全 文 ：不同产地、不同采收期黄芪药材及饮片中毛蕊异黄酮
葡萄糖苷及芒柄花素含量测定
姚雪莲1，裴彩云2!，王宗权2
(1．江西中医学院，南昌 330004;2．石家庄以岭药业股份有限公司，石家庄 050035)
摘要 目的:采用 HPLC法测定不同产地、不同采收期黄芪药材及饮片中毛蕊异黄酮葡萄糖苷及芒柄花素含量。方法:采用
Agilent ZORBAX Eclipse XDB － C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈 －水，梯度洗脱，流速 1 mL·min
－ 1，柱温
35 ℃，检测波长 260 nm。结果:毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素线性范围分别为 0. 1272 ～ 12. 72 μg(r = 0. 9999)和 0. 003344 ～
2. 508 μg(r = 0. 9999) ，平均回收率(n = 6)分别为 98. 9%(RSD = 1. 7%)和 99. 0%(RSD = 2. 3%)。不同产地黄芪药材及饮片
中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素含量差异较大，生长年限 6 年的黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素含量最高。结论:
该方法简单快捷，适合于黄芪中黄酮类化合物的含量测定研究，为寻找更佳黄芪产地及黄芪采收期提供了依据。
关键词:高效液相色谱;中药;黄芪;黄酮类成分;毛蕊异黄酮葡萄糖苷;芒柄花素;采收期;产地;含量比较;质量评价
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2012)05 － 0797 － 06
* 通讯作者 Tel:(0311)85901304;Fax:(0311)85901734;E － mail:peicaiyun@ 126． com
Determination of calycosin － 7 － O － β － D － glucoside and formononetin
in crude drugs and slices of Astragalus from different
habitats and gathering periods
YAO Xue － lian1，PEI Cai － yun2* ，WANG Zong － quan2
(1． Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China;
2． Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co． Ltd．，Shijiazhuang 050035，China)
Abstract Objective:To establish an HPLC method for the determination of calycosin － 7 － O － β － D － glucoside
and formononetin in crude drugs and slices of Astragalus from different habitat and gathering periods． Methods:
ZORBAX Eclipse XDB － C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm )was adoped with a mobile phase of acetonitrile － water，
the separation was carried out with a gradient program at a flow rate of 1 mL·min －1，column temperature was 35
℃ and detection wavelength was 260 nm． Results:Calycosin － 7 － O － β － D － glucoside and formononetin showed
good linearity in the ranges of 0. 1272 － 12. 72 μg(r = 0. 9999)and 0. 003344 － 2. 508 μg (r = 0. 9999)with aver-
age recoveries of 98. 9% and 99. 0%，respectively． The contents of calycosin － 7 － O － β － D － glucoside and form-
ononetin in crude drugs and slices of Astragalus from different habitat marked difference，and the contents of caly-
cosin － 7 － O － β － D － glucoside and formononetin grown for six years was the highest． Conclusion:The method is
simple，rapid for determination the contents of calycosin － 7 － O － β － D － glucoside and formononetin in Astragali
Radix，and can be used as a basis for finding better habitat and gathering periods of Astragali Radix．
