全 文 ：检测波长 321nm;柱温 30℃。取雷尼酸锶和噻吩四酯对照品
适量 ,用流动相制成每 1mL 中分别含约 0.05mg 和 5μg 的溶
液 ,取 20μL 注入液相色谱仪 ,记录色谱图(见图 3), 雷尼酸锶
与噻吩四酯的分离度为 17 , 按噻吩四酯峰计理论板数为
9500。
图 3　雷尼酸锶与噻吩四酯的 HPLC分离图
1-雷尼酸锶;2-噻吩四酯
3.2　检测限　取噻吩四酯适量 , 用流动相溶解并逐步稀释测
定检测限。按 S/ N=3计算 , 噻吩四酯的检测限为 20.5ng。
3.3　样品中的中间体检查　取本品适量 , 精密称定 ,用流动
相溶解并制成每 1mL 含雷尼酸锶样品 0.5mg 的溶液 ,作为供
试品溶液;精密称取噻吩四酯对照品适量 , 加流动相溶解并制
成5μg·m L-1的溶液 , 作为对照溶液。精密量取对照溶液
20μL注入液相色谱仪 , 调节仪器灵敏度 , 使主成分峰高约为
满量程的 20%,精密量取上述两种溶液各 20μL , 分别注入液
相色谱仪 , 记录色谱图。供试品溶液色谱图中如显中间体峰 ,
按杂质自身对照品法计算 , 其峰面积不得大于对照溶液主峰
面积(1.0%)。经检测 , 3 批样品均未检测出噻吩四酯。
4　讨论
4.1　检测波长的选择　对雷尼酸锶与噻吩四酯进行了紫外
扫描 , 雷尼酸锶和噻吩四酯在 234nm 、321nm 波长处有最大吸
收。由光电二极管阵列检测器得出的各有关物质在 200nm ～
400nm 的光谱图可知 , 在 234nm 处 , 响应值大 ,并且检出杂质
最多 , 因此 ,选择 234nm 作为雷尼酸锶的检测波长。
4.2　流动相的选择　选择了磷酸二氢钾 、醋酸铵 、枸橼酸-三
乙胺 、冰醋酸-三乙胺等缓冲液与甲醇/乙睛体系为流动相进
行了一系列试验 , 考察雷尼酸锶与有关物质之间的分离情况 ,
再结合专属性试验 , 最后选择 0.2%冰醋酸溶液(用三乙胺调
节 pH 值至 5.5)-甲醇(95∶5)为流动相 , 雷尼酸锶与有关物质
之间分离完全 , 雷尼酸锶色谱峰的保留时间在 7.8min 左右 ,
峰形较好 , 与杂质峰分离度大于 1.5。
参考文献
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国医药工业杂志 , 2008 , 39(8):615-616.
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物分析杂志 , 2009 , 29(2):330-333.
祖 师 麻 总 香 豆 素 的 提 取 工 艺 研 究
何军民1 ,杨鸽华2 ,闫志健3 ,王丽丽3 ,石森林3(1.浙江东阳市红十字会医院 东阳 322221;2.浙江诸暨市人民
医院 诸暨 311800;3.浙江中医药大学药学院 浙江 310053)
摘要:目的　优选祖师麻总香豆素的提取工艺。方法　建立祖师麻总香豆素的紫外分光光度测定方法 ,采用 L9(34)正交设计 ,对祖师麻总香
豆素的提取条件进行优化。结果　方法学考察表明 ,精密度 、稳定性 、重现性 、回收率等均符合要求;祖师麻总香豆素的最佳提取工艺为 10倍
量乙醇 、回流提取 1.5h 、提取 3次 ,以此条件提取祖师麻总香豆素的提取率达到 25.7%。结论　本研究建立的祖师麻总香豆素UV 测定方法稳
定 、可靠 、简便;确定的祖师麻总香豆素提取条件科学合理 、稳定可行。
关键词:祖师麻;总香豆素;提取工艺
中图分类号:R282.7　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2011)-12-0086-03
作者简介:何军民 ,男(91971.2-)。毕业于北京中医药大学 ,职称:主治医师。
Study on extract ion of total Coumarin in Cortex Daphnes
HE Jun-min1 ,YANG Ge-hua2 , YAN Zhi-jian3 ,WANG Li-li3 ,SHI Sen-lin3(1.Dongyang red cross hospital ,Zhejiang
322221 , China;2.Zhuji Peopel′s Hospital , Zhejiang 311800 , China;3.Pharmacy College ,Zhejiang Chinese Med-
ical University ,Hangzhou 310053 ,China)
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海峡药学　2011年　第 23卷 第 12期
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the ex t raction of total coumarin in cortex daphnes.METHODS　The ex-
traction condiction w as optimized wi th orthogonal design by the detection of UV spect rum.RESULTS 　Total
coumarin ex t raction w as affected by ex t raction f requency , solvent quantity , ex traction time.CONCLUSION　The
study of measuring cortex daphnes by UV are stable , credible and convenient.The ex traction condition are reason-
able and feasible.
