全 文 ：apoptotic mechanism s of neu ron al cell death in perinatal hy-
poxia/ ischemia [ J] .Cu rr Mol Med , 2004 , 4(2):77-85.
[ 9] 　王洁 ,张均田.脑缺血 、氧自由基清除剂与脑保护[ J] .中国药理
学通报 , 1998 , 14(1):8-10.
[收稿日期] 2010-07-19
[ 基金项目] 广西自然科学基金项目(编号:桂科自 0447039 , 编号:桂科自 0832013Z)　[ 作者简介] 罗旭艳 , 女 , 硕士研究生 , 电话:
13617810137 , E-mail:xuyanlu o815l@163.com 　[ 通讯作者] 黄仁彬 ,教授 , 博士生导师, 电话:0771-5358272 , E-mail:huan grenbin518@163.
com
杨桃根多糖体外抗氧化作用
罗旭艳 ,黄建春 ,杨欣 ,王丽惠 ,黄仁彬　(广西医科大学药学院 , 广西 南宁 530021)
[ 摘要] 　目的:探讨杨桃根多糖(YTGP)的抗氧化活性。方法:邻苯三酚自氧化法和邻二氮菲-Fe2+/ H 2O2体系研究 YTGP对
自由基的作用 ,用硫代巴比妥酸法测小鼠肝中丙二醛(MDA)含量。在体外化学模拟条件下测定杨桃根多糖的总还原能力。
结果:YTGP能有效抑制 M DA 的产生 ,能明显地抑制 · OH 和 O-2 的生成。结论:YTGP在体外有明显的抗氧化作用。
[ 关键词] 　杨桃根多糖;脂质过氧化;氧自由基;抗氧化
[中图分类号] R285.6　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2011)14-1172-03
Antioxidative effect of Yangtaogen(carambala root)polysaccharide(YTGP)in vitro
LUO Xu-yan , H UANG Jian-chun , YANG Xin , WANG Li-hui , HUANG Ren-bin(Depa rtment o f Pharmacol-
ogy , Guangxi Medical Univer sity , Guangxi Nanning 530021 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the antio xidativ e effec t o f Yangtao gen(carambala r oo t)po ly saccharide(YTGP)in v itro.
METHODS　The effect of YTGP on super oxide anion(O2-)was investig ated by the auto-oxida tion of py rogallol and its effect
on hydroxyl free r adical(· OH)w as measured by Fe2+-H 2O 2 system , malondialdehyde(MDA)content in liv er w as measured
by thiobabituric acid assay , and the total reducing pow er of YTGP w as measured in vi tro chemical simulated system.RESULTS
　YTGP could inhibit the gene ration of MDA , and productions of · OH and O 2-.CONCLUSION　YTGP possesse s a good an-
tiox idative effect in vitro.
KEY WORDS:Yang taogen polysacchar ide(YTGP);(carambala roo t);lipid pero xidation;oxygen free radical;antio xidation
　　杨桃根(carambo la root , Averrhoa carambo-
laL .Roo t)即 YTG ,为酢浆草科属植物的根 ,因其
有良好的药用作用 ,民间有用其作为偏方治疗糖尿
病 ,使用方便 ,效果良好。杨桃树盛产于东南亚国家
和我国广西 、广东 、云南 、福建 、台湾等省 ,杨桃根资
源丰富 ,价格便宜 ,有非常好的应用价值 。以下研究
杨桃根多糖(YTGP)的抗氧化活性 ,以期为杨桃根
的进一步开发利用提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　仪器　FJ-200高速分散均质机 ,上海标本
模型厂;高速冷冻离心机 , 上海安亭科学仪器厂;
TDL-5 离心机 , 上海安亭科学仪器厂;TU -
1810SPC紫外可见分光光度计 ,北京普析通用仪器
有限公司 。
1.1.2　试剂　30%双氧水(成都市科龙化工试剂
厂 ,批号 20070608);邻苯三酚(中国医药上海化学
试剂公司 ,批号 20050710);邻二氮菲(成都科龙化
工试剂厂 ,批号 20051204);FeSO 4(成都市科龙化工
