全 文 ：时珍 国医国药 1 9 9 9年第 10 卷第 n 期 L IS H IZ H E N M E D IC IN E A N D M A T E R I A M E D IC A R ES E A RC H 1 9 9 9 VO L . 1 0 NO . 1 1
活血接骨丹药效作用观察
王树荣 孙明江 郑 群 杨 军
山东中医药大学 ,济南 2 5 0 0 14
T h e R e s e a r e h o f P h a r m a e o d y n a m i e s A e t i o n s o f H u o X u e J i e G u P o w d e r o n A n im a l s
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·
K e y w o r d s C h i n e s e h e r b a l m e d ie in e ; F r a e t u r e r e e o v e r y ; A n t i一 in f la m m a t io n ; A n a l g e s ie e f f e e t
活血接骨丹 由红 花 、 苏木 、 乳香 、 没药 、 骨碎补等中药组 成 , 具
有活血化疲 , 消肿生 肌 、 续筋接骨之功效 , 临床用于治疗骨折 、 跌打
损伤等病证具有显著疗效 。 为阐明其药效作用 , 我们 进行 了以下动
物实验研究 , 为临床提供 某些基础研究方面的依据 。
1 实验材料
实验用活血接骨 丹为 水丸 制 剂 (l 备沂 市人 民 医 院提供 , 批 号
98 06 1 3 ) 将该水丸称 重 . 研钵研磨 . 加人生理盐水制备成混悬液 ,
该液 1 m l 相 当于含水丸 2 9 。 应用 时加人适量生理盐水稀释 。
实验 阳 性 对 照 药 三 七 伤 药 片 (上 海 中药 制药 三 厂 , 批 号
97 04 07 )
。 将其研磨 , 加人适量生理 盐水成混悬 液应用 。
碱性磷酸酶 、 血清钙 、 血清无机磷 测定药盒 (南 京建成 生物研
究所提供 ) 。 C D L 一 1 电磁 血液流量计 (上海 医疗器械厂 ) 。 7 21 分光
光度计 , 山东高密分析仪 器厂 。 超级 恒温 水浴 。
实验用昆 明系小白 鼠 、 W is at r 系大白鼠 、 杂色家兔 (均 由山东
中医药大学实验动物室提供 ) ;实验动物 均采用消化道给药途径 ,
给药容重分别为 0 . 2 m l / 1 0 9 , 1 0 m l / k g 以及 5 m l / k g 。
实验数据采 用统计学 t 检测法进行组间或 自身显著性差异 比
较 。
2 实验方法与结果
2
.
1 抗二 甲苯致小 鼠耳廓炎症实验 : 健康小 鼠 4 0 只 ,体重 18 一
2 9
, 雌雄各半 , 随机均分为 4 组 , 分别灌 胃以生理盐水 , 活血接骨
丹以及三七伤药片 。 药后 1 . s h 将二 甲苯 (均 0 . 1 m l) 均匀涂抹在
每只动物右耳廓内外 , 以引起局部炎症 。 致炎 Z h 后将动物脱颈椎
处死 , 剪下 动物左右 两耳廓 , 用 打孔器制成相 同部位 的左右 耳片
(直径 g m m ) , 分析天平称重 , 右左耳 片重量差值即反映 炎症反应
的强弱 。 结果见表 1 。
又交又立夕交夕泣父应 望应戈应义 ` 又毛夕立又交又亚夕 亚交应父亚夕应 又立又亚夕交又交又亚又驻又立又友又交又立又立又江又交又立父立又夏又亚父应夕立又立又立又立又丈又亚父立又江又丈又立又亚
甲醇 , 摇匀 , 过滤 , 弃去 初滤 液 , 精密 吸取续 滤液 20 m l , 置蒸发皿
中 . 水浴蒸 干 , 加热水 20 : 1 , 转 人分液漏 斗中 , 凉后加 乙醚 振摇 , 萃
取 3 次 , 15 m l/ 次 。 合并萃取液 , 再用 5 %碳酸氢钠液萃取 3 次 , 15
m l/ 次 。 合并碳酸氢钠液 , 加盐酸酸化 . 再用 乙 醚萃取 3 次 , 15 m l/
次 。 合并萃取液于水浴上蒸干 , 残渣加 5 0 % 甲醇溶解 , 转移到 s m l
量瓶 中 , 定容 至刻度 . 摇 匀 . 用微孔 滤膜 滤过 , 滤液作 为供试品溶
液 。 另取当归饮 片粗粉 1 9 . 同法操作 ,得 当归饮 片供试液 。
2
.
