全 文 ：黄花倒水莲抗氧化活性研究
黄　锋1 , 2 ,林黎琳2 ,胡娟娟1 ,刘艾林1 ,肖培根2 ,杜冠华1＊
1中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所国家药物筛选中心 , 北京 100050;
2中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所 , 北京 100094
【摘　要】　目的:阐明黄花倒水莲(Polygala fallax Hemsl.[ P.aureocauda Dumn] )的抗氧化活性及有效部位 ,
为进一步的活性追踪及临床应用提供理论依据。方法:从广西采集黄花倒水莲的根部分 ,经植化手段分离得到
7 个化学性质不同的组分(PFE1 、PFE2、PFE3、PFB4 、PFB5 、PFB6、PFW7)。用比色法研究了各组分还原三价铁离子
及清除脂性自由基 DPPH 能力 ,采用化学发光法观察各组分清除羟自由基和超氧阴离子的活性。结果:PFE3 、
PFB4 对 DPPH 、羟自由基 、超氧阴离子的清除作用 EC50分别为 92.44 , 42.29 , 5.50;96.33 , 38.26 , 6.21μg·mL-1。结
论:黄花倒水莲各组分均有一定的清除自由基作用 ,这可以用来解释其在传统应用中的抗炎 、抗衰老作用。
【关键词】　黄花倒水莲 ,抗氧化 , 自由基
【中图分类号】　R965　　【文献标识码】　A　　【文章编号】　1672-3651(2006)04-0291-04
【收稿日期】　2005-01-20
【基金项目】　国家自然科学基金资助项目(No.3001161940);国
家“十五” 重大科技专项 “创新药物和中药现代化” (NO:
2004AA2Z3782)
【＊通讯作者】　杜冠华:教授 ,博导 ,中国医学科学院中国协和医
科大学药物研究所副所长 , 中国药理学会秘书长 , Tel:010-
63165184 , Fax:010-63017757 , E-mai l:dugh@imm.ac.cn
　　黄花倒水莲(Polygala fallax Hemsl.[ P.aureo-
cauda Dumn])又名假黄花远志 、黄花参 ,为远志科
远志属植物[ 1] ,主要分布于江西 、福建 、湖南 、广
东 、广西 、贵州 、云南等地 ,是广西民间少数民族常
用药 ,以根 、茎 、叶入药。其味甘 、微苦 、性平 ,具补
益气血 、健脾祛湿 、活血化瘀和调经等功效[ 2-4] ,用
于治疗病后体虚 、腰肌劳损 、风湿关节痛 、跌打损
伤 、急慢性肝炎 、子宫下垂和月经不调等症[ 5] 。
近年来已有一些关于黄花倒水莲化学成分和
药理活性的报道[ 6-10] ,但是对黄花倒水莲的传统应
用尚缺乏系统的实验研究。本文在植化分离研究
的基础上 ,对其各种组分进行了抗氧化活性的探
索 ,试图阐明其药理活性及有效部位 ,为进一步的
活性追踪及临床应用提供依据 。
1　材料与方法
1.1　试　剂
DPPH 、维生素 C(Vit C)、NADH 、鲁米诺为美国
Sigma公司产品 ,丹酚酸A由中国医学科学院药物
研究所黎莲娘教授惠赠 ,其它试剂均为国产分析
纯。
1.2　植化分离
黄花倒水莲(Polygala fallax Hemsl.[ P.aure-
ocauda Dumn]),2001年 10 月采自广西 ,经肖培根
研究员鉴定 ,植物标本存放于中国医学科学院药
用植物研究所标本馆 ,编号为 PF200110 。
黄花倒水莲根经干燥粉碎后 ,先用 95%EtOH
回流提取 2次 ,每次 2 h ,过滤 ,滤液浓缩 ,得到组
分 PFE1(含量为生药的 7%);残渣继续用 50%E-
tOH提取 2次 ,每次 2 h ,过滤 ,滤液浓缩 ,得到组分
PFE2(含量为 3%);将 PFE1和 PFE2两部分合并 ,
溶于水中 ,乙酸乙酯萃取 3次 ,乙酸乙酯层浓缩得
到组分PFE3(含量为 0.8%);水层继续用正丁醇
萃取 3次 ,将正丁醇萃取得到的物质与 D101大孔
树脂混合装柱 ,依次用 30% EtOH 、50% EtOH 及
90%EtOH洗脱 ,分别得到 PFB4(含量为 0.3%)、
PFB5(含量为 1.2%)及 PFB6(含量为 0.1%)。萃
取后的水层干燥得组分 PFW7(含量为 6.9%)。
根据文献[ 11 ,12]等报道 ,黄花倒水莲中主要含
有 xanthone 、皂苷和寡糖酯等三类成分 ,采用 95%