Key words:HPLC;traditional Chinese medicine;Astragali Radix;flavonoids;calycosin － 7 － O － β － D － gluco-
side;formononetin;gathering periods;habitats;comparison of contents;quality evaluation
黄芪为常用中药，是豆科植物蒙古黄芪 Astraga-
lus membranceus (Fisch．)Bge． var． mongholicus
(Bge．)Hsiao 或膜荚黄芪 Astragalus membranaceus
(Fisch．)Bge．的干燥根，具有补气固表、利尿托毒等
功效。黄芪中主要成分为皂苷类、黄酮类、多糖类成
分等，其中黄芪中黄酮类成分对细胞免疫功能具有促
进作用，同时具有抗心肌缺血、保护血管内皮细胞、抗
氧化、抗炎、清除自由基、抗骨质疏松等作用［1，2］。目
—797—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)
DOI:10.16155/j.0254-1793.2012.05.016
前对黄芪的质量评价主要是对其所含的黄芪甲苷进
行含量测定，2010年版中国药典新增毛蕊异黄酮葡萄
糖苷含量测定方法［3］。经研究发现，毛蕊异黄酮葡萄
糖苷是黄芪中含量较高的黄酮，现已有对黄芪中槲皮
素、山柰酚、芒柄花素以及各种黄芪皂苷等的含量测
定方法［4 ～ 9］。但未见文献报道黄酮类成分与黄芪皂
苷同时测定的方法。作者在系列研究中收集不同产
地、不同采收期黄芪共 60 余批，采用 HPLC蒸发光散
射检测器 －紫外检测器串联方法同时测定黄芪中 3
种黄芪皂苷含量及毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素含
量，其中黄芪皂苷含量测定结果已报道［10］。现在对
其中所含毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素进行定量分
析，为黄芪质量评价提供依据。
1 仪器、试药
Waters 2695 系列高效液相色谱仪，Waters 2487
紫外检测器、Waters 2420 蒸发光散射检测器;Sarto-
rius BS110S分析天平;Millipore A10 型超纯水机。
乙腈为 Fisher 色谱纯，其余试剂、试药均为分
析纯。
毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品(购自中国食品药
品检定研究院，批号 111920 － 201001，供含量测定
用) ;芒柄花素对照品(购自石家庄鼎晨科技有限公
司，经峰面积归一化法测定，含量在 98%以上)。
黄芪采自甘肃、山西、内蒙古等地，由黑龙江中医
药大学王振月教授鉴定为蒙古黄芪 Astragalus mem-
branceus (Fisch．) Bge． var． mongholicus (Bge．)
Hsiao或膜荚黄芪 Astragalus membranaceus (Fisch．)
Bge．的干燥根，60 ℃烘干，粉碎后过 4 号筛。留样药
材存于河北以岭医药研究院中药标本室。
2 方法与结果
2. 1 溶液制备
2. 1. 1 对照品溶液 分别精密称取经在五氧化二
磷中减压干燥至恒重的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花
素对照品适量，加甲醇分别配制成 0. 424 mg·mL －1
毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液，8. 36 μg·mL －1芒
柄花素对照品溶液。
2. 1. 2 供试品溶液 取样品粉末约 4 g，精密称
定，置索氏提取器中，加甲醇 40 mL，冷浸过夜，加甲
醇至 70 mL，加热回流 4 h，提取液回收溶剂至干，残
渣加 70%甲醇溶液适量溶解并转移至 10 mL 量瓶
中，加 70%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
2. 2 色谱条件 色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse
XDB － C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;流动相:A
相为乙腈，B 相为水，梯度洗脱(0 ～ 10min，5% A;
10 ～40 min，5%A→24%A;40 ～70 min，24%A→34%
A;70 ～ 80 min，34% A;80 ～ 95 min，34% A→60% A;
95 ～100 min，60% A→100% A;100 ～ 115 min，100%
A) ;流速:1. 0 mL·min － 1;柱温:35 ℃;检测波长:
260 nm;进样量:10 μL。蒸发光散射检测器，ELSD
参数:喷雾器温度 39 ℃，漂移管温度 55 ℃，载气
压力 172. 4 kPa，增益值为 200［10］。对照品及样品
色谱图见图 1。
图 1 黄芪(A)与对照品(B、C)的 HPLC图
Fig 1 HPLC chromatograms of Radix Astragali(A) ，and reference sub-
stances(B，C)
1．毛蕊异黄酮葡萄糖苷(calycosin － 7 － O － β － D － glucoside) 2．芒
柄花素(formononetin)
2. 3 线性关系考察 精密吸取毛蕊异黄酮葡萄糖