3 色谱条件 : Y W G 一 C l : 4 . 6 只 2 5 0 : n m 色谱柱 , 乙睛 一 0 . 0 0 3 2
m ol / L 四 丁基氢氧化钱 ( 1 7 : 8 3) 用 10 %磷 酸调 夕2了一 2 . 2 , 流 速
1
.
0 m l /m i n
,月 = 3 2 0 n n l , 柱温 4 0 C 。
2
.
4 标准曲线的绘制 : 准确吸取对照 品溶 液 2 . 4 , 6 , 8 川 , 进样 , 以
峰面积对阿魏酸含量进行线性 回归 , 得 回归方程 : y 一 “ 96 . 15 X
一 2 3 4 7 . 3 0 , r 一 0 . 9 9 9 9 。 结果 表明 : 阿魏酸在 0 . 0 3 6 6一 0 . 1 8 3 0 拜g
范 围内具有 良好 的线性关系 。
2
.
5 样 品的含量测定 : 分取当归药材及饮片 的 3 份样品 , 依法制
备供试品溶液及对照 品溶液 ,分别测定峰 面积 。 结果见表 1 。
表 1 当归药材及其饮片中阿魏酸的测定 ( % )
阿魏酸含量 _ . . _样 品 一一节不一一一一污一一一丁一- 平均含量当归药材当归饮片 0 0 2 1 50 . 0 1 0 9 0 . 0 2 4 50 0 1 2 4 0 . 0 2 0 50 . 0 1 0 2 0 . 0 2 2 20 0 1 1 2
3 小结与讨论
通过测定当归药材及其饮片中阿魏酸的含量 , 结果表明 : 当归
药材经过加工而成饮片过程中阿魏酸的量有很大损失 , 损失近一
半 。 因此建议生产中以原药材投料为好 , 以确保药品质量 。
致谢 : 本文在研究过程 中 , 得 到 了刘 宝玲老师的指 导与支持 ,
在此表示 惑谢 ! ( 1 9 9 9一 0 5一 0 4 收稿 )
8 0 4
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2
.
2 热板镇痛实验 :健康雌性小 白鼠 ,体重 18 一 2 9 。 调节超级恒
温水浴使其温度为 5 士 0 . 5 ℃ , 将动物放置热板上 , 挑选在 25 5 内
有舔后肢动作 (痛觉反应 ) 的动物为合格动物 , 该反应 时 间为药前
正常痛阂值 。 挑选合格动物 4 0 只 , 随机分为 4 组 , 动物给药均 同实
验 2 . 1 。 药后 l h 、 Z h 重复动物 以上测定 , 记录其痛觉 反应时间 。 结
果见表 2 。
表 1 抗炎实验结果
Z h 分别 重复以上测定 。 结果见表 5 。
表 5 活血接骨液对家兔股动脉血流 l 的影响
组 别 剂 量 股动脉血流量
(m l / m i
n ,牙 土 s )
正 常 药后 l h 药后 2 卜
对照组 等容量 4 . 23 士 0 . 6 4
.
1 7士 0 . 3 0
(一 1 . 4% )
活血接骨液 4 . 8 9 / kg 5 . 1 7士 0 · 7 8 3士 22 8 肠
3
.
3 3士 0 . 8 6
( 一 2 1 . 3% )
7 4 0士 2 . 9 3
( 4 3 % )
左右耳片重量差
组 别 剂 子
( m g
, 牙 士 `
’ 肿胀抑制率
( % )门一62879
对照组
活血接骨丹
活血接骨丹
三七伤药片
等容量
2
.
4 9 / k g
4
.
8 9 / k g
1 6
.
3 2士 2 .
1 3
.
2 1士 1 .
1 2
.
4 2士 1 .
::
与对照组 比较 * 尸 < 0 . 01
表 2 热板镇痛实验结果
组 别 剂 量 痛 值
(
5 . 见 士 s )
药 前 药后 l h 药后 Z h
对照组 2 1 . 2士 6 . 0 1 9
.
7士 5 . 6
( 一 7 . 1 % )
2 0
.
4士 6 . 7
(一 3 . 8% )
活血接骨丹 20 . 2士 4 . 9 2 6
.
7士 10 . 2 苍 苍
( 3 2
.
2 % )
活血接骨丹
三七伤药片
等容量
2
.