及50%的 EtOH 加热提取 , 能把主要成分提取完
全。通过进一步的植化分离 , xanthone 类成分主要
在 PF-EtOAc 部分富集 , 皂苷类成分主要在 PF-
中国天然药物　2006年 7月　第 4卷　第 4期 Chin J Nat Med　July 2006　Vol.4　No.4　291　
BuOH部分富集 ,糖酯类成分则分布在 PF-BuOH和
PF-H2O部分。
1.3　抗氧化活性研究
1.3.1　还原 Fe3+能力 　待测样品还原能力的测
定根据文献方法改进[ 13] 。
以去离子水分别配制 2mmol·L-1的FeCl3和邻
菲罗林溶液 , 于实验前将二者按 1∶1 体积混合 。
混合液加入96孔细胞培养板 ,90μL/孔 ,然后加入
10 μL待测样品 ,使终浓度分别为 10 μg·mL-1 、100
μg·mL-1 ,阳性对照组加入 Vit C ,空白对照组以去
离子水代替待测样品 。振荡混匀后于室温下静置
30 min ,用可见/紫外全波长分光光度计测定各孔
吸光度值 A ,测定波长 516 nm。
1.3.2　清除DPPH能力　DPPH 清除实验参考 Xu
SH等方法并稍作修改[ 14 , 15] 。精确称量一定量的
DPPH ,用无水乙醇溶解配成 6.25×10-4 mmol·L-1
浓度的溶液 ,加入 96孔细胞培养板 ,190μL/孔 ,加
入10 μL待测样品 ,阳性对照组加入 Vit E ,空白对
照组以去离子水代替待测样品 。用封板膜封板 ,
室温下避光静置 30min。用可见/紫外全波长分光
光度计(Zenyth 200rt)测定各孔吸光度值 A ,测定波
长517 nm 。
DPPH 清除率(%)=(A空白-A样品)/ A空白×100%
A空白:空白对照组光吸收值;A样品:加样品组光吸收值。
1.3.3　清除羟自由基　本实验采用 Cu2+-H2O2-
Vit C体系来产生羟自由基[ 16-18] ,反应体系中含:
邻菲罗林 100 μmol·L-1 , CuSO4 50 μmol·L-1 ,Vit C
100 μmol·L-1 ,H2O2 0.06%。阳性对照组加入丹酚
酸A ,空白对照组以去离子水代替待测样品。在
加入H2O2启动反应后 ,立即以 Topcount化学发光
测定仪测定发光强度值(每分钟脉冲数 CPS),测定
温度 19.1 ℃,每孔计数 3秒 。按下式计算样品对
羟自由基清除率 。
羟自由基清除率(%)=(CPS空白-CPS样品)/ CPS空白×100%
CPS空白:空白对照组化学发光强度值;CPS样品:加样品组化
学发光强度值。
1.3.4　清除超氧阴离子　采用鲁米诺增强化学发
光法测定NADH-PMS体系生成的超氧阴离子[ 19-21] 。
实验 反应 总体 积为 100 μL , 内 含:NADH 73
μmol·L-1 ,硫酸甲酯吩嗪(phenazine methosulphate
PMS)15μmol·L-1 , luminol 100 μmol·L-1 ,硼砂:盐
酸缓冲液(0.05 mmol·L-1 ,pH 8.91)及不同浓度的
样品 。以 0.1 mol·L-1的NaOH 溶液配制 0.1 mol·
L
-1的鲁米诺储存溶液 ,检测前用去离子水将其稀
释为 1×10-4mol·L-1。将待测样品及各反应试剂
加入 BMG不透明 96孔板 ,反应由 PMS引发 ,立即
测定发光强度 CPS 值 ,测定温度 19.1 ℃, 每孔测
定 3秒 。超氧阴离子的清除率按下式计算:
清除率(%)=(CPS空白-CPS样品)/CPS空白×100%
CPS空白:空白对照组化学发光强度值;CPS样品:加样品组化
学发光强度值。
2　结　果
2.1　还原 Fe3+的能力
由表 1可知 ,黄花倒水莲各组分都表示出一
定的抗氧化活性 , PFE3 、 PFB4抗氧化活性大于其
他组分的活性 ,但较维生素 C的抗氧化活性弱。
2.2　清除 DPPH活性
黄花倒水莲各组分对稳定脂性自由基 DPPH
具有清除作用。PFE3 、PFB4对 DPPH 的清除作用
强于其他组分 ,但其活性弱于相同浓度的维生素
E。结果见表 2。
Table 1　Reduction activity to Fe3+ of seven extracts from
root of Polygala fallax Hemsl(n=5 , x±s)
Ext racts 10μg·mL -1(OD) 100μg·mL-1(OD)
