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野巴子不同提取液体外抗菌实验研究



全 文 :初始的药物正辛醇溶液用甲醇稀释后,取 10μl进样,测药物的初
始浓度,按照公式
P =
C1V1
C0Vo - C1V1
计算表观分配系数。
P为丙酸睾酮的表观油水分配系数,C0 为丙酸睾酮在正辛
醇中的初始浓度(mg /ml) ,V0 为被水饱和的正辛醇体积,C1 为药
物分配平衡时在油相中的浓度(mg /ml) ,V1 为油相体积。结果
见表 2。
表 2 不同 pH值下的表观油水分配系数
pH C1V1 /μg P LogP
2. 0 343. 39 12. 28 1. 09
3. 0 338. 83 10. 42 1. 02
4. 0 337. 94 10. 11 1. 00
5. 0 351. 58 17. 78 1. 25
6. 0 351. 42 17. 63 1. 25
7. 0 354. 02 20. 43 1. 31
8. 0 366. 57 76. 69 1. 88
9. 0 361. 86 38. 13 1. 58
3 讨论
本实验考察了丙酸睾酮在水和不同 pH 值缓冲液中的平衡
溶解度,结果表明:丙酸睾酮为难溶性药物;pH 值对丙酸睾酮的
溶解度影响非常小。
本文在色谱条件选择上,曾采用甲醇 -水系统,在作溶解度
测定时,表面活性剂对样品峰的干扰很大,无法达到基线分离,加
入四氢呋喃后,分离效果大大提高。作丙酸睾酮表观油水分配系
数的测定时,由于水相的峰很小,测定误差较大,所以选择油相经
稀释后测定其含量,结果准确。
考察了 4 种不同类型表面活性剂对丙酸睾酮的增溶效果,发
现 3 种表面活性剂均具有增溶效果,其中 PEG - 400 的增溶效果
最差,十二烷基硫酸钠在达到临界胶束浓度时增溶效果明显,吐
温 - 80、EL - 35 的增溶效果较好,由于 EL - 35 用量少加之其具
有良好的外观和流动性,可考虑将其用于丙酸睾酮的液体制剂的
处方或透皮制剂质量考察时的溶出介质。
药物吸收需要适宜的水溶性和脂溶性,以便能透过生物膜脂
质双分子层。正辛醇 -水分配系数在预测药物定量结构一吸收
上具有重要意义。本实验对丙酸睾酮的表观油水分配系数进行
了测定,结果表明:丙酸睾酮为脂溶性药物。由于具有较高油水
分配系数值的药物大都能成功地包封在脂质体、醇质体中且具有
较高的包封率,丙酸睾酮是适合于脂质体、醇质体等剂型的理想
药物。
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收稿日期:2010-04-25; 修订日期:2011-09-16
基金项目:四川省科技计划项目(No. 2009SZ0227)
作者简介:蒋桂华(1970-),女(汉族),四川成都人,现任成都中医药大学药
学院教授,硕士学位,主要从事中药品种质量与资源开发的教学、科研工作.
* 通讯作者简介:兰志琼(1979-) ,女(汉族) ,四川成都人,现为成都中医
药大学药学院讲师,在读博士研究生,主要从事中药品种质量与资源开发
的教学、科研工作.
野巴子不同提取液体外抗菌实验研究
蒋桂华,杨 莎,兰志琼* ,赵芙蓉,陈佳妮
(成都中医药大学药学院·中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地·
中药材标准化教育部重点实验室,四川成都 611137)
摘要:目的 考察野巴子不同方式提取液(即水提取液、乙醇提取液)的体外抗菌作用。方法 测定野巴子水提取液及乙
醇提取液的最低抑菌浓度(MIC) ,研究两种不同方式提取液对绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金色葡萄球菌、表皮葡萄球
菌的抗菌作用。结果 野巴子水提取液对 104 ~ 105 CFU /ml菌量的绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金色葡萄球菌、表皮葡
萄球菌均具有较强的抑制作用;乙醇提取液对 104 ~ 105 CFU /ml菌量的大肠杆菌、金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的抗菌作
用较强,但对绿脓杆菌和沙门氏菌作用较弱。结论 野巴子水提取液及乙醇提取液均具有一定的体外抗菌作用,其中以
野巴子水提液强于乙醇提取液。
关键词:野巴子; 水提取液; 乙醇提取液; 体外抗菌作用; 最低抑菌浓度
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2012. 01. 077
中图分类号:R284. 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)01-0172-02
野巴子为唇形科香薷属植物野拔子 Elsholtzia rugulosa
Hemsl.的干燥带嫩枝的叶,主产于四川、云南、广西、贵州等地
区[1],特别是在四川和云南,资源丰富。本品味辛、性凉,具有疏
风解表、利湿、消食化积等功效,民间常用于治疗伤风感冒、腹胀
腹痛、消化不良、臃肿积滞,外用止血、敷烂疮[2]。从大量民间用
药经验看,野巴子具有类似香薷的功效,而香薷对细菌具有较强
的抑制作用。裴宝椿[3]用香薷的挥发油进行口腔抑菌试验,发
现具有明显抑制菌斑的作用。龚慕辛[4]用香薷的挥发油做抑菌
试验,发现对金色葡萄球菌、脑膜炎双球菌、绿脓杆菌有较强抑制
作用。黄彬弟、郑尚珍等[5]将野巴子精油做抑制菌类生长发育
实验,结果表明野巴子精油对细菌和真菌是不多见的防除剂。为
了考察野巴子提取液的抑菌作用,本实验对野巴子不同方式提取
液(即水提取液、乙醇提取液)进行了体外抗菌作用研究,为野巴
子药用及开发利用提供科学的参考及依据。
1 材料
1. 1 药材 实验用野巴子于 2008 - 11 采自四川省攀枝花市米易
县,经成都中医药大学药学院蒋桂华教授鉴定为唇形科植物野拔
子 Elsholtzia rugulosa Hemsl.的干燥带嫩枝的叶。
1. 2 菌种 绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金色葡萄球菌、表皮
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL. 23 NO. 1
葡萄球菌标准菌株均为成都中医药大学病原生物学与免疫学实
验室提供。
1. 3 仪器及试剂 恒温培养箱(上海市跃进医疗器械一厂)、电
热鼓风干燥箱(上海市实验仪器厂)、手提式压力蒸气灭菌锅(上
海华线医用核子仪器有限公司)、微型漩涡混合仪(WH -1 型,上
海沪西分析仪器厂)、移液枪(芬兰雷勃 Finnpipette)。琼脂粉、蛋
白胨、牛肉膏、氯化钠、0. 9% 生理盐水、0. 1mol /L盐酸水溶液、0.
