 6 24 0． 167
0． 8 32 0． 239
1． 0 40 0． 271
1． 2 48 0． 338
1． 4 56 0． 415
1． 6 64 0． 458
1． 8 72 0． 542
多糖样品 67． 23 0． 498
用 Excel软件分析在 490 nm 波长处测得的吸
光度，得回归方程为 Y = 0． 007 8X － 0． 026 4，R2 =
0． 994 3，呈良好的线性关系，并绘制得到葡萄糖标
准曲线。经计算，接骨木纯化多糖中糖含量为
67． 23 μg。
3 结论
采用考马斯亮蓝法测接骨木多糖的蛋白质含量
为 5． 38%。采用苯酚-硫酸法测接骨木多糖的糖含
量为 33． 62%，水分含量为 12． 56%，灰分含量为
1． 7%。
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(上接第 361 页)
2． 6． 3 负高压 负高压越大，仪器灵敏度越大，但
负高压过高，仪器不稳定，所以原子荧光分光光度计
一般控制在 270 ～ 300 V，但对汞测定，本实验控制在
220 V。
2． 6． 4 玻璃分析器皿 实验用的玻璃分析器皿如
容量瓶、比色管等必须用 10% HNO3(V ∶ V)浸泡
24 h，然后用超纯水清洗干净后方可使用。若玻璃
器皿污染，空白会很高，甚至荧光值不显示读数。
2． 6． 5 仪器预热 原子荧光分光光度计灵敏度高，
荧光值会出现不稳定、漂移，因此应用大电流启动机
器，预热 30 min，然后将电流调小，开始测量。
2． 6． 6 硼氢化钾溶液浓度 硼氢化钾溶液浓度越
低，测汞时灵敏度越高。同时还可大大降低各种干
扰，但不能小于 0． 01%。本测定用硼氢化钾溶液浓
度为 2%(W/V)。
通过上述控制措施，用原子荧光光谱法测汞时
空白能控制在 120 左右，并且仪器运行稳定。
3 结论
采用原子荧光分光光度计检测作业场所空气中
的汞含量，检出限为 0． 000 04 μg /mL，最低检出浓度
为 0． 000 053 mg /m3，加标回收率为 95． 2% ～
97． 0%，RSD为 1． 18%，结果准确可靠。
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