全 文 ：8. 4 Hz，H-5) ，6. 38 ( 1H，d，J = 1. 8 Hz，H-8 ) ，6. 17
( 1H，d，J = 1. 8 Hz，H-6) ，5. 31 ( 1H，d，J =7. 8 Hz，H-
1″) ，4. 41( 1H，d，J = 1. 2 Hz，H-1) ，1. 06 ( 1H，d，J =
6. 0 Hz，H-6) 。13C-NMR( 150 MHz，DMSO-d6 ) δ: 156. 3
( C-2) ，133. 4 ( C-3 ) ，177. 3 ( C-4 ) ，161. 2 ( C-5 ) ，98. 9
( C-6) ，164. 8 ( C-7 ) ，93. 7 ( C-8 ) ，156. 4 ( C-9 ) ，103. 7
( C-10 ) ，121. 0 ( C-1) ，115. 2 ( C-2) ，144. 9 ( C-3) ，
148. 7( C-4) ，116. 0 ( C-5) ，121. 8 ( C-6) ，102. 1 ( C-
1″) ，71. 1 ( C-2″) ，73. 1 ( C-3″) ，68. 2 ( C-4″) ，73. 6 ( C-
5″) ，65. 2( C-6″) ，100. 0 ( C-1) ，70. 4 ( C-2) ，70. 6 ( C-
3) ，71. 9( C-4) ，68. 1 ( C-5) ，17. 9 ( C-6) 。以上数
据与文献［11］报道的槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖基-( 1→
6) -β-D-半乳糖苷［quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-
( 1→6) -β-D-galactopyranoside］一致。
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( 收稿日期: 2011-01-10)
作者简介:任风芝，女，硕士 研究方向:天然药物研究 Tel /Fax: ( 0311) 85992995 E-mail: rfzhhj@ sohu． com
丁癸草的异黄酮类化学成分研究
任风芝，高月麒，成晓迅，李丽红，陈书红，张艳立( 华北制药集团新药研究开发有限责任公司，微生物药物国家研究工程中心，石
家庄 050015)
摘要:目的 研究丁癸草的化学成分。方法 通过硅胶柱色谱、Sephdex LH20 凝胶柱色谱、反相硅胶 C-18 及高压液相色谱等
方法对丁癸草进行分离，运用现代光谱技术鉴定化合物结构; 并通过 MTT 法对其抑制人食管癌细胞 TE13 和小鼠黑色素瘤细
胞 B16 的增殖进行了研究。结果 从丁癸草中分离得到 6 个具有抗肿瘤作用的异黄酮类化合物，分别鉴定为 7，4-二甲氧基
异黄酮( 1) ; 7-羟基-4-甲氧基异黄酮( 2) ; 7，3-二羟基-4-甲氧基异黄酮( 3) ; 7，8-二羟基-4-甲氧基异黄酮( 4) ; 7，4-二羟基-8-
甲氧基异黄酮( 5) ; 7，4-二羟基异黄酮( 6 ) 。结论 所有化合物均首次从丁癸草植物中分离得到，并且具有抑制人食管癌
TE13 细胞的作用，其中化合物 3 对小鼠黑色素瘤 B16 细胞的增殖也有抑制作用。
关键词:丁癸草;异黄酮; 化学成分; 抗肿瘤活性
中图分类号: R284 文献标志码: A 文章编号: 1001 － 2494( 2012) 03 － 0179 － 03
Study on Chemical Constituents of Zornia diphylla
REN Feng-zhi，GAO Yue-qi，CHENG Xiao-xun，LI Li-hong，CHEN Shu-hong，ZHANG Yan-li( New Drug Research
and Development Center of North China Pharmaceutical Group Corporation，National Microbial Medicine Engineering and Research Cen-
ter，Shijiazhuang 050015，China)
ABSTRACT: OBJECTIVE To investigate the chemical constituents of Zornia diphylla ( L. ) Pers. METHODS The compounds
·971·
中国药学杂志 2012 年 2 月第 47 卷第 3 期 Chin Pharm J，2012 February，Vol. 47 No. 3
were isolated by chromatography on silica gel，Sephdex LH20，ODS C-18 and HPLC，and their structures were elucidated on the basis
of spectral analysis. MTT assay in vitro was used to explore the inhibiting effect of the compounds on TE13 cancer cells and B16 cancer
cells. RESULTS Six compounds were isolated and identified as 7，4-dimethoxy isoflavone ( 1 ) ; 7-hydroxy-4-methoxyisoflavone
( 2) ; 7，3-dihydroxy-4-methoxyisoflavone ( 3 ) ; 7，8-dihydroxy-4-methoxyisoflavone ( 4 ) ; 7，4-dihydroxy-8-methoxyisoflavone ( 5 ) ;
and 7，4-dihydroxy- isoflavone( 6) . All compounds showed anti-tumor activities against the cancer cells. CONCLUSION All com-
pounds are isolated from Zornia diphylla ( L. ) Pers. for the first time. Compounds 1 － 6 show inhibitory activity on TE13 cancer cells，
and compound 3 shows inhibitory activity on B16 cancer cells.
