全 文 ：（总 ） 广西中医药 2013年 2月第 36卷第 1期
广西山油柑叶提取物对小鼠离体子宫的影响
韦 海 桂平市人民医院 537200 广西桂平市人民西路7号
曾春晖* 蔡妮娜 谭娥玉 李先梅 陈益清 颜 欣 广西中医药大学 530001
摘 要 目的：观察广西山油柑叶提取物对小鼠离体子宫收缩活动的影响，并探讨其可能的作用机制。方
法：采用小鼠离体子宫实验，观察不同浓度的山油柑叶提取液对小鼠正常离体子宫收缩活动的影响和对Ach和
缩宫素引起离体子宫兴奋的拮抗作用。结果：山油柑叶提取物在8 mg/ml、12 mg/ml浓度能显著降低小鼠正常子
宫收缩能力（P <0.05或P <0.01）；其4 mg/ml、8 mg/ml和12 mg/ml 浓度可使Ach和缩宫素作用下的子宫收缩张力
减小（P <0.01），且与剂量呈正相关趋势。结论：广西山油柑叶提取物能明显松弛小鼠正常离体子宫和拮抗Ach和
缩宫素引起的子宫兴奋作用。
关键词 山油柑叶；离体子宫；收缩活动；乙酰胆碱；缩宫素
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1003-0719（2013）01-0048-05
*通讯作者
山油柑Acronychia peduncu－
lata（L.）Miq.又名降真香、山橘，是
芸香科山油柑属常绿小乔木，主要
分布于我国南部和东南亚等国，是
一种东南亚的特有物种［1］。其药
用价值早在《本草纲目》中就有记
载，山油柑性平味甘，其叶具有芳
香气味，根、干木、叶具有祛风活血
及理气止痛的功效，可以治疗感
冒、咳嗽；熟果可食，果肉味甜、微
带麻舌感并可入药助消化；根可止
血定痛、消肿生肌、平气喘；树脂具
有解热、止痢等作用［1］。以往山油
柑的研究主要集中在化学成分［2-4］
及抗肿瘤活性等方面［5-8］，其化学
成分主要含有α-蒎烯、柠檬烯、鲍尔
烯醇（bauerenol）、草酸钾、β-谷甾
醇、挥发油及山油柑碱（acronycine）；
药理研究显示山油柑碱对多种小鼠
移植肿瘤有显著抑制作用，对17种
瘤谱中的12种有明显抑制作用［8］。
前期笔者报道了广西山油柑叶提
取物在体外具有良好的松弛正常
离体肠平滑肌作用和解痉作用，其
挥发油具有良好的抗菌作用［9-10］。
经查阅文献，对小鼠子宫平滑肌影
响的研究未见有报道。本文采用小
鼠离体子宫实验，观察山油柑叶去
油水提取液对小鼠正常离体子宫
的作用和对抗由乙酰胆碱（Ach）和
缩宫素诱导的子宫兴奋。现将实验
结果报道如下。
1 实验材料
1.1 动物 KM小鼠40只，体重
28~32 g，雌未孕，购自广西医科大
学实验动物中心，合格证号：
SCXK2003-0003。
1.2 药品 山油柑叶采集于广西
南宁市四塘，经广西中医药大学刘
寿养副教授鉴定为芸香科山油柑
属植物山油柑 Acronychia pedun－
culata（L.）Miq. 的叶。溴化乙酰胆
碱（国药集团化学试剂有限公司，
批号：WF20050225）；缩宫素注射
液（河南辅仁怀庆堂制药有限公
司，批号：0903062）；乐氏液溶液所
用试剂均为分析纯，临用时现配。
1.3 仪器 BL-420F生物机能实
验系统（成都泰盟科技有限公司）；
HW-400S恒温平滑肌槽（张家港市
生物医学仪器厂）。
2 实验方法
2.1 山油柑去油水提液的制备 取
山油柑叶适量，加入8倍量水，加热
提取挥发油5 h，取提挥发油后的
水提液浓缩至1 g/ml，加入2倍量的
95%乙醇，室温放置过夜，醇沉后
过滤，取滤液，回收乙醇后浓缩至
3.2 g/ml的稠膏，4 ℃冰箱放置备
用。用时恢复至室温，取适量稠膏，
配制成浓度分别为0.15，0.3，0.6，
1.2，1.8 g/ml的溶液，离心后取上清
液使用，该5种浓度对应作用于离
体子宫的终浓度分别为 1，2，4，
8，12 mg/ml（相对应的实验组分别
为A、B、C、D、E组）。
2.2 离体子宫的制备 ［11-14］ 取
28~32 g未孕的处于动情期的雌性
小鼠，于实验前4日灌胃给予已烯
雌酚每日0.2 ml/10 g，共4次，促使
其进入动情期。实验当日脱颈椎处
死小鼠，剖腹，用手术剪剪去子宫
系膜，在子宫二角相连处下端剪断，
