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广西山油柑叶提取物对小鼠离体肠平滑肌的影响



全 文 :广西中医药 2011年 10月第 34卷第 5期 (总 )
广西山油柑叶提取物对小鼠离体肠平滑肌的影响
曾春晖 杨 柯* 广西中医学院 530001 南宁市明秀东路179号
谭娥玉 蔡妮娜 广西中医学院2010级硕士研究生 530001
李先梅 徐明光 广西中医学院2009级硕士研究生 530001
摘 要 目的: 观察广西山油柑叶提取物对小鼠离体肠平滑肌收缩活动的影响, 并探讨其可能的作用机
制。方法:通过小鼠离体肠段实验,观察不同浓度的山油柑叶提取物对小鼠正常离体肠收缩活动的影响和对Ach
和BaCl2引起离体肠兴奋的拮抗作用。 结果:山油柑叶提取物在终浓度为1~12 mg生药/ml浓度范围内,在给药后
的15 min内均能显著降低小鼠正常肠段收缩能力(P<0.05或P<0.01);在终浓度为4~12 mg生药/ml浓度范围内,
山油柑叶提取物可使Ach和BaCl2作用下的肠肌收缩张力减小(P<0.01);且均与剂量呈正相关关系。结论:广西山
油柑叶提取物能明显松弛小鼠正常离体肠收缩和拮抗Ach和BaCl2引起的肠兴奋作用。
关键词 山油柑;离体小肠;收缩活动;乙酰胆碱;氯化钡
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1003-0719(2011)05-0057-04
Effect of Extractive from Acronychia Pedunculata Leaves Growing in Guangxi on
Mice Intestinal Smooth Muscles in Vitro
Zeng Chunhui,Yang Ke
Guangxi TCM University,530001,NO.179 Mingxiudong Road,Nanning,Guangxi
Tan Eyu,Cai Nina postgraduate students from 2010 pharmacology,Guangxi TCM University,530001
Li Xianmei,Xu Mingguang postgraduate students from 2010 pharmacology,Guangxi TCM University,530001
Abstract objective:To observe the effects of extractive from acronychia pedunculata leaves on contraction of mice
intestinal smooth muscles in vitro and explore the possible mechanisms. Methods:The mice isolated intestines were
used to observe the effect on normal mice intestinal contraction and the intestinal stimulated antagonism to acetylcholine
and barium chloride by extractive from acronychia pedunculata leaves at different concentrations. Results:Within the
final concentration range between 1MG~12MG crude drugs·ml -1, extractive from acronychia pedunculata leaves
significantly reduced the contractility of normal mice intestinal smooth muscles in 15MIN after administration with a
dose-dependent manner(P<0.05 or P<0.01). Under the actions of acetylcholine and barium chloride, extractive from
acronychia pedunculata also declined the contractile tension of mice intestinal smooth muscles at the concentration
range from 4MG~12MG crude drugs·ml -1 with a dose-dependent manner(P<0.01). Conclusion:Extractive from
acronychia pedunculata leaves growing in Guangxi can significantly loose the contraction of normal mice intestines and
analogize the intestinal stimulation caused by acetylcholine and barium chloride.