KEY WORDS: Zornia diphylla ( L. ) Pers. ; isoflavones; chemical constituents; anti-tumor activity
丁癸草为豆科丁癸属植物丁癸草［Zornia
diphylla ( L. ) Pers.］的全草，主要分布于浙江、
福建、江西、广东、四川和云南等省区，主要显黄
酮、酚类、氨基酸的反应。丁癸草具有清热解表、
凉血解毒作用，用于感冒、咽喉炎、急性黄疸型肝
炎等［1］。在进行抗癌活性筛选过程中发现丁癸
草的醇提物对肿瘤细胞的增殖显示出较好的抑
制作用，为了解该植物的活性成分，我们进行了
系统分离，得到了 6 个具有抗肿瘤活性的异黄酮
类化合物 : 7，4-二甲氧基异黄酮( 1 ) ; 7-羟基-4-
甲氧基异黄酮( 2 ) ; 7，3-二羟基-4-甲氧基异黄
酮( 3 ) ; 7，8-二羟基-4-甲氧基异黄酮( 4 ) ; 7，4-
二羟基-8-甲氧基异黄酮( 5 ) ; 7，4-二羟基异黄酮
( 6 ) 。所有化合物均为首次从该植物中得到。
1 仪器与材料
INVOA 500 型核磁共振波谱仪( Volian 公司) ;
ZMD Micromass 型质谱仪 ( Micromass 公司) ; X － 6
精密显微熔点测定仪( 北京福凯科仪) ; 中压柱色谱
系统( Buchi公司) ;柱色谱硅胶( 青岛海洋化工厂) ;
Sephadex LH20 ( 安玛西亚公司 ) ; 反相硅胶 C-18
( YMC 公司 ) ; 薄层色谱用硅胶板及色谱纯乙腈
( Merk公司 ) ; HPLC 为 Waters996 型仪，固定相用
C18柱 ( Phenomenex 21. 2 mm × 250 mm，10 μm ) 。
CO2 恒温细胞培养箱 ( 美国 SHELLAN 公司) ，RP-
MI1640 培养液 ( Gibco 公司 ) ，MTT ( Sigma 公司 ) 。
人食管癌细胞株 TE13( 日本产业医科大学山下优毅
教授惠赠) ;小鼠黑色素瘤细胞株 B16 ( 中科院上海
细胞库) ;丁癸草购买于宁波德康生物制品有限公
司，经本室张艳哲工程师鉴定。
2 提取与分离
干燥的丁癸草 5 kg用 5 倍乙醇煮提 2 次，每次
2 h，煮提液浓缩后用石油醚萃取，下相浓缩得干浸
膏约 100 g，进行硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇梯度洗
脱( 三氯甲烷; 三氯甲烷-甲醇 50 ∶ 1; 10 ∶ 1; 5 ∶ 1; 甲
醇) ，三氯甲烷洗脱部分 2. 0 g 继续硅胶柱色谱，石
油醚-乙酸乙酯洗脱，再经 HPLC 制备得化合物 1 ( 7
mg) ;三氯甲烷-甲醇 10∶ 1 洗脱部分 4 g 经硅胶柱色
谱，三氯甲烷-甲醇洗脱，再经 ODS 柱色谱、LH20 凝
胶柱色谱和 HPLC 制备得化合物 2( 12 mg) 、化合物
3( 6 mg) 、化合物 4( 7 mg) ;化合物 5( 8 mg) ;三氯甲
烷-甲醇 5∶ 1 洗脱部分 1. 5 g 经硅胶柱色谱和 HPLC
制备得到化合物 6( 10 mg) 。
3 结构鉴定
化合物 1: 白色粉末，mp 158 ～ 159 ℃。ESI-MS
m/z: 283［M + H］+，1 H-NMR ( DMSO-d6，500 MHz)
δ: 8. 43( 1H，s，H-2) ，8. 04 ( 1H，d，J = 9. 0 Hz，H-5 ) ，
7. 09( 1H，dd，J = 9. 0，2. 0 Hz，H-6) ，7. 17( 1H，d，J =
2. 0 Hz，H-8 ) ，7. 53 ( 2H，d，J = 8. 5 Hz，H-2，6) ，
7. 00 ( 2H，d，J = 8. 5 Hz，H-3，5) ，3. 79 ( 3H，s，4-
OCH3 ) ，3. 91 ( 3H，s，7-OCH3 ) 。
13 C-NMR 见表 1，并
且与文献［2］报道的 7，4-二甲氧基异黄酮对比一致。