PFE1 0.066 2±0.003 6 0.266 6±0.011 6
PFE2 0.057 0±0.002 6 0.176 6±0.025 5
PFE3 0.087 2±0.001 5＊＊ 0.428 0±0.021 5＊＊
PFB4 0.1012±0.004 0＊＊ 0.5346±0.037 1＊＊
PFB5 0.0554±0.009 8 0.1772±0.013 1
PFB6 0.0706±0.004 0 0.2360±0.019 4
PFW7 0.0534±0.004 2 0.1790±0.017 5
Vit C 0.3690±0.014 0 0.9310±0.006 0
Control 0.044 8±0.007 8 0.044 8±0.007 8
＊＊P<0.01 vs control
2.3　清除羟自由基的活性
黄花倒水莲在 phen-Cu2+-H2O2-Vc体系中 ,各
组分对羟自由基均有一定清除作用 。PFE3 、 PFB4
组分对羟自由基清除活性强于其他组分。但其清
除羟自由基活性弱于丹酚酸 A。结果见表 2。
2.4　清除超氧阴离子活性
黄花倒水莲各组分均对超氧阴离子表现出一
定的清除作用 。如表2所示 ,PFE3 、PFB4组分对超
氧阴离子清除活性强于其他组分 ,但其清除超氧
阴离子活性弱于丹酚酸 A。
292　　Chin J Nat Med　July 2006　Vol.4　No.4 中国天然药物　2006年 7月　第 4卷　第 4期
Table 2　DPPH、hydroxy radical and superoxide anion scav-
enging activity of seven extracts from root of Polygala fallax
Hemsl(n=4 , x±s)
Extracts
DPPH
(EC50μg·mL -1)
hydroxy radical
(EC50μg·mL-1)
superoxide anion
(EC50μg·mL-1)
PFE1 155.00±11.19 71.48±2.86 7.51±0.11
PFE2 118.71±2.22 145.26±0.93 18.39±2.65
PFE3 92.44±9.80 42.29±1.35 5.50±0.07
PFB4 96.33±4.23 38.26±1.18 6.21±0.13
PFB5 146.31±11.35 73.46±1.09 13.18±4.06
PFB6 151.31±18.04 60.47±1.17 10.29±2.08
PFW7 342.46±28.83 59.99±1.08 20.91±3.16
Vit E 834.01±12.42 　　　— 　　　—
Sal A 1.34±0.02 2.03±0.20 0.22±0.01
3　讨　论
黄花倒水莲在民间有广泛的应用 ,并且在国
内有丰富的资源 ,开发前景良好。但对其研究有
限 ,特别是并未进行系统的药理学研究 ,对其临床
应用缺乏科学的实验支持。本文在对其植化分离
的基础上 ,进行了初步的药理学活性探讨 ,证明黄
花倒水莲具有较强的抗氧化作用。
黄花倒水莲各组分在高浓度时可还原三价铁
离子为二价铁离子 ,对DPPH 、羟自由基 、超氧阴离
子自由基均有一定的清除作用 ,且对超氧阴离子
的清除作用选择性较强 。在分离得到的 7个组分
中 ,PFE3 、PFB4组分无论还原能力大小还是清除
自由基作用都强于其他 5个组分 。在某些病理情
况下 ,无论何种原因使这些活性氧自由基代谢失
衡 ,其含量就升高 ,脂质过氧化水平也升高 ,这种
不平衡会对机体造成损伤 ,引发多种疾病 ,包括癌
症和炎症等。
黄花倒水莲在传统应用中的抗炎 、抗衰老作
用可能与其对自由基的清除作用有关 ,其活性成
分可能主要集中在 PFE3 、 PFB4组分 。这不仅为
黄花倒水莲的临床应用提供了理论依据 ,并且为
进一步提取单体活性化合物 ,详细阐明黄花倒水
莲的作用机制提供了研究思路 。
致　谢　黎莲娘教授提供丹酚酸 A。
参 考 文 献
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中国天然药物　2006年 7月　第 4卷　第 4期 Chin J Nat Med　July 2006　Vol.4　No.4　293　
Antioxidant Effect of Polygala fallax Hemsl.