Key words acronychia pedunculata, mice isolated intestines, contraction, acetylcholine, barium chloride
山油柑Acronychia pedunculata
(L.)Miq.又名降真香、山橘,为芸香
科山油柑属植物,以根、心材、叶、
果入药。主要分布于我国南部和印
度、马来西亚、缅甸、越南、老挝、泰
国、柬埔寨、苏门答腊、菲律宾等
地,是一种东南亚的特有物种[1]。
山油柑性平味甘,根、干木、叶具有
祛风活血和理气止痛的功效,可用
于治疗风湿性腰腿痛、跌打肿痛、
支气管炎、胃痛、疝气痛等;果实具
有健脾消食的作用,可治疗食欲不
振、消化不良等。近年来,有关山油
柑的成分研究发现,其主要含有
α-蒎烯及柠檬烯、三萜类化合物
鲍尔烯醇(bauerenol)、草酸钾、β-
谷甾醇、挥发油及山油柑碱
(acronycine)[2];对其药理研究主要
集中在山油柑碱抗肿瘤方面,对
多种小鼠移植肿瘤有显著抑制作
用 [3-6];但其理气止痛功效的相关
药效研究至今未见有报道。本文采
用小鼠离体肠段实验,观察山油柑
叶去油水提取液对小鼠正常离体
肠的作用和对抗由乙酰胆碱(Ach)
和氯化钡(BaCl2)诱导的肠兴奋。现
将实验结果报道如下。
*通讯作者
·57·305
广西中医药 2011年 10月第 34卷第 5期(总 )
1 实验材料与方法
1.1 动物 KM种小鼠33只,清洁
级,体重25~30 g,雌雄各半。购自
广西医科大学实验动物中心,合格
证号:Scxk2003-0003。
1.2 药品 山油柑叶采集于广西
南宁市郊区,经广西中医学院刘寿
养副教授鉴定为芸香科山油柑属
植物山油柑Acronychia pedunculata
(L.)Miq.的叶;溴化乙酰胆碱(国药
集团化学试剂有限公司,批号:
WF20050225);氯化钡(上海化工
专科学校实验工厂生产);Tyrode’s
溶液所用试剂均为分析纯,临用时
现配。
1.3 仪器 BL-420F生物机能实
验系统(成都泰盟科技有限公司);
HW-400S恒温平滑肌槽(张家港
市生物医学仪器厂)。
1.4 实验方法
1.4.1 山油柑叶去油水提液的制
备 取山油柑叶适量,加入8倍量
水,加热提取挥发油5 h,取提挥发
油后的水提液浓缩至1 g/ml,加入2
倍量的95%乙醇,室温放置过夜,
醇沉后过滤,取滤液,回收乙醇后
浓缩至3.2 g生药/ml的稠膏,4 ℃冰
箱放置备用。用时恢复至室温,取
适量稠膏,用蒸馏水配制成浓度分
别为0.15,0.3,0.6,1.2,1.8 g生药/ml
的溶液,离心后取上清液使用,作
用于离体肠段的终浓度分别为
1,2,4,8,12 mg生药/ml(相对应的
实验组分别为A、B、C、D、E组)。
1.4.2 离体小肠的制备[7] 取禁食
12 h后小鼠,脱颈椎致死,立即剖
开腹腔,找出胃幽门与十二指肠交
界处,以此为起点,取十二指肠近
端6~8 cm肠管置于装有Tyrode溶液
平皿中。分离肠系膜,将肠管剪成
0.5~1.0 cm小段,每鼠制备5~6段肠
段备用。小段肠管一端用线结扎,
固定在玻璃通气钩上,置于盛有15
ml Tyrode溶液的浴槽中,另一端固
定于张力换能器上与BL-420F生
物信号采集处理系统相连。维持浴
槽内Tyrode溶液温度(37±0.5)℃,
并持续匀速通入空气(约每分钟60
个气泡)。
1.4.3 对小鼠正常离体肠平滑肌
的影响 取1.4.2方法制备的肠段,
放入恒温平滑肌槽稳定约30 min
后,记录正常曲线10 min(计算
1,5,10 min时间点张力,取平均值
作为正常值),然后加入0.1 ml的蒸
馏水(空白对照组)或加入0.1 ml不
同浓度的受试药液(其终浓度分别
为1,2,4,8,12mg生药/ml),记录加入
蒸馏水或受试药液后的曲线30min,
观察小鼠离体肠段的收缩振幅。分
析加入药液后(空白对照组为加蒸