化合物 2: 白色粉末，mp 249 ～ 251 ℃。ESI-MS
m/z: 269［M + H］+，1 H-NMR ( DMSO-d6，500 MHz)
δ: 10. 83 ( 1H，brs，7-OH ) ，8. 34 ( 1H，s，H-2 ) ，7. 96
( 1H，d，J = 8. 5 Hz，H-5) ，6. 93 ( 1H，dd，J = 8. 5，2. 0
Hz，H-6) ，6. 86 ( 1H，d，J = 2. 0 Hz，H-8 ) ，7. 51 ( 2H，
dd，J = 7. 0，2. 0 Hz，H-2，6) ，6. 98( 2H，dd，J = 7. 0，
2. 0 Hz，H-3，5) ，3. 79 ( 3H，s，4-OCH3 ) 。
13 C-NMR
见表 1，并且与文献［3］报道的 7-羟基-4-甲氧基异黄
酮对比一致。
化合物 3: 白色粉末，mp 246 ～ 248 ℃。ESI-MS
m/z: 285［M + H］+，1 H-NMR ( DMSO-d6，500 MHz)
δ: 10. 68 ( 1H，brs，7-OH ) ，9. 68 ( 1H，brs，3-OH ) ，
8. 25( 1H，s，H-2 ) ，7. 95 ( 1H，d，J = 8. 5 Hz，H-5 ) ，
6. 91( 1H，d，J = 8. 5 Hz，H-6 ) ，6. 83 ( 1H，s，H-8 ) ，
7. 05 ( 1H，s，H-2) ，6. 94 ( 2H，brs，H-5，6) ，3. 78
( 3H，s，4-OCH3 ) 。
13 C-NMR 见表 1，并且与文献［4］
报道的 7，3-二羟基-4-甲氧基异黄酮对比一致。
·081· Chin Pharm J，2012 February，Vol. 47 No. 3 中国药学杂志 2012 年 2 月第 47 卷第 3 期
表 1 化合物 1 ～ 6 的13C-NMR( DMSO-d6 )
Tab. 1 13C-NMR data for compounds 1 － 6( DMSO-d6 )
No. 1 2 3 4 5( CD3COCD3，125 MHz) 6
C-2 153. 45 153. 09 152. 90 152. 83 152. 94 152. 73
C-3 124. 04 124. 23 123. 29 122. 51 124. 96 122. 54
C-4 174. 61 174. 56 174. 50 175. 01 175. 75 174. 64
C-5 126. 93 127. 24 127. 18 115. 48 121. 98 127. 21
C-6 114. 75 115. 24 115. 23 114. 19 115. 45 115. 23
C-7 163. 69 162. 76 162. 86 150. 25 155. 27 162. 83
C-8 100. 55 102. 08 102. 02 133. 03 135. 75 102. 05
C-9 157. 44 157. 45 157. 38 146. 65 151. 79 157. 45
C-10 117. 57 116. 47 116. 42 117. 25 119. 32 116. 42
C-1 123. 35 123. 10 124. 72 124. 40 124. 24 123. 42
C-2 130. 05 130. 04 116. 42 130. 05 131. 06 130. 03
C-3 113. 60 113. 56 146. 00 113. 52 115. 75 114. 90
C-4 158. 99 158. 91 147. 45 158. 85 158. 14 157. 12
C-5 113. 60 113. 56 111. 96 113. 52 115. 76 114. 90
C-6 130. 05 130. 04 119. 63 130. 05 131. 06 130. 03
7-OCH3 56. 09
8-OCH3 61. 63