苷对照品溶液及芒柄花素对照品溶液，分别加甲醇
稀释成 5 个浓度的溶液，注入高效液相色谱仪，测得
峰面积。分别以毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素对
照品的浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘
制标准曲线，计算回归方程。毛蕊异黄酮葡萄糖苷、
芒柄花素回归方程分别为:
Y = 3. 23 × 106X + 876. 80 r = 0. 9999
Y = 8. 38 × 106X + 886. 51 r = 0. 9999
表明毛蕊异黄酮葡萄糖苷进样量在 0. 1272 ～ 12. 72
μg，芒柄花素进样量在 0. 003344 ～ 2. 508 μg 范围
内，与峰面积呈良好的线性关系。
2. 4 精密度试验 取同一供试品溶液，按上述色
谱条件连续进样 5 次，测定峰面积。结果毛蕊异黄
酮葡萄糖苷、芒柄花素峰面积的 RSD 分别为 0. 8%
和 1. 1%。
2. 5 重复性试验 取同一样品(2010 － 9 － 19 采
集，5 年生)6 份，按“2. 1. 2”项下方法制备供试品溶
—897— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)
液，按“2. 2”项下的色谱条件进样测定。结果毛蕊
异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素含量的平均值分别为
0. 96 mg·g －1和 13. 9 μg·g －1，RSD 分别为 1. 2%
和 2. 9%。表明本法精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色
谱条件分别在 0，4，8，12，16，24 h 进样测定峰面积。
结果毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素峰面积的 RSD
分别为 0. 7%和 1. 2%
2. 7 加样回收率试验 称取同一样品(2010 － 9 －
19采集，5年生)粉末 2. 0 g，共 6 份，精密称定，分别
精密加入毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液 0. 5 mL
和芒柄花素对照品溶液 3. 0 mL，按“2. 1. 2”项下
方法制备供试溶液，按“2. 2”项下的色谱条件进样
测定，计算回收率。结果毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒
柄花素的平均回收率分别为 98. 9% 和 99. 0%，
RSD分别为 1. 7%和 2. 3%。
2. 8 样品含量测定 取不同产地的蒙古黄芪和膜
荚黄芪，按“2. 1. 2”项下方法制备供试品溶液。取
供试品溶液及对照品溶液，按上述色谱条件进样测
定，用外标法计算含量。测定结果见表 1、表 2。
表 1 不同产地黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素测定结果(n =2)
Tab 1 Determination results of calycosin －7 －O － β －D － glucoside and formononetin
in crude drugs and slices of Astragalus from different habitats
基源(origin)
样品号
(sample No．)
产地
(origin)
生长方式或采收时间
(growth way or harvest time)
毛蕊异黄酮葡萄糖苷
(calycosin － 7 － O － β － D －
glucoside)/mg·g － 1
芒柄花素
(formononetin)/μg·g － 1
蒙古黄芪［Astragalus
membranaceus (Fisch．)Bge．
var． mongholicus (Bge．)Hsiao］
1 山西浑源
(Hunyuan，Shanxi)
野生(grow wild) 1. 24 14. 5
2 山西(Shanxi) 栽培(cultivation) ，
统货(general cargo)
1. 23 26. 7
3 山西浑源
(Hunyuan，Shanxi)
野生(grow wild) ，
2 ～ 3 年生(2 － 3 years)
1. 12 18. 1
4 山西(Shanxi) 野生(grow wild) 0. 83 25. 1
5 山西(Shanxi) 五等(five grades) ，
野生(grow wild)
0. 80 17. 5
6 山西(Shanxi) 野生(grow wild) 0. 73 27. 8
7 内蒙古(Nei Monggol) 2 年生(2 years) 0. 65 21. 3
8 甘肃(Gansu) 饮片(decoction pieces) 0. 49 79. 0
9 内蒙古(Nei Monggol) 饮片(decoction pieces) 0. 30 53. 1
10 山东(Shangdong) 3 年生(3 years) 0. 15 18. 7
膜荚黄芪［Astragalus
membranaceus (Fisch．)Bge．］
11 承德丰宁
(Fengning，Chengde)
1 年生(1 years) 0. 83 13. 0
12 吉林通化
(Tonghua，Jilin)
3 年生(3 years) 0. 48 52. 6
13 河北安国
(Anguo，Hebei)
2 年生(2 years) 0. 36 24. 0