馏水后)1,5,10,15,20,25,30 min
时间点的振幅,按公式计算出张力
抑制率。张力抑制率(%)=(药前张
力-药后张力)/给药前张力×100%
(负值表示兴奋,正值表示抑制)。
1.4.4 对Ach兴奋小鼠离体肠平滑
肌的影响 取1.4.2方法制备的肠
段,放入恒温平滑肌槽稳定约30 min
后,记录正常曲线10 min(计算
1,5,10 min时间点张力,取平均值
作为正常值),然后加入0.2% Ach
0.1 ml,1 min后加入0.1 ml蒸馏水
(对照组)或不同浓度的受试药液
(其终浓度分别为 4,8,12 mg生
药/ml),并记录曲线30 min,观察小
鼠离体肠段的收缩振幅。分析药后
(对照组加蒸馏水后)1,5,10,15,
20,25,30 min时间点的振幅,按公
式计算出张力抑制率。
1.4.5 对BaCl2兴奋小鼠离体肠平
滑肌的影响 取1.4.2方法制备的
肠段,放入恒温平滑肌槽稳定约
30 min后,记录正常曲线10 min(计
算1,5,10 min时间点张力,取平均
值作为正常值),然后加入20% Ba-
Cl2 0.1 ml,1 min后加入0.1 ml蒸馏
水(对照组)或同体积不同浓度的
受试药液(其终浓度分别为4,8,12
mg生药/ml),并记录曲线30 min,观
察小鼠离体肠段的收缩振幅。分析
药后(对照组加蒸馏水后)1,5,10,
15,20,25,30 min 时间点的振幅,
按公式计算出张力抑制率。
1.5 统计方法 应用Prism5软件
进行统计学分析,计量数据以x±s表
示,采用t检验,P<0.05具有显著性
意义,P<0.01具有非常显著性意义。
2 实验结果
2.1 对正常小肠收缩活动的影响
见表1。
组 别
空白组
A组
B组
C组
D组
E组
6.98±10.47
19.37±10.76②
19.67±8.72②
26.27±13.77②
36.00±16.59②
36.39±11.91②
n
19
10
10
10
10
10
4.18±8.16
10.82±7.24①
11.87±8.86②
22.21±12.84②
33.71±13.27②
27.99±9.89②
10.85±12.86
21.63±11.14①
22.82±9.47②
29.68±15.76②
38.95±15.28②
37.65±14.69②
18.47±18.01
26.10±16.12
32.18±12.96
33.78±19.50
34.16±16.51②
36.76±19.57②
22.44±19.38
32.07±12.77
35.45±9.06
34.36±19.73
33.46±15.63②
36.62±20.33②
13.86±15.46
26.83±13.43①
26.10±10.17②
35.21±19.98①
36.75±15.10②
37.02±18.53②
17.51±18.24
28.42±13.50
26.80±12.72①
34.15±19.94①
35.71±15.95②
36.74±18.88②
5 min
张力抑制率(%)
1 min 10 min 25 min 30 min15 min 20 min
表1 不同浓度药物对小鼠正常离体肠平滑肌的影响 (x±s)
注:与空白组比较,①P<0.05,②P<0.01
·58· 306
广西中医药 2011年 10月第 34卷第 5期 (总 )
组 别
模型组
C组
D组
E组
-24.54±21.52
21.42±7.81①
28.83±7.75①
31.99±7.53①
n
24
12
12
12
-25.14±19.35
-32.34±17.65①
-27.08±16.96①
-19.39±7.60①
-19.21±25.88
8.65±18.06①
36.26±10.76①
42.81±9.00①
-8.95±29.62
24.84±26.42①
40.46±11.17①
41.19±9.47①
-16.24±28.54
