全 文 ：3　讨论
3.1　赤芍 、白芍是临床常用中药 ,始载于 《神农本草
经 》,统称为芍药 。南北朝时期 , 《神农本草经集注》中
始提及芍药有赤 、白之分。宋 、元时期 ,对赤 、白芍应用
之区别的认识渐趋成熟。金·成无己 《注解伤寒论》亦
提出:“芍药 ,白补而赤泻 ,白收而赤散 ”。发展至现代 ,
中医对赤 、白芍的功效差异已有共识 ,二者在临床应用
中不可相互替代 。二者都具有活血作用 ,白芍侧重补
血 ,赤芍侧重于凉血 。但二者的补血作用具体体现在
哪些环节 ,相关活性成分尚不清楚 。二者在基源上有
相同之处 ,质量标准尚不能有效区分赤芍与白芍 ,因此
在一定程度上影响药材生产与临床应用。
3.2　实验结果表明 ,对环磷酰胺造模所致血虚模型 ,
白芍各提取物组呈较为明显的补血作用 ,且作用强度
优于赤芍组 ,与临床中对二者在补血方面的认识一致。
3.3　实验中所用赤芍与白芍的提取物分组方法系为
谱效分析的需要 ,下一步的工作将通过多元分析方法
对于确认赤芍 、白芍补血作用的功效成分 。
参考文献:
[ 1] 　国家药典委员会 .中华人民共和国药典 [ S] .一部 .北京:化学
工业出版社 , 2010:96, 147.
[ 2] 　马增春 ,谭洪玲 ,肖成荣 ,等 .环磷酰胺损伤小鼠骨髓造血的机制
[ J] .毒理学杂志 , 2007, 21(4):332.
桦菌芝多糖的抗突变作用研究
齐彦1 ,王瑶 2 ,郭丽新 1 ,于英君 1
(1.黑龙江中医药大学 ,黑龙江　哈尔滨　150040;2.黑龙江中医药大学附属第一医院 ,黑龙江　哈尔滨　150040)
摘　要:目的:研究桦菌芝多糖对环磷酰胺(CP)致小鼠微核率 、染色体畸变率改变的影响 ,以探讨其对
突变的拮抗作用 。方法:60只小鼠随机分成 6组 ,分别为对照组 、桦菌芝多糖低剂量组 、桦菌芝多糖中
剂量组 、桦菌芝多糖高剂量组 、猪苓多糖组 、环磷酰胺组。连续 8d给药 ,于第 9、10d给予环磷酰胺 , 于
第 10d注射环磷酰胺后 ,颈椎脱臼法处死试验动物 。取骨髓常规制片 ,光学显微镜观察计数微核和染色
体个数 。结果:与阳性对照组比较 ,高中低 3个剂量组微核形成率和染色体畸变率有显著的差异(P<
0.05)。结论:桦菌芝多糖具有抗突变作用。
关键词:桦菌芝多糖;抗突变;微核;染色体
中图分类号:R285.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1002-2406(2011)01-0021-03
基金项目:黑龙江省教育厅项目(11521266)
作者简介:齐彦(1970-),女 ,实验师 ,主要从事生物化学与分子生物学
研究。
收稿日期:2010-10-28
修回日期:2010-11-10
　　桦菌芝为多孔菌科植物木蹄的菌体 (Pyropol-
yporusfomentaries(L.exFr.)Teng)。多寄生于桦及
栎的树干上 , 淡微苦 , 性平 , 能消积 、化瘀 、抗癌。用
于治疗小儿食积 、食管癌 、胃癌 、子宫癌[ 1] ,资源十分
丰富 , 但目前对其药理作用机制的研究很少 , 有待于
人们进一步研究和开发利用。
随着社会的发展 ,人类平均寿命有了很大的提高 ,
而各种疾病成为影响人类寿命的重要因素 ,其中 ,肿瘤
疾病发病率更是日益增高 。肿瘤的形成与人体正常细
胞和染色体的突变有密切关系 ,因此 ,应用抗突变药物
来降低人体自身正常细胞和染色体的突变率 ,对于肿
瘤的防治有着深远意义 [ 2] 。中药多糖具有抗肿瘤作
用 , 且没有或很少有常用抗肿瘤化疗药物的毒副作
用 ,已越来越引起人们的重视 [ 3] 。国外有报道称 ,桦
菌芝多糖对小鼠肉瘤 -180有抑制作用 ,注射液能增
加小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能[ 4] ;对 A/jax系小鼠
艾氏腹水癌亦有显著的抑制作用 [ 5] ,但对其进一步作
用机理和开发成新药的研究未见报道 。
本实验研究桦菌芝多糖拮抗微核 、染色体畸变作
用的形成 ,对进一步研究桦菌芝多糖的抗肿瘤作用具
有十分重要的意义。桦菌芝多糖在这面的研究目前还
未见报道 ,本实验对此进行研究 ,为其抗突变及抗肿瘤
作用提供依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　实验动物
昆明种小鼠共 120只 ,雌雄各半 ,体重 20 ～ 22g,
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由黑龙江中医药大学动物中心提供 SCXK(京 2007-
0001号)。
1.1.2　药品与仪器
桦菌芝多糖 (黑龙江中医药大学生化教研室制
备);环磷酰胺(sigma公司 ,批号:K06R045);生理盐
水(哈尔滨三连药业有限公司 ,批号:070520A);秋水
仙素(上海国药集团化学试剂有限公司提供 ,批号:
F20040408);猪苓多糖注射液(连云港正大天晴制药