试剂厂 ,批号 20090109);硫代巴比妥酸(TBA ,国药
集团化学试剂有限公司 ,批号 2006082);三氯酯酸
(TCA , 国药 集团 化学 试剂 有限 公 司 , 批 号
20091117);抗坏血酸(成都市科龙化工试剂厂 ,批号
2006111)。
1.1.3　动物　昆明种小鼠 , ♂,体质量(20±2)g ,由
广西医科大学实验动物中心提供 , 试验动物生产许
可证:SCXKG桂 2003-0003 ,试验动物使用许可证:
SYKG 桂 2003-0005。
1.1.4　YTGP 的制备[ 2] 　杨桃根采于广西灵山
县 ,经广西中医药研究所鉴定。取杨桃根粗粉 ,加入
10倍量纯化水浸提 3次 ,合并浸提液 , 60 ℃旋转蒸
发仪真空浓缩 ,以 3 倍量的无水乙醇沉淀 ,搅拌均
匀 , 4 ℃冰箱保存 ,静置 24 h ,离心 ,抽滤 ,即得粗多
糖。用木瓜蛋白酶除去蛋白 ,用 H2O2法除去色素 ,
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60 ℃旋转蒸发仪真空浓缩 ,离心 ,抽滤 ,沉淀依次用
无水乙醇 、丙酮洗涤即得 YTGP 。
1.2　YTGP 的抗氧化实验　从总还原能力 、清除
自由基能力及抑制脂质过氧化能力三方面考虑 ,进
行一下 4个实验 。
1.2.1　YTGP 的总还原能力测定　参照曹炜[ 3] 的
方法 ,在 10 mL 试管中分别加入不同浓度杨桃根多
糖溶液 1 mL , 磷酸盐缓冲溶液(0.2 mo l·L-1 , pH
6.6)0.5 mL和 0.3%铁氰化钾1.5 mL ,置于 50 ℃
水浴中反应 20 min ,然后加入 10% TCA 1 mL ,混
匀后 3 000 r·min-1离心 10 min ,取上清液 2 mL ,加
0.5 mL 0.3%三氯化铁溶液 ,摇后在 700 nm 处测
定吸光度 ,每个浓度平行做三管 ,取其平均值 。
1.2.2　YTGP 对 O-2的清除率的测定[ 4-5 , 8] 　采用改
良的邻苯三酚自氧化法。加 0.05 mo l·L-1 Tris-
HCl液(pH 8.2)4.5 mL于试管中 ,置 25 ℃水浴 20
min。加入不同浓度的 YTG P 溶液0.4 mL和 25 ℃
保温过的邻苯三酚溶液(10 mmol·L-1 HCl配制)
0.08 mL ,加入后快速摇匀 ,然后以空白作对照测定
样品在 325 nm 处的吸光度 ,每隔0.5 min记录一次 ,
连续记录 4 min ,各管的氧化速率及对 O 2-的清除率
按下列公式计算 。具体操作如表 1所示 ,氧化速率
=(最后 1次记录值-第 1次记录值)/4。清除率
=(自氧化管氧化速率-样品管氧化速率)/自氧化
管氧化速率×100%。
表 1　邻苯三酚自氧化法加样表
Tab 1　Auto-oxidation o f py ro gallo l method of sample
试剂 空白管/mL 自氧化管/mL 样品管/mL
T ris-HCl 4.5 4.5 4.5
纯化水 0.48 0.4 -
邻苯三酚 - 0.08 0.08
YTGP - 0.4
总体积 4.98 4.98 4.98
1.2.3　YTGP 对 ·OH 的清除率的测定[ 6-8] 　采用
邻二氮菲-Fe2+-H 2O 2法 , YTGP 不同浓度 ,按表 2
进行加样 。将各反应管摇匀放入 37 ℃恒温水浴箱
中保温 1 h 后测定其在 509 nm 处的吸光值 ,各管对
·OH 的清除率按下列公式计算 。清除率=[(A 2-
A 1)/(A 0-A 1)] ×100%。
1.2.4　YTGP 对小鼠肝匀浆自发性脂质过氧化的
影响[ 9] 　小鼠处死后立即打开腹腔 ,用预冷的生理
盐水从门静脉冲洗肝脏 ,取出肝脏 ,用 4 ℃生理盐水
洗净表面血污 ,称重 ,用预冷生理盐水制成 10%的
肝匀浆 ,3 000 r·min-1 ,离心 10 min取上清液备用 ,
卡马斯亮蓝试剂盒测蛋白 ,制成含蛋白质 0.005 g·
mL-1的溶液。
表 2　邻二氮菲-Fe2+-H 2O2法加样表
Tab 2　Fer rosin-Fe2+-H2O2 method of sample
试剂 A 0未损伤管/mL A 1损伤管/mL A 2样品管/mL
磷酸盐缓冲液 1.5 1.5 1.5
邻二氮菲溶液 1.5 1.5 1.5
纯化水 2 1 -
FeSO4溶液 1 1 1
YTGP - - 1
H 2O 2溶液 - 1 1
总体积 6 6 6
　　取2.5%肝匀浆悬浮液 1 mL ,加入阳性对照药
抗坏血酸及不同浓度的 LYGP 溶液0.2 mL(每个浓
度平行做三管),37 ℃水浴 60 min ,加入 15% TCA
1 mL 终止反应 ,再加入0.67%TBA 1 mL ,于沸水
浴中显色 15 min ,冷却后离心 ,取上清液于 532 nm
处测定吸光度(A), 以 A 值表示 MDA 的含量 ,
MDA 的清除率按下式计算:清除率 =(A对照 -
A样品)/A对照×100%。
1.2.5　数据处理　所有数据用 SPSS 13.0进行统
计处理。
2　结果与分析
2.1　YTGP 的总还原能力　一般情况下 ,物质的
还原能力越强 ,其抗氧化活性也越高。根据“1.2”项
的方法 ,各个样品反应后的生成物在 700 nm 处的