将子宫取出，置于有乐氏液的培养
皿内，仔细剪除附着在子宫上的结
缔组织和脂肪组织。然后将子宫二
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角相连处剪开，取一角，一端用标本
钩钩上固定在浴槽底部，另一端用
线结扎与传感器相连。浴槽的乐氏
液以能浸没子宫为宜（15 ml）。保持
乐氏液温度 37±0.5 ℃，并持续匀速
通入空气（每分钟约60个气泡），静
置15 min，待子宫适应后，开始实验。
2.3 对小鼠正常离体子宫的影响
记录正常曲线10 min（计算
1，5，10 min 时间点张力，取平均值
作为正常值），然后空白对照组加
入0.1 ml的蒸馏水，余A~E组分别
加 入 0.1 ml 其 终 浓 度 分 别 为
1，2，4，8，12 mg/ml的受试药液，记
录加入蒸馏水或受试药液后的曲
线20 min，观察小鼠离体子宫的收
缩振幅。分析加入药液或蒸馏水后
5，10，15，20 min 时间点的振幅，
计算张力抑制率，结果进行t检验。
2.4 对Ach兴奋小鼠离体子宫的
影响 记录正常曲线 10 min（计算
1，5，10 min 时间点张力，取平均值
作为正常值），然后加入 0.2% Ach
0.1ml，1 min后模型对照组加入0.1
ml蒸馏水，C、D、E组分别加终浓度
为4，8，12 mg/ml的受试药液，并记
录曲线 20 min，观察小鼠离体子宫
的收缩振幅。分析药后5，10，15，
20 min 时间点的振幅，计算张力抑
制率，结果进行t检验。
2.5 对缩宫素兴奋小鼠离体子宫
的影响 记录正常曲线 10 min（计
算1，5，10 min 时间点张力，取平均
值作为正常值），然后加入5 U/ml
缩宫素0.1 ml，1 min后模型对照组
加入0.1 ml蒸馏水，C、D、E组分别
加终浓度为4，8，12 mg/ml的受试
药液，并记录曲线 20 min，观察小
鼠离体子宫的收缩振幅。分析药后
5，10，15，20 min 时间点的振幅，计
算张力抑制率，结果进行t检验。
2.6 计算公式及统计方法 张力
抑制率%=（给药前张力-给药后张
力）/给药前张力×100%。张力抑制
率为负值表示兴奋，正值表示抑
制。采用GraphPad Prism 5软件进
行统计学分析，计量数据以 x±s表
示，采用t检验，P <0.05 具有显著
性意义，P <0.01 具有非常显著性
意义。
3 实验结果
3.1 对正常离体子宫收缩活动的
影响 结果见表1和图1。
表1 不同浓度药物对正常离体子宫的影响 （x±s）
组别 n 浓度（mg/ml）
张力抑制率（%）
药后5 min 药后10 min 药后15 min 药后20 min
空白对照组 10 — 22.02±43.89 5.51±27.18 16.07±19.91 5.03±31.77
A组 6 1 -40.02±60.38 3.55±49.68 17.77±50.25 19.71±44.26
B组 6 2 -14.61±32.53 10.37±21.26 12.82±44.93 11.90±21.65
C组 6 4 -6.55±33.34 -7.95±19.21 3.53±23.15 2.25±18.38
D组 6 8 52.67±19.86① 53.17±32.47① 50.80±27.61① 47.83±23.68②
E组 6 12 46.27±26.71 48.73±29.73② 45.99±21.61② 42.64±26.28②
注：与空白对照组比较，①P <0.05，②P <0.01
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实验结果表明，终浓度为8，
12 mg/ml的山油柑叶去油水提液
对子宫收缩活动均有抑制作用，使
其肌张力下降，收缩幅度变小，与
空白对照组比较，有显著性差异（P
<0.05或P <0.01）。随着药物的浓度
越大，抑制子宫收缩活动的效果越
明显，显示出一定的剂量依赖关
系。
3.2 对0.2%Ach兴奋小鼠离体子
宫的影响 结果见表2和图2。
表2 山油柑叶去油水提液对Ach兴奋离体子宫的影响 （x±s）
组别 n 浓度（mg/ml）
