全 文 ：中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2008, 39(2) · ·127
[3] 梁选革. 铈量法测定尼莫地平片的含量[J]. 时珍国医国
药, 2002, 13(10): 597-598.
[4] 张兰桐, 和 悦, 周月绵, 等. 紫外分光光度法测定间-尼索
地平的含量[J]. 河北医科大学学报, 1999, 20(3): 149-151.
[5] 吴 华, 张兰桐, 袁志芳, 等. 高效液相色谱法测定间尼索地
平含量及有关物质[J]. 药物分析杂志, 2006, 26(6): 799-
801.
[6] 尹峻雅, 丁 黎, 张正行. 气相色谱电子捕获法测定人体
血浆中尼索地平的浓度[J]. 药物分析杂志, 2000, 20(5):
335-338.
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
我国野生山葡萄植物自然资源广泛，野生山
葡萄根(Vitis amurensis Rupr.)有清热解毒、散瘀破
结等功效[1]。其主要成分为黄酮类化合物、白藜
芦醇、多种有机酸、萜类、生物碱、甾醇、香豆
素类、挥发油及脂肪油类等[2]。其中白藜芦醇(1，
resveratrol，3,4′,5-三羟基二苯乙烯)含量较高，是
主要有效成分之一[3]，具有抗氧化、抗畸变、抗
炎、调节血脂等多种生物学作用[4]，但对其提取条
件研究的文献报道较少。文献[5]报道虎杖植物中含
野生山葡萄根中白藜芦醇的HPLC测定
季 梅，娄红祥*
(山东大学药学院，山东济南 250012)
中图分类号：TQ460.7+2；O657.7+2 文献标识码：B 文章编号：1001-8255(2008)02-0127-03
收稿日期：2007-10-09
基金项目：国家自然基金资助项目(21310005130471)。
作者简介：季 梅(1965)，女，高级实验师，从事天然产物活性成
分研究。
E-mail：jimei@sdu.edu.cn
通讯联系人：娄红祥(1965)，男，教授，博士生导师，从事天然产
物研究与开发。
Tel：0531-88382019
E-mail：louhongxiang@sdu.edu.cn
Determination of Resveratrol in Roots of Vitis amurensis Rupr. by HPLC
JI Mei, LOU Hong-xiang*
(School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University, Jinan 250012)
ABSTRACT: A HPLC method was established for the determination of resveratrol in the roots of Vitis amurensis
Rupr. A C18 column was used with the mobile phase of acetonitrile-0.1％ glacial acetic acid (25∶75), at the detection
wavelength of 306nm. The calibration curve was linear in the concentration range of 2.4 - 38.4µg/ml (r=0.9998). The
average recovery was 102.0％, with RSD of 1.52％. The infl uence of extraction conditions on the content of resveratrol
was also discussed.