1mol /L NaOH水溶液。
2 方法与结果
2. 1 菌悬液的制备 将绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金色葡萄
球菌、表皮葡萄球菌 5 株菌分别接种到普通营养肉汤中,在 37℃
恒温培养箱中培养 24 h,用生理盐水 10 倍递增稀释到 10 -4 ~
10 -5倍,得到浓度约为 104 ~ 105CFU /ml,即为供试菌悬液。
2. 2 供试品的制备
2. 2. 1 水提液的制备 取野巴子粉末 20g,用 10 倍量的水浸泡 1
h,煮沸 30 min,过滤。药渣加 8 倍水继续煎煮,煮沸 20 min,过
滤。合并两次滤液,于水浴上浓缩成浓度为 1 g /ml 的药液,即
得。
2. 2. 2 乙醇提取液的制备 取野巴子粉末 20g,加入 200 ml乙醇
溶液加热回流提取 1 h,过滤。滤液于水浴上浓缩成浓度为 1g /
ml的药液,即得。
2. 3 体外抗菌预实验 初筛法:首先用纸片法进行粗筛,取直径
为 6 mm滤纸片在各供试原液中浸泡后,分别点种在涂布有各供
试菌的平板中,37℃,24 h 培养后抑菌圈无或较小(直径 D≤10
mm) ,说明抑菌作用较弱;进一步采用二倍递增稀释浓度法检测
最低抑菌浓度。
2. 4 体外抗菌实验[6 ~ 9] 采用二倍递增稀释法,分别接种一定浓
度的绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金色葡萄球菌、表皮葡萄球
菌 5 种菌于不同稀释浓度的含药平板上,经 37℃,24h培养,观察
不同细菌的生长情况,判断供试药物的体外抑菌效果。
菌种的活化准备:供试菌种需在营养肉汤中转种、活化 2 ~
3h备用。
供试菌液的制备:取活化后的各菌种营养肉汤培养物,用灭
菌生理盐水稀释约为 104 ~ 105CFU /ml菌液备用。
含药平板的制备及接种:已知供试样品均为浓缩至含生药
1g /ml的药液,设定含药平板浓度分别为 0. 1,0. 05,0. 025,
0. 012 5,0. 006 25 g /ml……,即稀释至 10 ×、20 ×、40 ×、80 ×、
160 ×……。用移液枪取 20μl 稀释菌液点种在含药平板及普通
营养琼脂平板上;经 37℃,24h 培养后,观察各种类细菌生长情
况,记录。
2. 5 结果 体外抗菌实验结果见表 1 ~ 3。
表 1 野巴子水提取液体外抗菌效果
含药平板
C /mg·ml -1
菌种
绿脓杆菌 大肠杆菌 沙门氏菌 金色葡萄球菌 表皮葡萄球菌
营养琼脂平板
(CK)
100 - - - - - +
50 - - - - - +
25 - - - - - +
12. 5 - - - - - +
6. 25 - - - - - +
3. 125 + - + - - +
“ +”、“ -”分别表示“有”和“无”细菌生长
表 2 野巴子乙醇提取液体外抗菌效果
含药平板
/mg·ml -1
菌种
绿脓杆菌 大肠杆菌 沙门氏菌 金色葡萄球菌 表皮葡萄球菌
营养琼脂平板
(CK)
100 - - - - - +
50 - - - - - +
25 + - - - - +
12. 5 + - + - - +
6. 25 + + + - - +
3. 125 + + + + + +
“ +”、“ -”分别表示“有”和“无”细菌生长
表 3 野巴子水提取液及乙醇提取液最低抑菌浓度
菌种
水提取液及乙醇提取液的最低抑菌浓度 C /mg·ml -1
水提取液 乙醇提取液
绿脓杆菌 6. 25 50
大肠杆菌 3. 125 12. 5
沙门氏菌 6. 25 25
金色葡萄球菌 3. 125 6. 25
表皮葡萄球菌 3. 125 6. 25
从表 3 可以看出野巴子水提液和醇提液对这 5 种细菌均具
有一定的抑制作用,抑菌作用为野巴子水提液强于醇提液。其中
野巴子水提液对大肠杆菌、金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的最低
抑菌浓度最低,野巴子醇提液对绿脓杆菌的最低抑菌浓度最高。
3 结果与讨论
本实验首次以野巴子水提液和乙醇提取液对常见的绿脓杆
菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌进行体外
抗菌试验,结果表明野巴子水提取液及乙醇提取液均具有一定的
体外抗菌作用,抑菌作用以野巴子水提液强于乙醇提取液。
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