4-OCH3 55. 12 55. 11 55. 64 55. 08
化合物 4: 淡黄色粉末，mp 251 ～ 253 ℃。ESI-
MS m/z: 285［M + H］+，1 H-NMR ( DMSO-d6，500
MHz) δ: 10. 37 ( 1H，brs，7-OH ) ，9. 48 ( 1H，brs，8-
OH) ，8. 36( 1H，s，H-2) ，7. 46 ( 1H，d，J = 8. 5 Hz，H-
5) ，6. 98( 1H，d，J = 8. 5 Hz，H-6 ) ，7. 51 ( 2H，d，J =
8. 5 Hz，H-2，6) ，6. 99 ( 2H，d，J = 8. 5 Hz，H-3，
5) ，3. 78( 3H，s，4-OCH3 ) ，
13 C-NMR 见表 1。以上
数据与文献［5］报道的 7，8-二羟基-4-甲氧基异黄酮
对比一致。
化合物 5:淡黄色粉末，mp 213 ～214 ℃。ESI-MS
m/z: 285［M + H］+，1 H-NMR( CD3CO CD3，500 MHz)
δ: 8. 22 ( 1H，s，H-2) ，7. 82 ( 1H，d，J = 8. 5 Hz，H-5) ，
7. 05( 1H，d，J =8. 5 Hz，H-6) ，7. 45( 2H，d，J =8. 5 Hz，
H-2，6) ，6. 85( 2H，d，J =8. 5 Hz，H-3，5) ，3. 90( 3H，
s，8-OCH3 ) ，
13C-NMR见表 1。以上数据与文献［6］报
道的 7，4-二羟基-8-甲氧基异黄酮对比一致。
化合物 6: 白色粉末，mp 309 ～ 311 ℃。ESI-MS
m/z: 255［M + H］+，1 H-NMR ( DMSO-d6，500 MHz)
δ: 10. 61 ( 1H，brs，7-OH ) ，9. 69 ( 1H，brs，4-OH ) ，
8. 28( 1H，s，H-2 ) ，7. 95 ( 1H，d，J = 8. 5 Hz，H-5 ) ，
6. 92( 1H，d，J = 8. 5 Hz，H-6 ) ，6. 85 ( 1H，s，H-8 ) ，
7. 38( 2H，d，J = 8. 0 Hz，H-2，6) ，6. 80 ( 2H，d，J =
8. 0 Hz，H-3，5) 。13C-NMR见表 1，并且与文献［7］报
道的 7，4-二羟基异黄酮对比一致。
4 化合物对人食管癌细胞 TE13 和小鼠黑色素瘤
细胞 B16 的抑制作用
采用 MTT 法［8］研究了 6 个化合物对 TE13 和
B16两种肿瘤细胞增殖的抑制作用。收集处于对数
生长期的肿瘤细胞，调整细胞浓度为 1. 0 × 105·
mL －1，均匀接种于 96 孔细胞培养板，每孔 98 μL，分
别加入 2 μL 不同浓度的样品，对照组加入培养液。
每组均设 4个复孔，置于 37 ℃，5%CO2培养箱中培养
24 h后，各孔加入 MTT( 5 mg·mL －1 ) 20 μL，继续培
养 4 h，弃去培养上清，每孔加入 DMSO 150 μL，混匀
后在波长 492 nm下检测各孔 A 值，计算抑制率。测
定结果显示，化合物 1 ～6对 TE13细胞株的增殖均具
有抑制作用，IC50分别为 72. 2、77. 8、44. 9、83. 9、80. 5
和 75. 7 μg·mL －1。其中化合物 3对 B16细胞株的增
殖也具有非常显著的抑制作用，IC50为63. 3 μg·mL
－1。
5 讨 论
异黄酮是广泛存在于豆科、鸢尾科等植物中的
活性比较广泛的一类化合物。国内外关于异黄酮的
药理研究非常多，主要集中在雌激素活性、抗癌活
性、预防心血管疾病方面，同时还发现异黄酮具有抗
氧化、抗真菌等作用。丁癸草是豆科丁癸草属植物，
以全草入药，目前文献中关于丁癸草的化学成分和
药理的研究非常有限，本实验发现丁癸草中含有丰
富的异黄酮类化合物，并且对肿瘤细胞具有一定的
抑制作用，这为丁癸草植物资源的进一步开发利用
提供了依据。
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