14 承德丰宁
(Fengning，Chengde)
2 年生(2 years) 0. 21 24. 5
蒙古黄芪［Astragalus
membranaceus (Fisch．)Bge．
var． mongholicus (Bge．)Hsiao］
15 甘肃陇西首阳
(Shouyang，Longxi，Gansu)
2008． 10 采收(harvest) ，
栽培(cultivation)
0. 15 181. 4
16 甘肃渭源莲峰
(Lianfeng，Weiyuan，Gansu)
2007． 10 采收(harvest) ，
栽培(cultivation)
0. 13 524. 3
17 甘肃陇西通安
(Tong’an，Longxi，Gansu)
2006． 10 采收(harvest) ，
栽培(cultivation)
0. 12 612. 8
—997—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)
续表 1
基源(origin)
样品号
(sample No．)
产地
(origin)
生长方式或采收时间
(growth way or harvest time)
毛蕊异黄酮葡萄糖苷
(calycosin － 7 － O － β － D －
glucoside)/mg·g － 1
芒柄花素
(formononetin)/μg·g － 1
18 甘肃岷县
(Min county，Gangsu)
2007． 10 采收(harvest) ，
栽培(cultivation)
0. 09 425. 3
19 甘肃渭源莲峰
(Lianfeng，Weiyuan，Gansu)
2009． 10 采收(harvest) ，
栽培(cultivation)
0. 09 423. 6
20 甘肃渭源莲峰
(Lianfeng，Weiyuan，Gansu)
2010． 10 采收(harvest) ，
栽培(cultivation)
0. 09 28. 5
21 内蒙古(Nei Monggol) 饮片(decoction pieces)
091101
0. 07 166. 3
22 内蒙古(Nei Monggol) 饮片(decoction pieces)
091201
0. 06 149. 2
23 内蒙古(Nei Monggol) 饮片(decoction pieces)
101001
0. 05 501. 2
24 内蒙古(Nei Monggol) 饮片(decoction pieces)
100901
－ 279. 3
表 2 山西浑源 GAP基地不同采收期蒙古黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素测定结果(n =2)
Tab 2 Determination results of calycosin －7 －O － β －D － glucoside and formononetin in Astragalus membranaceus
(Fisch．)Bge． var． mongholicus (Bge．)Hsiao from different gathering periods of Shanxi Hunyuan GAP base
样品号
(sample No．)
采收时间
(collecting time)
生长年限
(growth years)
毛蕊异黄酮葡萄糖苷
(calycosin － 7 － O － β － D － glucoside)/mg·g － 1
芒柄花素
(formononetin)/μg·g － 1
1 2010 － 09 － 19 3 年生(3 years) 0. 53 5. 6
2 2010 － 09 － 26 3 年生(3 years) 0. 76 3. 2
3 2010 － 10 － 03 3 年生(3 years) 1. 04 2. 5
4 2010 － 10 － 10 3 年生(3 years) 1. 02 2. 7
5 2010 － 10 － 17 3 年生(3 years) 1. 23 3. 5
6 2010 － 10 － 24 3 年生(3 years) 1. 24 2. 6
7 2010 － 10 － 31 3 年生(3 years) 1. 32 1. 5
8 2010 － 11 － 07 3 年生(3 years) 0. 59 1. 2
9 2010 － 09 － 19 4 年生(4 years) 0. 69 7. 8
10 2010 － 09 － 26 4 年生(4 years) 1. 34 5. 1
11 2010 － 10 － 03 4 年生(4 years) 0. 70 1. 7
12 2010 － 10 － 10 4 年生(4 years) 0. 65 3. 3
13 2010 － 10 － 17 4 年生(4 years) 1. 09 3. 7
14 2010 － 10 － 24 4 年生(4 years) 1. 47 3. 6
15 2010 － 10 － 31 4 年生(4 years) 1. 00 2. 2
16 2010 － 11 － 07 4 年生(4 years) 1. 02 4. 3
17 2010 － 09 － 19 5 年生(5 years) 0. 96 13. 9
18 2010 － 09 － 26 5 年生(5 years) 0. 76 3. 0
19 2010 － 10 － 03 5 年生(5 years) 0. 75 1. 3
20 2010 － 10 － 10 5 年生(5 years) 0. 65 2. 8
21 2010 － 10 － 17 5 年生(5 years) 1. 75 4. 1