Key Words: resveratrol; extraction; HPLC; determination
有较多白藜芦醇苷，而1含量较少。本研究建立了
HPLC-二极管阵列检测器法测定1含量，并用正交
实验设计优化野生山葡萄根中1的提取条件，得率
高，较经济。
1 仪器与试药
1100型高效液相色谱仪(Agilent公司)；API 4000型串
联四级杆质谱仪，配有电喷雾离子源(ESI)及Analyst 1.3.1
数据处理系统(美国Applied Biosystem Sciex 公司)。
1对照品(中国药品生物制品检定所，批号 111535)。
野生山葡萄根2006年11月中旬采自济南仲宫，并经本院温
学森教授鉴定。
乙腈、甲醇、乙醇均为色谱纯，水为重蒸水，其它试
剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液配制
1对照品溶液：精密称取1对照品2 .4mg，置
· · 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2008, 39(2)

128
50ml棕色量瓶中，加乙醇溶解并定容，得对照品贮
备液。精密量取适量，加乙醇稀释得9.6µg/ml的1对
照品溶液。
1供试品溶液：野生山葡萄根避光通风处干燥
后粉碎，过40目筛，精密称取细粉2g，加12倍量
的80％乙醇，超声提取3次，共30min。合并提取
液，用乙醇定容至150ml量瓶中。取1.5ml，离心
(6200×g)5min，取上清液，经0.45µm滤膜过滤，
得供试品溶液。
2.2 色谱、质谱条件
色谱柱 AichromBond C18柱(4.6mm×250mm，
5µm)；流动相 乙腈-0.1％冰醋酸(25∶75)；流速
0.8ml/min；检测波长 306 nm；柱温 25℃；进样量
10µl。
离子源 ESI源；离子源温度(TEM) 500℃；
电喷雾电压(IS) 4500V；气帘气(CUR) 20psi；雾
化气(GS1) 35psi；辅助气(GS2) 50psi；负离子模
式。
1对照品溶液和1供试品溶液的HPLC色谱图见
图1，质谱图见图2。由图1可见，野生山葡萄根提
取样品与1对照品有相同保留时间峰(14.30 min)，
说明提取样品中含有1。由图2可见，质谱检测器1
的一级质谱信息特征([M-H]-，m/z 227)与1对照品
一致，可进一步确认野生山葡萄根提取样品中含
有1。
2.3 提取条件的选择
2.3.1 溶媒
1易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等溶
剂[6]。精密称取野生山葡萄根粗粉2g，共4份。分
别加入上述溶剂35ml，超声提取30min。考察不同
提取溶剂的影响，结果见表1。
表1 不同提取溶剂对野生山葡萄根中1提取的影响
提取溶剂 甲醇 95％乙醇 丙酮 乙酸乙酯
含量/mg·g-1 0.252 0.243 0.286 0.091
由表1可见，丙酮对1的提取效果较好，甲醇与
95％乙醇提取效果相近，从安全、经济角度考虑，
选择95％乙醇为提取溶媒。
15
10
5
0
0 5 10 15 20 25
t/min
1
2.0e6
1.5e6
1.0e6
5.0e5
5 10 15 20 25
1
5.17
19.35
t/min
A B
1-1
图1 1对照品溶液(A)和供试品溶液(B)的HPLC图
100 150 200 250 300 350 400 450 500
m/z
5.0e6
1.0e7
1.5e7
2.0e7
2.2e7 227.3

100 150 200 250 300 350 400 450 500
2.0e5
4.0e5
6.0e5
8.0e5
1.0e6
1.2e6
1.4e6 227.3
61.9
199.1
431.3121.2 255.2 354.9
m/z
A B
图2 1对照品(A)和野山葡萄根提取样品(B)的质谱图
中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2008, 39(2) · ·129
2.3.2 醇提条件优化
1热稳定性较差，提取温度超过60℃时易被破
坏[7]，故采用超声波提取。以乙醇浓度、溶剂用
量、提取时间、提取次数作为考察因素，采用四因
素三水平[8]，1含量为评价指标。因素水平表见表
2。
表2 因素水平表
水平 乙醇浓度/％ 固液比/倍 提取时间/min 提取次数
A B C D
1 65 1∶8 10 1
2 80 1∶12 20 2
3 95 1∶18 30 3

由正交试验方案及方差分析结果(存编辑部)得
各因素水平的最佳组合为 A2B2C3D3，即加入12倍量
的80％乙醇，超声提取3次，30 min。各因素影响
力大小依次为 D>C>B>A，显著因素是C和D。
2.4 线性试验
精密量取对照品贮备液适量，加乙醇稀释得
2.4、4.8、9.6、19.2、38.4µg/ml的系列浓度标准
溶液。进样测定，以1峰面积(A)对其浓度(c)进
行线性回归，得线性方程为A=124.98c-43.59，
r=0.9998。表明1浓度在2.4～38.4µg/ml范围内，与
峰面积线性关系良好。
2.5 精密度、重复性与稳定性试验
取1对照品溶液，连续进样5次，得1峰面积
RSD为1.24％。
取野生山葡萄根，共5份，按“2.1”项下制得
供试品溶液，进样测定，得1峰面积RSD为1.06％。
取供试品溶液于4℃避光放置0、2、4、8、12h
后进样测定，得1峰面积RSD为1.31％。
2.6 回收率试验
精密称取已知1含量的野生山葡萄根样品1 g，
共5份，精密加入1对照品溶液10ml，按“2.1”项
下制得回收率试验用溶液，进样测定，计算得平均
加样回收率为102.0％，RSD为1.52％(n=5)。
2.7 样品测定
分别取对照品溶液和供试品溶液进样测定，测
得野生山葡萄根中1含量平均为0.452 mg/g(n=3)。
参考文献：
[1] 江西新医学院编.中药大辞典(下)[M]. 上海: 人民出版社,
1997: 2125.