4 9 / k g
4
.
8 9 / k g
4 2 m g / k g
19
.
6土 5 . 2 2 0
.
1士 8 . 飞
( 2
.
6 % )
1 9
.
4士 5 . 2 1 6
.
7士 6 . 4
(一 1 3 . 9 % )
2 5
.
1士 9 . 4 , 资
( 2 4
.
2% )
2 3
.
8士 7 . 4
( 2 1
.
4 % )
1 7
.
2土 4 0
( 一 1 1 . 3 % )
注 : 括号 内数字为痛阐增减百分率与对照组 比较 * * 尸 < 0 . 05
2
.
3 活血接骨丹对股骨骨折大 鼠的作用 : 健康雄性大 鼠 37 只 , 体
重 1 6 0 9 左右 , 随机分为 5 组 。 其中 l 组为正常对照组 ,余 4 组为实
验组 。 实验第 l d ,将动物 乙醚浅麻醉 , 用适当外力造成动物左后肢
股骨骨折 (闭合性骨折 ) , 骨折局部用敷料及小夹板适当外 固定 。 自
实验第 Z d 起 , 4 组动物分别灌 胃生理盐 水 、 活血接骨丹及 三七伤
药片 , 1 次 d/ , 连续 30 d 。 实验 32 d , 将动物断头处死 , 取血 ,分离血
清 , 按药盒说明书测定 血清碱性磷酸酶 ( A L P ) 、 血清无机磷 ( P )及
钙 ( C a) 。 结果见表 3 。 剖取 5组动物左后肢骨折处组织 , 常规固定 ,
脱钙 , H E 染色 , 作病理组织学检测 。 结果见 表 4 。
表 3 活血接骨丹对骨折大鼠血清 A L P 、 P 、 C a 含 l 的影响 (戈 士 , )
组 别 动物数
(只 ) 剂 量
A L P
(金 氏单位八 0 0 m l ) C
a ( m m o l / L ) P (m m
o l / L )
对照组 8 等容量 7 . 6 6 士 1 . 7 9 1 . 1 8 上 0 . 3 8 2 . 2 6士 0 . 5 0
活血接骨丹 7 2 . 4 9 / k g 6 . 6 8 士 1 . 6 5 1 . 5 5士 0 . 2 7 , 2 . 5 9 士 0 . 3 0
活血接骨丹 8 4 . 8 9 / k g 4 . 3 1 土 1 . 4 3 资 2 . 5 8 士 0 1 7 书 1 . 9 6 土 0 . 4 6
三七伤药片 7 今Z m g / k g 1 3 . 4 6 士 1 9 . 5 份 1 . 3 8 士 0 , 2 4 2 . 12 土 0 . 3 1
正常对照组 7 一 1 3 . 1 4 士 3 . 9 4 甘 1 . 7 2士 0 , 2 3 “ 1 . 6 0 士 0 . 4 6 .
, 与对照组 比较 P < 0 . 01
表 4 病理检测结果 (光镜 )
组 别 结 果
骨折对照组
小剂量活血
接骨丹组
大剂量活血
接骨丹组
三 七伤药组
正常对照组
骨折 区间充质纤维化区多见软骨 区较多 , 早晚期软骨化骨区较
少 , 骨小梁较少 , 骨母细胞较多
骨折 区间充质纤维组织转化为软骨 、 软骨化骨过程 以及骨母细
胞分化过程均快于骨折对照组骨折痊愈过程优于上述对照组
多数动物病理 改变 近于小剂量组 ,镜下形态 优于小剂量组 ,但定量上难以 !戈别
病理组织改变类似于小剂量组
骨膜 、 骨小梁 、 间充质 、 软骨化区等无 异常改变
2
.
4 活血接骨丹对麻 醉家兔股动脉血流量的 影响 :健康家兔 , 体
重 Z k g 左右 . 雄雌 皆可 . 耳缘静脉注 射戊 巴 比妥钠 3 o m g / k g 麻
醉 , 仰卧固定 , 解剖动物左后 肢腹 股沟处 , 分离股动脉 。 调节 C D L
一 l 型电磁血液流量汁 . 频 率响应 l o C / S 增益适 当 ( 1/ 4 至 2 ) , 将
勾型探 头置于股 动脉上 。 记录动物正常股动脉血流量 。 分别 给动物
胃内注射生理盐 水或 活血接骨液 , 容量均为 s m l/ k g 。 给药 后 l h ,
注 :括号 内数字为血流量增减百分率 。 给药前后 自身比较未见显著性差异 ( P >
0
.