KEY WORDS:Co rtex daphnes;Total coumarin;Ex traction
　　祖师麻 Cor tex Daphnes 为瑞香科植物黄瑞香 Daphne gi-
raldii Nitsche、陕甘瑞香 D.tangutica Maxim.和凹叶瑞香
D.retusa Hemsl的干燥根皮与茎皮 , 具有祛风通络 , 活血止痛
等功效 ,临床用于治疗风湿痹痛 , 头痛 、胃痛等症。祖师麻主
要含有香豆素 、黄酮 、木质素等成分〔1 ～ 3〕 , 其中香豆素类成分
具有显著的抗炎 、镇痛 、抗血栓等作用〔4 , 5〕。
目前的研究主要集中于祖师麻甲素 , 而有关其总香豆素
的提取工艺等研究较少。因此 ,本文采用正交试验设计 ,对祖
师麻总香豆素的提取工艺进行了研究 , 旨在为其后续新制剂
的研究开发奠定基础。
1　材料 、试剂与仪器
1.1　材料　祖师麻饮片(产地:甘肃)
1.2　试剂　祖师麻甲素对照品(中国药品生物制剂检定所 ,
110900-200405);无水乙醇 , 盐酸 , 正辛醇等均为分析纯 , pH
6.8 磷酸缓冲液(实验室配制)
1.3 　仪器　UV-2450 紫外可见分光光度计(日本岛津);
DGG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱(上海森信试验仪器有限
公司);DKS-24 型电热恒温水浴锅(上海经济区沈荡中新电器
厂);JA2003N 电子天平(上海精密仪器有限公司天平仪器制
造厂);XS105 分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公
司);KH-250DB 型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有
限公司);WH-861 涡旋混合器(太仓市科教仪器厂);DZF6050
型真空干燥箱(上海博讯实业有限公司);R-501 型旋转蒸发
仪(上海申胜技术有限公司);SH8-82 恒温振荡仪(淄博中惠
仪器有限公司)。
2　方法与结果
2.1　祖师麻总香豆素的制备方法　称取干燥祖师麻饮片
100g , 加无水乙醇 1000mL 加热回流 1h , 收集提取液 ,反复提
取三次 , 合并提取液 , 减压浓缩成浸膏 ,真空干燥即得祖师麻
醇提取物。
2.2　对照品溶液等的配置
2.2.1　供试品溶液的配置:精密称取干燥祖师麻醇提取物约
25mg 于 50m L容量瓶中 , 加适量无水乙醇溶解 , 并稀释至刻
度 ,精密移取 1m L 置于 10mL 容量瓶 , 用无水乙醇稀释至刻
度 ,即得。
2.2.2　对照品溶液的配置:精密称定祖师麻甲素对照品约
5mg于 50mL 容量瓶中 , 加适量无水乙醇溶解 , 并稀释至刻
度 ,即得。
2.3　检测波长的选择　采用紫外分光光度法测定祖师麻总
香豆素的含量 , 祖师麻甲素对照品乙醇溶液与供试液在 200
～ 500nm 波长范围扫描 , 祖师麻甲素和祖师麻总香豆素在波
长 327nm 左右均有最大吸收 ,因此确定检测波长为 327nm。
1　对照品紫外吸收光谱图　　　图 2　供试品紫外吸收波光谱图
2.4　标准曲线的绘制　分别精密量取祖师麻甲素对照品溶
液0.5 , 1.0 , 2.0 , 3.0 , 4.0 , 5.0mL 于 25mL 容量瓶中 , 加无水
乙醇定容至刻度 , 以无水乙醇做空白 ,分别于 327nm 处测定 ,
记录吸光度 , 以吸光度 A 为纵坐标 ,浓度 C(μg·mL-1)为横坐
标 , 绘制标准曲线 , 得回归方程:y=0.0664x+0.0044(R2=
0.9992), 表明祖师麻总香豆素在〔1.98μg·m L-1 ～ 19.76μg·
mL -1〕浓度范围内线性关系良好。
2.5　精密度试验　取供试品溶液于327nm 处测定 , 连续重复
测定 6 次 ,记录吸光度 , 结果 RSD 为 0.17%, 表明精密度良
好。
2.6　稳定性试验　取供试品溶液分别放置0 , 2 , 4 , 8 , 12 , 24h
后于 327nm 处测定 , 记录吸光度 , 结果其 RSD 为 0.19%, 表
明供试液在 24h内稳定性良好。
2.7　重现性试验　精密称取干燥祖师麻醇提取物约10mg , 6
份 , 分别置于 50mL 容量瓶中 , 加适量无水乙醇溶解 , 并稀释
至刻度 , 精密移取 1mL 置于 10m L 容量瓶 , 用无水乙醇稀释
至刻度 , 于 327nm 处测定 , 记录吸光度 , 按标准曲线法计算祖
师麻醇提取物总香豆素含量 , 结果 RSD为 1.93%, 表明该方
法重现性较好。
2.8　加样回收率试验　精密称取已知含量样品6份于 50m L