HUANG Feng1 ,2 , LIN Li-Lin1 , HU Juan-Juan1 , LIU Ai-Lin1 , XIAO Pei-Gen2 , DU Guan-Hua1＊ ,
1
Institute of MateriaMedica , Chinese Academy of Medical Sciences /Peking Union Medical College , Beijing 100050 ;
2Institute of medical plant , Chinese Academy of Medical Sciences / Peking Union Medical College , Beijing 100094 ,
China
【ABSTRACT】　AIM:Polygala fallax Hemsl.is a widely-used folk medicine in China.Our work provides theoretical evidence for tra-
ditional application of Polygala fallax Hemsl.METHODS:Seven extracts were isolated from the root of Polygala fallax Hemsl., and
were researched for the scavenging activity to DPPH , superoxide anions and hydroxy radical , and reducing effect on Fe3+ in vitro.RE-
SULTS:PFE3、 PFB4 had scavenging activity to DPPH , hydroxy radical and superoxide anions , with EC50:92.44 , 42.29 , 5.50;96.33 ,
38.26 , 6.21 μg·mL-1 respectively.CONCLUSION:All extracts exert distinct antioxidant effects in vitro.It is suggested that traditional
application of Polygala fallax Hemsl.in China may be related with its antioxidant activity.
【KEY WORDS】　Polygala fallax Hemsl;Antioxidant;Free radical
【Foundation Item】　This project was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.3001161940)and national
high technology researchment and development program of China(2004AA2Z3782).
·信　　息·
中国药学会关于推荐第九届“吴阶平医学研究奖
-保罗·杨森药学研究奖”药学专业候选人的通知
□宗旨
☆激励广大医药卫生科技工作者发扬严谨治学 、求实创新精神 ,推动人才培养 , 促进我国医药科研事业的发展;
☆表彰 、奖励取得突出成就的医药工作者。
□评奖条件
☆中华人民共和国公民;
☆在医药院校 、科研机构 、医药卫生行业担任全职工作;
☆对推动医药事业发展有杰出贡献;
☆热爱祖国 ,积极为国家医药卫生事业服务 ,有高尚的社会公德和职业道德;
☆年龄在 55周岁以下。
□奖项
“吴杨奖”每两年评选一次。每届设奖学科由专家委员会提议 ,管理委员会批准。每届各专业领域分别设立一
等奖 1名 、二等奖 2名 、三等奖 3名。
本届吴杨奖评选专业领域为药学 、神内 、流行病学 、骨科和运动医学等 5 个专业 , 其中 , 药学专业(应用药理和药
物流行病)候选人的推荐由中国药学会负责。
为专家评选奖项的需要 ,每推荐 1 名候选人需交评审费 400 元。汇款请务必注明吴杨奖评审费。
开户名称:中国药学会 , 开户银行:中国银行总行 , 银行帐号:00134318094001。
□申报材料及截止日期
推荐表(请在中国药学会网站 http://www.cpa.org.cn 下载)一式八份(可以复印), 于 2006 年 7 月 31 日前报送至
中国药学会 ,同时通过电子邮件或磁盘发送至中国药学会学术部孙文虹收。
□联系方式
联系人:孙文虹 、鲁毅 、王爱国
地　址:北京市朝阳区建外大街四号建外 SOHO九号楼 18 层　　　　邮　编:100022
电　话:010-58699275-819/820/818 传 真:010-58699125
E-mail:sunwenhong2002@163.com;yxhwag@cpa.org.cn
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