21.77±23.78①
38.77±9.04①
42.21±7.49①
-13.02±29.21
22.73±25.04①
39.95±9.39①
39.63±8.54①
药后1 min
张力抑制率(%)
Ach 1 min 药后 5min 药后20 min药后10 min 药后15 min
-5.69±30.16
27.18±27.14①
41.27±10.05①
40.82±8.47①
-1.04±31.00
28.88±28.61①
41.89±10.15①
42.74±8.13①
药后25 min 药后30 min
表2 不同浓度药物对抗Ach兴奋小鼠小肠肌的作用研究 (x±s)
注:与模型组比较,①P<0.01(下同)
组 别
模型组
C组
D组
E组
-24.94±21.12
29.17±5.29①
35.56±8.90①
32.26±10.59①
n
24
12
12
12
-29.22±23.24
-28.06±13.02
-26.62±23.72
-27.03±23.34
-4.34±23.67
39.16±6.21①
48.72±15.74①
43.67±15.86①
4.15±29.49
43.76±11.53①
44.11±12.85①
44.29±18.07①
0.61±28.11
41.50±6.56①
47.32±13.80①
43.94±18.97①
-4.67±17.05
43.34±8.17①
45.97±11.76①
42.97±16.51①
药后1 min
张力抑制率(%)
BaCl2 1 min 药后 5min 药后20 min药后10 min 药后15 min
10.65±35.47
44.42±11.31①
43.14±15.72①
46.01±19.95①
8.78±31.95
37.56±10.15①
43.42±15.60①
47.46±19.58①
药后25 min 药后30 min
表3 不同浓度药物对抗BaCl2兴奋小鼠小肠肌的作用研究 (x±s)
实验结果表明,不同浓度的山
油柑叶去油水提液均能使肠肌张力
降低,收缩幅度变小,与空白组比较,
在给药后的15 min内各浓度组均具
有极显著作用(P<0.05或P<0.01);在
1~12mg/ml剂量范围内,随着给药剂
量增大,抑制效果越明显,抑制作用
持续时间越长,显示明显的量效正相
关性。说明山油柑叶去油水提液对正
常小肠收缩活动有明显抑制作用。
2.2 对Ach小鼠兴奋离体肠平滑
肌的影响 见表2。
结果表明,在实验观察期间,
Ach造成离体小肠兴奋的模型,表
现为基线上升,张力增加,抑制率
均为负值;山油柑叶去油水提液各
浓度均能使0.2%Ach兴奋小鼠肠肌
的基线降低,张力减小,与模型组
比较均具有非常显著性差异(P<
0.01);且给药剂量越大,对抗Ach
兴奋的作用也越强,在30 min观察
期内一直保持明显的抑制效果。说
明山油柑叶去油水提液具有对抗
Ach兴奋小鼠小肠肌的作用。
2.3 对BaCl2小鼠兴奋离体肠平滑
肌的影响 见表3。
结果表明,在实验观察期间,
BaCl2造成离体小肠兴奋的模型,表
现为使基线上升,张力增加,15 min
之内抑制率均为负值;山油柑叶去
油水提液各浓度均能使BaCl2兴奋
小鼠肠肌的基线降低,张力减小,与
模型组比较具有非常显著性差异
(P<0.01);给药剂量越大,对抗BaCl2
兴奋的作用也越强,且在30 min
观察期内一直保持明显的抑制效
果。说明山油柑叶去油水提液具有
对抗BaCl2兴奋小鼠小肠肌的作用。
3 讨 论
本实验结果表明,在1~12 mg
生药/ml剂量范围的山油柑去油水
提取液对小鼠正常离体肠的运动
具有显著抑制作用,且随着剂量的
递增,抑制效果越明显。
当乙酰胆碱(Ach)同平滑肌细
胞膜上的M受体结合时,通过与
cAMP为第二信使的细胞信号传
导,导致胞内钙离子浓度升高,兴
奋胃肠平滑肌,并产生强烈收缩运
动[8];氯化钡(BaCl2)则是直接作用
