全 文 ：第 31 卷 第 6 期 高 师 理 科 学 刊 Vol. 31 No.6
2011 年 11 月 Journal of Science of Teachers′College and University Nov. 2011
文章编号：1007-9831（2011）06-0059-03
薄层分离-分光光度法测定夹竹桃枝中
三萜类化合物的质量分数
孟繁旭1，白丽明１，马玲1，安东政义2
（1. 齐齐哈尔大学 化学与化学工程学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006；2. 日本新澙大学，日本 新澙 950-2181）
摘要：为测定夹竹桃中总三萜的质量分数，以齐墩果酸为对照品，5%的香草醛-冰醋酸溶液和高
氯酸为显色剂，采用薄层色谱分离-分光光度法在550 nm波长处测定样品吸光度．用正交试验法优
化了显色反应条件，适宜的展开剂组成为氯仿∶丙酮=10∶3，对照品在10~200μL/mL范围呈良好
线性关系，其回归方程为Y=0.007 0C+0.031 7，r=0.998 6．夹竹桃中总三萜的质量分数为1.01%．该
方法适合夹竹桃中总三萜的质量分数测定，操作简单，灵敏度高且比较准确．
关键词：夹竹桃；三萜类化合物；分光光度法；薄层色谱
中图分类号：R284.2 文献标识码：A doi：10.3969/j.issn.1007-9831.2011.06.020
Quantitative analysis of triterpenoids from the bark of Nerium oleander L by
thin layer chromatography-spectrophotometry
MENG Fan-xu1，BAI Li-ming1，MA Ling1，ANDO Masayoshi2
（1. Chemistry and Chemical Engineering Institute，Qiqihar University，Qiqihar 161006，China；
2. Niigata University，Ikarashi 2-8050，Niigata 950-2181，Japan）
Abstract：Objective to determination the triterpenoids content in the bark of Nerium oleander L．Under the
experimental conditions including oleanolic acid as the reference．5% vanillin-acetic acid and perehloric acid as
color developers ， the content of triterp-enoids in Nerium oleander L was determined by the thin laver
chromatographv-spectrophotometric method at 550 nm．The condition was optimized by orthogonal design．The
results showed that chloroform：acetone=10∶3 as developer，the calibration curve was linear（r=0．9986）in the range
of 20~200μL/mL，and the regression equation was Y= 0．007 0C + 0．031 7．The content of triterpenoids in the bark
of Nerium oleander L was about 1.01%．The spectrophotometry is suitable for the determination of total triterpenoids
from Nerium oleander L．This method is convenient．stable and reproducible．
Key words：Nerium oleander L；triterpenoids；spectrophotometry；thinlayer chromatography
夹竹桃（Nerium oleander L.）是夹竹桃科，夹竹桃属观赏植物．研究发现，夹竹桃中含有多种具有广
泛药理活性和生物活性的化合物，如三萜、孕甾烷、强心苷等[1-2]．近年来，在抗肿瘤药物筛选过程中，发
现某些植物中的萜类物质具有良好的抗肿瘤作用，可以促进巨噬细胞和脾细胞分泌TNF，增加巨噬细胞的
细胞毒活性，提高机体的非特异性免疫功能[3]．为了充分利用夹竹桃这类药用植物，本实验以齐墩果酸为

收稿日期：2011-09-07
基金项目：教育部留学回国人员科研启动基金（2009-36-1341）；黑龙江省留学归国科学基金（LC201008）
作者简介：孟繁旭（1986-），男，辽宁本溪人，在读硕士研究生，从事天然产物分离研究．E-mail：mengfanxu6666@163.com
通讯作者：白丽明（1968-），女，黑龙江齐齐哈尔人，教授，博士，从事天然产物化学研究．E-mail：blm68@163.com
60 高 师 理 科 学 刊 第 31 卷
对照品，采用薄层色谱分离-分光光度法首次测定夹竹桃植物中总三萜质量分数，采用正交试验法优化了
香草醛高氯酸法测定夹竹桃中三萜总质量分数的显色反应条件，为夹竹桃属植物的开发利用提供基础数据．
1 实验仪器与方法
1.1 试剂与仪器
夹竹桃枝（采自江苏太仓），齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所提供），硅胶G（青岛海洋
化工厂），冰醋酸，香草醛，高氯酸等均为分析纯．
T6新世纪紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），Mettler AE240电子天平，KQ—400DB
型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），YOKO—BD薄层电动点样仪（武汉药科新技术开发公
司）．
1.2 实验方法
1.2.1 对照品溶液的配制 称取齐墩果酸标准品 1.0 mg，加甲醇定容至 10 mL，得到 1.0 mg/mL 的标准溶液．
1.2.2 展开剂的选择 取经活化的 0.5%羧甲基纤维素钠-硅胶 G 薄板，用微量取样器取液点样，采用不同
的展开剂进行薄层层析．显色剂为香草醛∶乙醇∶浓硫酸=4.0∶100.0∶2.5[4]，100℃烘箱中 10 min 显色，
研究不同组成展开剂的分离效果．
1.2.3 测定方法 按照 1.2.2 的方法薄层分离后，刮取与红紫色部分相对应的样品部分的条带，用甲醇为溶
剂，200 W 超声提取，洗脱 3 次，每次 10 min，洗脱液加入到具塞试管中，水浴蒸干溶剂后，加 0.2 mL 5%
香草醛-冰醋酸溶液和 0.8 mL 高氯酸，60℃反应 15 min，冰水冷却，加冰醋酸定容至 5 mL，在 550 nm 测定
吸光度．
1.2.4 供试样品的制备方法 称取 3 份干燥粉碎后的夹竹桃枝 5 g，分别加入 40 mL 溶剂（80%乙醇，95%
乙醇，甲醇，丙酮，氯仿，5% Na2CO3），超声 30 min，过滤，再加 40 mL 溶剂超声 30 min，合并 2 次滤液，
减压浓缩，甲醇定容 25 mL．
2 实验结果
2.1 展开剂的选择
对不同组成和配比的展开剂进行比较后发现，氯仿∶丙酮=10∶3 的展开剂效果最好，在该条件下展开、
显色后，各三萜类组分呈现红紫色，条带无脱尾现象，分离效果较好．
2.2 测定波长选择
取齐墩果酸标准品溶液，按照 1.2.3 方法操作，在
400~650 nm 范围内扫描，确定最大吸收波长为 550 nm．
2.3 正交实验结果
根据预试验，选择显色剂用量、高氯酸用量、加热温
度、加热时间作为参考因素，设定 3 水平，根据水平因素
表，选择正交表 L9（34）进行实验，结果见表 1 和表 2．