吸光度大小即反映了其抗氧化能力的大小 ,值越大
则样品的还原能力越强 。结果见表 3。
表 3　不同质量浓度 YTGP的还原能力( x±s)
Tab 3　Reducing capacity of different concent rations of YT-
GP( x±s)
质量浓度/mg·mL-1 吸光度
1 0.180±0.001
2 0.282±0.003
4 0.429±005
6 0.676±0.0005
8 0.736±0.009
　　从表 3 可以看出 ,在实验验范围内 , Y TGP 的
还原能力随着浓度的增加而增强 。
2.2　YTGP 对 O 2-的清除作用　邻苯三酚自氧化
能产生 O 2-和有色物质 ,该有色中间物在 325 nm 处
有吸收峰。如加入 O2 -清除剂 ,就会抑制邻苯三酚
自氧化 ,同时也抑制有色物质的产生 ,从而使波长
325 nm 处的吸收峰受到抑制 。通过 A325nm值的变化
可判断 O 2-的清除能力 。如图 1所示 , YTGP 对 O 2-
具有一定的清除能力 ,且呈剂量依赖关系。
2.3　YTGP 对 ·OH 的清除作用　H 2O2和 Fe2+
产生 ·OH ,邻二氮菲-Fe2+水溶液可以被氧化成邻
二氮菲-Fe3+ ,使邻二氮菲-Fe2+在 509 nm 处的最大
吸收峰小时 ,当体系中存在·OH 清除剂时 ,此氧化
过程受到抑制 , A509 nm降低 ,可通过 A509 nm来判断 ·
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OH 的清除能力。如图 2所示 , YTGP 对 ·OH 具
有一定的清除能力 ,且呈现良好的剂量依赖关系。
2.4　YTGP 对小鼠肝匀浆自发性脂质过氧化的影
响　丙二醛(MDA)是脂质过氧化的主要降解产物 ,
其含量的多少直接反应脂质过氧化的程度 ,也反应
了细胞受自由基攻击的程度 。如表 4所示 , YTGP
各剂量组均可抑制肝匀浆自发的脂质过氧化反应 ,
且随着药物剂量的增加 , MDA 的生成量减少 ,呈良
好的量效关系。
表4　YTGP 对小鼠肝匀浆自发性脂质过氧化的影响( x±s ,
n=5)
Tab 4　Effect o f YTGP on the auto-lipid pero xida tion in liv-
er tissue homogenate of mice( x±s , n=5)
组别 YTGP 的终浓度/mg·mL-1 A 532nm 抑制率/ %
对照组 - 0.115±0.013 -
阳性组 0.080 0.055±0.003 52.07
0.023 0.053±0.028 53.91
YTGP 0.064 0.060±0.003 47.83
0.145 0.072±0.004 37.39
3　讨论
本实验中采用体外实验的方法研究 YTGP 的
抗氧化活性。总还原能力的测定参照曹炜等[ 3]的方
法 ,抗 O2 -实验采用改良的邻苯三酚自氧化法 ,抗 ·
OH 实验采用邻二氮菲-Fe2+氧化法 ,诱发多不饱和
脂肪酸氧化 ,产生脂氧自由基和脂过氧自由基 ,引发
链式和支链式反应 ,使多不饱和脂肪酸进一步发生
过氧化形成脂质过氧化反应(LPO)。LPO 大部分
由肝细胞产生 ,其分解也主要在肝脏 ,MDA 是 LPO
的主要降解产物 ,其水平可反映 LPO 的程度。
本实验的结果说明:YTG P 具有一定的还原能
力和抗脂质过氧化作用 ,对羟自由基和超氧阴离子
自由基都具有一定的清除作用。因此 YTGP 在降
糖方面的药用价值有待进一步开发研究。
参考文献:
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[收稿日期] 2010-08-04
[ 作者简介] 陈永顺 , 男 ,硕士 ,主管药师 ,电话:0719-8801107 , E-mai l:cys1222cys@sina.com 　[ 通讯作者] 吴珍 , 女 ,主治医师 , 电话:0719-
8801503 , E-mail:w z330@sina.com
去甲斑蝥素白蛋白微球的制备
陈永顺1 ,吴珍2 ,董永成1 ,王启斌1 ,杜士明1 　(湖北医药学院附属太和医院 , 1.药学部 , 2.消化内科 , 湖北 十堰 442000)
[ 摘要] 　目的:对去甲斑蝥素白蛋白微球的制备工艺及质量进行研究。方法:以白蛋白为载体 , 采用乳化交联法制备去甲斑
蝥素白蛋白微球。在单因素考察的基础上 ,利用正交设计优化去甲斑蝥素白蛋白微球制备工艺 ,并对微球的粒径 、形态 、体外
释放特性及稳定性进行研究。结果:制得的微球形态圆整 ,平均粒径为(0.54±0.13)μm , 平均载药量为(51.36±2.45)%,平
均包封率为(62.28±3.27)%, 体外释放符合 Higuchi方程 , Q=10.1854 t1/2-1.0858(r=0.998 1)。结论:本实验获得了较理
想的去甲斑蝥素白蛋白微球 ,其体外释放特性符合长效制剂特征。
[ 关键词] 　去甲斑蝥素;白蛋白微球;体外释放
[中图分类号] R943　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2011)14-1174-04
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