张力抑制率（%）
药后5 min 药后10 min 药后15 min 药后20 min
空白对照组 10 — 22.02±43.89 5.51±27.18 16.07±19.91 5.03±31.77
模型对照组 6 — -100.68±83.18① -78.52±74.25① -95.83±100.75① -109.97±102.31①
C组 6 4 27.66±26.45④ 29.71±31.98③ 30.83±32.92③ 33.24±34.72③
D组 6 8 62.00±5.71④ 63.69±10.01④ 64.38±9.02④ 66.15±11.09④
E组 6 12 54.80±12.60 ④ 63.71±12.98④ 65.64±11.31④ 67.57±13.31④
注：与空白对照组比较，①P <0.05，②P <0.01；与模型对照组比较，③P <0.05，④P <0.01，下同
实验表明，0.2%Ach能造成离
体子宫兴奋模型，表现为基线上
升，张力增加，与空白对照组比较
具有显著性差异（P <0.05）；山油柑
叶去油水提液各浓度（4，8，12 mg/
ml）均能使0.2%Ach兴奋子宫的基
线降低，张力减小，与模型对照组
比较均具有显著性差异（P <0.05或
P <0.01）；且给药剂量越大，对抗
Ach兴奋的作用也越强，在20 min
观察期内一直保持明显的抑制效
果。表明山油柑叶去油水提液具有
拮抗Ach兴奋子宫的作用。
3.3 对5 U/ml缩宫素兴奋小鼠离
体子宫的影响 结果见表3和图3。
表3 山油柑叶去油水提液对缩宫素兴奋离体子宫的影响 （x±s）
组别 n 浓度（mg/ml）
张力抑制率%
药后5 min 药后10 min 药后15 min 药后20min
空白对照组 10 — 22.02±43.89 5.51±27.18 16.07±19.91 5.03±31.77
模型对照组 6 — -121.75±58.78② -110.46±42.36② -100.75±153.97② -93.29±36.07②
C组 6 4 19.94±3.63④ 20.83±6.14④ 21.53±7.46④ -1.52±1.97④
D组 6 8 35.35±18.34④ 40.28±19.59④ 41.99±23.62④ 0.97±0.97④
E组 6 12 39.54±6.74④ 44.49±10.15④ 45.43±12.70④ 43.04±12.54④
·50· 50
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实验表明，5 U/ml缩宫素能造
成离体子宫兴奋模型，表现为使基
线上升，张力增加，与空白对照组比
较，有非常显著性差异（P <0.01）；山
油柑叶去油水提液各浓度（4，8，
12 mg/ml）均能使缩宫素兴奋小鼠
子宫的基线降低，张力减小，与模
型对照组比较具有非常显著性差
异（P <0.01）；且给药剂量越大，拮
抗作用也越强，在20 min观察期内
各浓度一直保持明显的抑制效果。
表明山油柑叶去油水提液具有拮
抗缩宫素兴奋小鼠子宫的作用。
4 讨 论
一般认为在平滑肌上存在两
种Ca2 +通道：电压依赖的通道
（PDC）和受体激活的通道（ROC）。
当乙酰胆碱同平滑肌细胞膜上的
M受体结合时，通过与cAMP为第二
信使的细胞信号传导，导致胞内钙
离子浓度升高，兴奋子宫，并产生
强烈收缩运动［15-16］。缩宫素可促
进细胞外Ca2+经ROC内流，引起子
宫收缩［15］。另外，缩宫素与其受体
结合，激活磷脂酶C-三磷酸肌醇
（IP3）和二酯酰甘油-蛋白激酶C
（PKC）系统。PKC引起细胞膜上的
钙通道开放，细胞外钙离子内流入
细胞内；IP3被释放入细胞质，与钙
库上的受体结合引起细胞内钙库
释放，这两种途径同时引起细胞
Ca2+升高，导致子宫平滑肌收缩［17］。
本实验结果表明，不同浓度的山油
柑叶去油水提液对小鼠正常离体
子宫的收缩活动具有明显抑制作
用，且随浓度的增加，抑制效果越
明显；并可拮抗Ach和缩宫素兴奋
子宫的作用。由此推测，本品有可
能是通过胞质内钙浓度的调控，药
物-机械耦联这一途径［18］，拮抗钙