22 2010 － 10 － 24 5 年生(5 years) 1. 15 2. 8
23 2010 － 10 － 31 5 年生(5 years) 1. 15 2. 6
24 2010 － 11 － 07 5 年生(5 years) 1. 05 7. 2
25 2010 － 09 － 19 6 年生(6 years) 0. 69 8. 0
—008— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)
续表 2
样品号
(sample No．)
采收时间
(collecting time)
生长年限
(growth years)
毛蕊异黄酮葡萄糖苷
(calycosin － 7 － O － β － D － glucoside)/mg·g － 1
芒柄花素
(formononetin)/μg·g － 1
26 2010 － 09 － 26 6 年生(6 years) 2. 15 51. 6
27 2010 － 10 － 03 6 年生(6 years) 2. 52 11. 8
28 2010 － 10 － 10 6 年生(6 years) 0. 75 4. 4
29 2010 － 10 － 17 6 年生(6 years) 0. 79 3. 1
30 2010 － 10 － 24 6 年生(6 years) 0. 82 2. 8
31 2010 － 10 － 31 6 年生(6 years) 1. 13 2. 3
32 2010 － 11 － 07 6 年生(6 years) 0. 93 2. 9
33 2010 － 09 － 19 7 年生(7 years) 0. 86 3. 4
34 2010 － 09 － 26 7 年生(7 years) 1. 01 7. 0
35 2010 － 10 － 03 7 年生(7 years) 1. 01 0. 8
36 2010 － 10 － 10 7 年生(7 years) 0. 92 7. 1
37 2010 － 10 － 17 7 年生(7 years) 0. 98 3. 6
38 2010 － 10 － 24 7 年生(7 years) 1. 24 1. 6
39 2010 － 10 － 31 7 年生(7 years) 0. 56 5. 2
40 2010 － 11 － 07 7 年生(7 years) 1. 37 2. 8
3 讨论
3. 1 不同产地黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花
素含量比较 收集不同产地黄芪 24批，其中以山西、
内蒙古、甘肃为主，由表 1结果可知，山西产黄芪中毛
蕊异黄酮葡萄糖苷含量普遍高于其他产地，但山西产
黄芪中芒柄花素含量明显低于甘肃和内蒙古产地。
3. 2 不同采收期黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒
柄花素含量比较 本次收集的不同采收期样品为山
西浑源 GAP基地 9 ～ 10 月份不同生长年限 40 批次
样品，同一生长年限黄芪每隔 7 d 采样 1 次，因取样
量少，每批之间毛蕊异黄酮葡萄糖苷及芒柄花素含
量规律性较差，计算不同生长年限下 8 批黄芪中毛
蕊异黄酮葡萄糖苷及芒柄花素平均含量见表 3，随
着生长期延长，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素含量
不断增加，到第 7 年开始减少，因此最佳生长年限为
6 年生。
表 3 不同生长年限毛蕊异黄酮葡萄糖苷
与芒柄花素平均含量(n =2)
Tab 3 The average content of calycosin －7 －O － β －D －
glucoside and formononetin in different growth years
生长年限
(growth years)
毛蕊异黄酮葡萄糖苷
(calycosin － 7 － O － β － D －
glucoside)/mg·g － 1
芒柄花素
(formononetin)/μg·g － 1
3 年生(3 years) 0. 97 2. 9
4 年生(4 years) 0. 99 4. 0
5 年生(5 years) 1. 03 4. 7
6 年生(6 years) 1. 22 10. 9
7 年生(7 years) 0. 99 3. 9
3. 3 紫外检测器和蒸发光检测器联用 黄芪中所
含皂苷和黄酮两大类成分均为黄芪的主要活性成
分，因此建立这 2 类成分的含量测定方法，有利于
控制黄芪药材质量。目前，黄芪中黄酮类成分含
量测定方法多采用高效液相色谱紫外检测法，黄
芪中皂苷类成分含量测定多采用高效液相色谱蒸
发光检测法，未见将 2 类成分同时测定的文献报
道。毛蕊异黄酮葡萄糖苷为极性较大的黄酮，而
黄芪皂苷类成分极性较小，因此作者在系列研究
中采用紫外检测器和蒸发光检测器联用的方法，
经梯度洗脱，同时进行二者含量测定，为黄芪药材
质量评价提供了依据。
参考文献
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2 ZHANG Dong － qing(张冬青) ，WANG De － qing(汪德清)． Pro-
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(本文于 2011 年 10 月 24 日收到)
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(本文于 2011 年 6 月 28 日收到)
—508—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)