在平滑肌细胞膜上而引起收缩,主
要是细胞膜结合胞外钙完成的[9]。
因此我们选用Ach和BaCl2诱导肠
肌兴奋,观察山油柑去油水提取液
的作用,实验结果表明,终浓度分
别为4,8,12 mg生药/ml的水提液能
明显拮抗0.2%Ach和20% BaCl2对
离体小肠平滑肌的兴奋作用,使小
肠紧张性下降。由此推测,提取液
有可能通过抑制M受体,拮抗平滑
肌细胞膜L型钙通道,调控胞质内
钙浓度这一途径[10],减少钙离子进
入细胞内,从而使平滑肌收缩活动
减弱。但具体的作用机制还有待深
入研究。
参考文献
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种山油柑生长过程分析[J].仲恺
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·59·307
广西中医药 2011年 10月第 34卷第 5期(总 )
急性结膜炎是由细菌或病毒感
染引起的,好发于夏秋季,以发病
急,结膜充血,粘液性分泌物,患眼
有异物感以及灼热感为主要特征[1]。
目前尚无有效抗病毒药物,大多采
用氯霉素眼药水或无环鸟苷眼药水
点眼,或用四环素可的松眼膏涂眼,
重症或伴发热者则口服或静脉滴注
抗生素等。壮医称急性结膜炎为“乒
嗒红”,认为是由于风毒、热毒直接
侵犯眼睛,阻滞其龙路、火路网络分
支,使道路不通畅、功能受损、气血
紊乱发为此病[2];治疗上则以通调眼
部的龙路、火路的气血,祛除风热邪
毒为治则。我院壮医门诊自2010年9
月初至10月中旬,采用壮医药治疗
急性结膜炎患者300例,结合辨证施
护收到良好的效果。现报道如下。
1 一般资料
患者300例全部符合急性结膜
炎的诊断 [1],均在门诊治疗,其中
男176例,女124例;最小年龄2岁,
最大年龄84岁,其中<5岁189例,
5~15岁72例,>15岁39例;病程<2
天者102例,2~3天124例,>3天者
74例,平均2.85天;其中孕妇8例,
哺乳期妇女5例。
2 治疗方法
2.1 消红汤雾化外洗患眼 消红
汤由两面针10 g、板蓝根20 g、六耳
苓10 g、水杨梅10 g等中药组成,经煎
药室煎煮后真空包装备用。治疗时
将消红汤放入超声雾化器储药罐,
雾化喷嘴对着患眼,距离约5 cm进行
雾化,每次治疗15 min,每天2~3次。
2.2 内服壮药野菊花汤 由野菊
花30 g、生地黄15 g、玄参15 g、草决
明15 g等组方而成,经煎药室煎煮
(或自煎)后内服,每日1剂,分3次
服用,患儿可少量多次频服。
2.3 壮医药线点灸法 对于病情较
重、病程>3天及发热(体温>37.5℃)
的患者(孕妇患者不用此法),采用
2号药线(直径0.5 mm),按《壮医药
线点灸学》[2]中的施灸方法点灸,取
眉弓穴、睛明穴、曲池穴、手三里穴、
合谷穴、风池穴、大椎穴、耳尖穴、神
门穴、眼穴;发热患者加大椎穴、背
八穴,每穴点灸1壮,均用泻法。
以上治疗均以7天为1个疗程。
急性结膜炎300例的壮医药
综合治疗及护理
农秀明 葛春雷 王粤湘 张秀华 彭锦绣
广西中医学院第一附属医院 530023 南宁市东葛路89-9号
摘 要 目的:观察壮医药综合治疗急性结膜炎的临床疗效。方法:对
300例急性结膜炎患者采用壮药内服、壮药雾化外洗患眼及壮医药线点灸
综合治疗配合相应的护理,观察临床疗效。结果:治疗2天痊愈率为26.7%,
治疗4天痊愈率为96.3%;治疗7天后,300例患者全部痊愈,痊愈率100%。其
中治愈时间最短为2天,最长为7天,平均痊愈时间为4.32天。结论:壮医药综
合治疗急性结膜炎疗效好、疗程短,而且经济、安全,患者易于接受。
关键词 急性结膜炎;疗效观察;护理;壮医药疗法
中图分类号:R777.31;R291.8 文献标识码:B
文章编号:1003-0719(2011)05-0060-02
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