离子通道，减少钙离子进入细胞
内，从而使细胞内钙离子浓度降
低，导致子宫收缩活动减弱。山油
柑叶去油水提液中主要活性成分
和确切的作用机制尚需进一步的
研究。
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（2012-12-28 收稿/编辑 陈明伟）
广西地桃花药材HPLC指纹
图谱研究
曾海生 右江民族医学院附属医院 533000 广西百色市中山二路18号
陈 勇 谢 臻 周 媛* 广西中医药大学 530001
钟明玉 广西中医药大学第一附属医院 530023
摘 要 目的：建立广西地桃花药材的指纹图谱，为科学评价广西地
桃花药材质量提供参考依据。方法：采用高效液相色谱技术，色谱柱
Phenomenex Gemini C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），甲醇-0.5%冰乙酸水溶
液梯度洗脱，检测波长320 nm，柱温25 ℃，流速0.8 ml/min，分析时间
120 min，进样量为10 μl。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A
版）计算10批药材的相似度。结果：指纹图谱的方法考察包括精密度、稳定
性和重复性实验，均符合有关规定。建立的标准指纹图谱有17个共有峰，
与对照图谱相比较，每批药材色谱图相似度均在0.91以上。结论：该方法
精密度、稳定性及重现性较好，特征性及专属性强，可以有效地用于地桃
花原材料质量控制，为开发和利用地桃花药材资源提供依据。
关键词 地桃花；HPLC；指纹图谱
中图分类号：R284.1 文献标识码：A
文章编号：1003-0719（2013）01-0052-05
Research on HPLC Fingerprint of Urena Lobata L. Growing
in Guangxi
Zeng Haisheng（Afiliated Hopspital of Youjiang Medical University for
Nationalities，18 Zhongshaner Rd，Baise 533000，Guangxi, China）
ChenYong Xie Zhen Zhou Yuan（Guangxi University of Chinese Medicine,
Nanning 530001, Guangxi, China）
Zhong Mingyu（The First Affiliated Hospital of Guangxi University of
Chinese Medicine, Nanning 530023, Guangxi, China）
Abstract Objective：To establish HPLC fingerprint of Urena lobata L.
growing in Guangxi, in order to provide evidence of scientific assess for
quality control of it. Methods: HPLC was adopted on Phenomenex C18110A
column （5 μm, 4.6 mm×250 mm）by gradient elution with methanol-0.5%
glacial acetic acid, detection wavelength of 320 nm, column temperature of
25 ℃, flow rate of 0.8 ml·min-1, analysis time of 120 minutes, and injection
volume of 10 μl. Similarity of 10 different batches of Urena lobata L. was
基金项目：广西中医药管理局中医药科技专项课题（No.GZKZ1114）；广西中医药大学
重点课题（No.ZD2009016）
*通讯作者
·中药方剂·
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