[2] 刘 东, 杨峻山. 葡萄科植物化学成分研究进展[J]. 中国药
学杂志, 1999, 34(10): 649-652.
[3] 赵 艳, 娄红祥. 山葡萄根化学成分研究[J]. 中草药, 2004,
35(12): 1343-1345.
[4] Baur JA, Pearson KJ, Price NL, et al. Resveratrol improves
health and survival of mice on a high-calorie diet [J].
Nature, 2006, 444(7117): 337-342.
[5] 吴 波, 张寒俊. 高效液相色谱荧光光谱法测定虎杖中
的白藜芦醇及白藜芦醇苷含量[J]. 中国医院药学杂志,
2006, 26(6): 682-685.
[6] 刘大川, 刘 强, 吴 波, 等. 花生红衣中白藜芦醇、原花色
素提取工艺的研究[J]. 食品科学, 2005, 26(7): 144-148.
[7] 向海艳, 周春山, 钟世安, 等. 虎杖中白藜芦醇的提取工艺
[J]. 2004, 35(6): 965-969.
[8] 许汉林, 孙 芸, 邵继征, 等. 正交法优化虎杖中白藜芦醇
苷提取工艺的研究[J]. 湖北中医学院学报, 2006, 8(2):
29-30.
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
B39-02　在连续酶膜反应器上NADH氧化酶催化氧化NADH的
数学模型 Findrik Z等［J Biosci Bioeng，2007, 104(4): 275］
在tris-HCl和 pH 9.0氨基乙酸–焦磷酸钠两种缓冲体系中，
通过产物(NAD+)抑制的Michaelis–Menten模型，考察来源于短
乳杆菌(Lactobacillus brevis)的NADH氧化酶的反应动力学，发
现该反应属非竞争性抑制。在连续酶膜反应器上发现该酶在驻
留时间为12和60min时强烈失活，在氨基乙酸–焦磷酸钠缓冲液
中，在更短的驻留时间酶的失活更强。初步认为酶的失活反应
是一阶形式。所建立的连续酶膜反应器的数学模型与实验结果
符合良好。模拟的数学模型同时揭示高浓度的酶(达 30 g/ml)对
维持长时间近100％稳定转化NADH是必需的。
[陈祈磊译 胡又佳校]
B39-03　快速聚合酶链式组装法(PCA)理性化全新合成内皮
细胞蛋白-C受体基因和凝血酶受体基因 Mamedov TG等[J
Biotechnol, 2007, 131(4): 379]
通过快速PCA和常规PCA方法合成完整的内皮细胞蛋白C
受体基因(EPCR-1, 612 bp)、突变的EPCR-2(缺少4 N链接的糖
基化位点，576 bp)和凝血酶受体基因(TM，1548 bp)，对合成
的全长基因进行快速PCR和常规PCR扩增，测序分析，结果发
现通过快速PCA联合快速PCR扩增法得到的DNA序列的出错几
率较常规方法的低。利用快速PCA法合成的基因不仅能够直接
表达，而且与其天然基因具有相同的表达效率。
[刘 艳译 胡又佳校]