0 5 )
2
.
5 活血接骨丹急性毒性测 定 : 健康小 鼠 20 只 ,体重 18 ~ 2 9 ,
雄雌各半 。 实验第 1d , 给动 物灌 胃 2 0 0 % 活 血接骨丹 , 0 . 2 m l/
10 9
,
1 次 6/ h , 连续 3 次 。 此后连续观察 7 d 。 实验期间动物无死
亡现象出现 , 亦未见动物行为 、 食欲 、 背 毛 、 粪便等方面 出现异常 。
由于该给药途径无法求出小 鼠对该方药的半数致死量 , 只能据此
计算动物对该方药的最大耐受量 ( 4了Z口 )为大于 120 9 k/ g 体重 ,
小 鼠耐受倍数为大于 3 60 倍 。 表明该方一药 口 服情况下急性毒性作
用极小 。
3 小结
本实验工作中采用 消化 道用药途径 , 该与临床用药方式相 同 ,
而且所采用 活血接骨丹 的大小 两种剂量较为适宜 (分别相 当于人
服用量 的 7 . 27 倍及 14 . 54 倍 一 以 k g 体 重计算 ) ,故 有利于说 明该
方药 的临床疗效 。
实验结 果表明 , 给动物灌服活血接骨丹后 , 可明显拮抗二 甲苯
所致动 物耳廓浮肿炎症 (尸 < 0 . 0 1 ) , 呈现 良好 的抗炎作用 , 该方药
大小剂 量的炎症肿胀抑制率分别为 23 . 5% 及 1 8 . 6% ; 同时呈现 良
好的量效反应关系 。 热板镇痛实验显示 ,该方药具有较好 的镇痛作
用 , 动物用药后其痛阂有 一定 的提高 , 尤以小剂量活血接骨丹作用
更突出 , 药后 l h 其痛闭 即可提高 3 2 . 2% ; 大剂量该方药作 用较
差 , 尽 管药后 Z h其痛 阑 提高 2 1 . 4 % , 但统计学 未见 显著性 差异
(尸 > 0 . 0 5 ) , 造 成这种量效反应关系不规律的原因尚不清楚 ,但有
一点应该肯定 ,该方药具有一定的镇痛作 用 。
我们利 用 闭合性股骨骨折大鼠模型 来观察 活血 接骨丹 的作
用 。 实验结果显示 , 给骨折大 鼠连续灌服 活血接骨丹 , 可使动物血
清 A L P 下降 , 血清钙水平升高 (尸 < 0 . 0 1 ) , 血清无机磷含量改变
不 明显 ;病损 区组织形态检测 (光镜下 )显示 , 用药后骨折痊愈过程
明显快于骨折对照组 (见 表 4) 。 用药组与正 常对照组相 比较 可以
看 出 , 血清钙 、磷水平 两组 比较接近 ,但用药组血 A L P 水平明显较
低 (尸 < 0 . 0 1 ) , 可能 系骨骼组织 的成骨 过程 明显大于破骨过程所
致 。 在活血接骨丹的作 用下 , 家兔股动脉血流量在药后 l h 、 Z h 时
分别增加 28 环及 43 写 , 尽管统计学 未见显 著性差异 (可能系标准
较大 ) , 但该方药扩张股动脉 , 改善血流动力学 , 增加后肢组织血液
灌注量 的作 用 ,无疑是有助于骨折组织的愈合的 。
急性毒性实验表 明 , 给小鼠灌服 活血接骨丹 12 0 9 / k g 体重 ,
动物无急性毒性反 应 , 经计算小鼠对该方药 的耐受倍数大 于 36 。
倍 , 表明该方药急性毒性作用极小 , 可在一定程度上保证该方药 临
床应用 的安全性 。
综 上所述 , 活血接骨丹给动 物灌服 后 , 可产生 良好 的抗炎作
用 ; 具有较好 特 异 性镇 痛 作 用 ; 可 加 速股 骨 骨折大 鼠的 骨 愈
合 过 程 , 同 时 降 低血 A l _ P 升 高 血 清 C a ; 可 扩 张 股 动 脉 , 增
加股动脉血 流量 ; 以上药效作 用均说明该方药有 利于 治疗骨折等
病证 。
( 19 9 9一 04一 0 6 收稿 1 9 9 9一 0 8一 1 1 修回 )
8 0 5