容量瓶中 , 分别加入祖师麻甲素对照品约 5mg ,加适量无水乙
醇溶解至刻度 , 精密移取 1m L 置于 10mL 容量瓶 , 用无水乙
醇稀释至刻度 , 于 327nm 处测定 , 记录吸光度 ,按标准曲线法
计算含量 , 并计算回收率 ,结果(见表 1), 表明该法回收率较
好。
2.9　祖师麻总香豆素提取工艺的优化
2.9.1　实验设计:根据预试验 , 选择乙醇用量 、提取时间和提
取次数为因素 , 每因素 3 水平 , 采用 L9(34)表安排试验 , 因素
及水平安排(见表 2)。
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Strait Pharmaceutical Journal Vol 23 No.12 2011
表 1　回收率试验结果
称样量(mg)
已有香豆素量(mg)
加入对照品量(mg)
实测值(mg) 回收率(%)
平均回收率(%) RSD(%)
10.89 1.63 5.01 6.65 100.2
10.92 1.64 5.03 6.67 100.1
25.13 3.77 5.00 8.75 99.7 99.8 0.28
25.03 3.75 5.05 8.79 99.8
38.89 5.83 5.08 10.88 99.4
35.01 5.25 4.91 10.16 100.0
表 2　因素水平表
试验因素 编码 低 中 高
乙醇用量(倍数) A 5 8 10
提取时间(h) B 1 1.5 2
提取次数 C 1 2 3
2.9.2　结果及分析　正交试验结果(见表 3)。
表 3　正交试验结果
序号 乙醇用量(倍数) 提取时间(h) 提取次数 总香豆素得率(%)
1 5 1 1 1.78
2 5 1.5 2 2.35
3 5 2 3 1.81
4 8 1 2 2.56
5 8 1.5 3 2.19
6 8 2 1 1.98
7 10 1 3 2.24
8 10 1.5 1 2.38
9 10 2 2 2.67
注:祖师麻总香豆素得率=祖师麻总香豆素粉末量(g)/饮片质量(g)
×100%
采用直观分析法对试验结果进行初步分析(见表 4), 对
总香豆素得率影响大小依次为提取次数>乙醇用量>提取时
间 ,较好的工艺参数为 A 3B2C2 。
表 4　极差分析结果
乙醇用量(倍数)提取时间(h) 提取次数 误差项
均值 1 1.98 2.19 2.05 2.21
均值 2 2.24 2.37 2.53 2.19
均值 3 2.43 2.15 2.08 2.25
极差 0.45 0.15 0.48 0.06
正交设计的极差分析简便易行 , 计算量也小 ,也较直观 ,
但极差分析精度较差 ,判断因素的作用时缺乏一个定量的标
准。因此 , 本文采用方差分析法对各试验因素的影响大小进
行分析 ,结果(见表 5)。方差分析结果与极差分析结果一致 ,
对祖师麻总香豆素得率的影响也是提取次数>乙醇用量>提
取时间 , 且提取次数和乙醇用量对其得率有显著影响。
表 5　方差分析结果
因素 离差平方和 自由度 F 值 P值
乙醇用量(倍数) 0.307 2 61.40 <0.05
提取时间(h) 0.038 2 7.60 >0.05
提取次数 0.431 2 86.20 <0.05
误差 0.01 2
注:F0.05(2 , 2)=19.0
2.9.3　验证试验:根据以上结果确定的祖师麻总香豆素提取
工艺条件为 A3B2C2 , 即 10 倍量乙醇 , 提取 1.5h , 提取 2 次。
进行验证试验 , 结果(见表 6)。
表 6　验证试验结果
实验号 投料量(g) 提取物量(g) 提取物纯度(%)
1 500 20.1 24.82
2 500 19.8 27.95
3 500 22.7 25.43
4 500 23.5 25.94
5 500 21.4 24.17
3　讨论
3.1　对于祖师麻的质量控制方法 ,目前主要采用 HPLC 法控
制祖师麻甲素〔6 , 7〕 ,由于祖师麻总香豆素均有药效作用 , 因此
建立了祖师麻总香豆素的含量测定方法 , 结果线性 、精密度 、
稳定性 、准确度等均符合要求 , 且操作简便可行 ,可用于祖师
麻及其总香豆素的质量控制。
3.2　本文以乙醇用量 ,提取时间与提取次数为主要考察因素
进行正交试验 , 结果显示以 10 倍量乙醇 , 提取 2 次 , 每次
1.5h , 总香豆素得率较高 ,影响因素大小为提取次数>乙醇用
量>提取时间;采用优化的提取工艺进行验证试验 , 结果粗提
物的纯度达到 25.7%,表明该工艺条件基本可行。
参考文献
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海峡药学　2011年　第 23卷 第 12期