表 2 L9（34）正交试验结果及其分析
序号 A B C D 吸光度 序号 A B C D 吸光度
1 ① ① ① ① 0.272 8 ③ ② ① ③ 0.249
2 ① ② ② ② 0.325 9 ③ ③ ② ① 0.281
3 ① ③ ③ ③ 0.286 T1 0.883 0.817 0.782 0.826
4 ② ① ② ③ 0.289 T2 0.823 0.847 0.895 0.842 T=2.490
5 ② ② ③ ① 0.273 T3 0.786 0.828 0.815 0.824
6 ② ③ ① ② 0.261 R 0.097 0.023 0.168 0.018
7 ③ ① ③ ② 0.256

由表 2 中极差 R 值大小显示，各因素作用主次为 C>A>B>D，因此以 A1B2C2D2 为佳，即最佳反应条件
表 1 因素水平表
因素
水平
显色剂用量
/mL
高氯酸用量
/mL
加热时间
/min
加热温度
/℃
① 0.2 0.4 5 50
② 0.4 0.8 15 60
③ 0.6 1.2 20 70

第 6 期 孟繁旭，等：薄层分离-分光光度法测定夹竹桃枝中三萜类化合物的质量分数 61
为：5% 香草醛-冰醋酸液加入量为 0.2 mL，高氯酸加入量为 0.8 mL，水浴加热温度为 60℃，水浴加热时
间为 15 min．
2.4 显色稳定性实验
取适量齐墩果酸标准溶液，按照 1.2.3 方法操作，对生成的紫红色产物稳定性进行考察，结果表明：显
色 10~40 min 内进行测定较为稳定，40 min 之后吸光度明显下降．因此，质量分数测定在显色 15 min 后立
即测定．
2.5 标准曲线的绘制
精确吸取齐墩果酸标准品甲醇溶液 0.1，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 mL，水浴蒸干后，分别加入 200μL
甲醇稀释，用微量取样器取稀释后的标准溶液 100μL．按照 1.2.3 方法，在 550 nm 测定吸光度，绘制标准
曲线．线性方程为：Y=0.007 0C+0.031 7，r=0.998 6．线性范围为：10~200μg/mL．
2.6 三萜类化合物的质量分数测定
用微量取样器取上述 3 份供
试溶液 100 μL 在薄板上点样，
按照 1.2.3 方法，在 550 nm 测定
吸光度值，计算总三萜的质量分
数，结果见表 3．
2.7 加样回收实验
准确称取 4 份已知质量分数
的夹竹桃粉末各 5.00 g， 准确加
入一定量的齐墩果酸对照品，按
1.2.3 方法制备供试品溶液，按质
量分数条件测定．结果（见表 4）
表明，平均回收率为 101.0%，
RSD=1.73%．
3 讨论
（1）夹竹桃提取物中，除含有三萜类成分外，还含有叶绿素、黄酮、多糖等成分，如果直接将提取物
用于比色反应，由于以上物质的干扰，无法准确进行三萜类成分的测定，将提取物采用薄层色谱先进行分
离，可有效去除以上成分的干扰．
（2）采用薄层色谱分离-分光光度法测定夹竹桃中的总三萜质量分数，具有简单、操作方便，且灵敏
度高的特点，可为分离夹竹桃中三萜化合物提供基础分析．
参考文献：
[1] Fu Liwei，Zhang Shujun，Li Na，et al．Three New Triterpenes from Nerium oleander and Biological Activity of the Isolated
Compounds[J]．Journal of Natural Products．2005，68：198-206
[2] Bai Liming，Wang Liyan，Zhao Ming，et al．Bioactive Pregnanes from Nerium oleander[J]．Journal of Natural Products．2007，
70（1）：14-18
[3] Li W，Li Y，Jin X J．Antitumor activety and immunoregulatory effect of triterpese isolated from betula [J]．Journal of Chinese
Immunology，2000，16（9）：485-487
[4] 王昌禄，栾颖，陈志强，等．薄层分离-分光光度法测定楝科植物中三萜皂苷质量分数[J]．安徽农业科学，2008，36（14）：
5708-5710
表 3 夹竹桃枝中总三萜类质量分数测定
测定值/μg 编号
1 2 3
平均值
/%
总三萜
质量分数/%
总三萜质量分数
平均值/%
1 0.314 0.313 0.314 0.314 1.01
2 0.305 0.303 0.307 0.305 0.97 1.01
3 0.321 0.324 0.322 0.322 1.04

表 4 加样回收实验
取样量/μg 对照品/μg 测定值/μg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
20.01 50.00 72.02 102.90
30.00 50.00 81.25 101.20 101.00 1.73
40.04 50.00 91.13 101.20
50.02 50.00 98.67 98.67