有限公司 ,批号:20020509);甲醇 、氯化钾 、冰醋酸均为
分析纯;尼康显微镜(YS100);恒温水浴锅(上海跃进
医疗器械厂);离心机(北京医用离心机厂)。
1.2　方法
1.2.1　分组
将小鼠 120只分成两批 ,每批各 60只 ,分别供微
核实验和染色体畸变实验使用 。
1.2.2　小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验
选取 20 ～ 22g昆明种小鼠 60只 ,雌雄各半 ,随机
分为 6组 ,每组 10只 ,雌雄各 5只。阴性对照组(生理
盐水)、阳性对照组(环磷酰胺 , 40mg·kg-1)和 3个桦
菌芝多糖剂量组 (100mg·kg-1、 50mg·kg-1 、 25mg·
kg-1)、猪苓多糖组(5mg·kg-1)。阴性对照组和剂量
组第 1 ～ 10d分别肌肉注射生理盐水 、桦菌芝多糖注射
给药 0.1mL·只 -1 ,每日 1次 ,猪苓多糖组(5mg·kg-1)
注射给药 0.1mL·只 -1 ,每日 1次。阳性对照组第 1 ～
8d肌肉注射生理盐水 ,于第 9、 10d腹腔注射环磷酰
胺 ,于第 10d注射环磷酰胺 6h后 ,颈椎脱臼法处死试
验动物 。取其双侧股骨 ,用 75%乙醇浸泡的纱布剔除
肌肉 ,剪断肌骨 ,以 3mL生理盐水冲洗骨髓细胞 ,要冲
净髓腔内的全部内容物 ,以 1000r·min-1离心 5min,弃
上清液 ,仔细混匀沉淀物。常规制片 ,每只小鼠涂 3张
片子 ,并编号 ,自然凉干 ,甲醇固定 10min, 1∶9Giemsa
染色 10 ～ 15min、油镜观察。每只动物计数 1000个嗜
多染红细胞 ,并记录出现微核细胞数 ,样本比较采用方
差检验 ,计算抑制率。抑制率 =[ (阳性组出现数 -试
验组出现数)/阳性组出现数 ] ×100%。
1.2.3　染色体畸变实验
前面具体给药方法基本与微核试验相同 ,最后 ,注
射环磷酰胺 2h后 ,再注射秋水仙素(4ug·g-1)。 4h后
颈椎脱臼法处死小鼠 ,取其双侧股骨 ,用 75%乙醇浸
泡的纱布剔除肌肉 ,剪断肌骨 ,以 3mL生理盐水冲洗
骨髓细胞 ,要冲净髓腔内的全部内容物 ,直至股骨变
白 ,以 1000r·min-1的速度离心 10min,去上清液 , 低
渗 ,固定 ,再离心 , 再去上清 ,常规制片 , Giemsa染色
8min,油镜观察。每只动物计数 100个中期分裂细胞 ,
记录染色体结构异常和数目异常的细胞。各组数据以
( x±s)表示 ,样本比较采用方差检验 。染色体畸变率
(%)=染色体畸变总数 /分析染色体的总数 ×100%。
2　结果
2.1　小鼠骨髓微核及染色体畸变的细胞学特征
小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核是在诱变剂环磷酰
胺的作用下 ,中幼红细胞失核而形成的 ,经 Geimsa染
色 ,出现 1个或几个蓝色小亮点 ,即为微核 。在 1个视
野中 ,连续 2个细胞同时出现微核(见图 1A);在 1个
视野中 ,出现 1个微核(见图 1B),小鼠骨髓细胞的染
色体畸变 ,主要表现为染色体的断裂和部分缺失。
图 1　小鼠骨髓微核图(Geimsa染色 , ×100)
注:A:连续 2个细胞同时出现微核;B:1个细胞出现 1个微核:箭头:微核
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2.2　小鼠骨髓微核及染色体畸变统计学分析
统计结果表明 ,桦菌芝多糖各剂量组对 CP诱导
的小鼠骨髓 PCE微核率有抑制作用 。与阳性对照组
比较 ,差异显著(P<0.05)。随着剂量的增加抑制率
增强 ,其中 100mg·kg-1时拮抗作用最强 , 抑制率为
41.74%,见表 1。桦菌芝多糖对环磷酰胺诱导小鼠骨
髓染色体畸变率有抑制作用 。与环磷酰胺对照组比
较 ,高剂量组有显著性差异 , P<0.01;中剂量组有差
异 , P<0.05,详见表 2。
表 1　桦菌芝多糖对 CP诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的影响( x±s)
组别 多糖的浓度(mg·kg-1) CP(mg·kg-1) n PCE(个) 微核率(‰) 抑制率(%)
阴性对照组 - - 10 1000 1.8±0.788 -
阳性对照组 40 10 1000 33.3±6.464 -
高剂量组 100 40 10 1000 19.4±3.657＊＊ 41.74
中剂量组 50 40 10 1000 21.3±3.267＊＊ 36.04
低剂量组 25 40 10 1000 24.4±5.232＊ 26.73
猪苓多糖剂量组 25 40 10 1000 19.2±4.442 42.34
　　注:与环磷酰胺对照组比较 , ＊P<0.05;与环磷酰胺对照组比较 , ＊＊P<0.01。
表 2　桦菌芝多糖对环磷酰胺诱导小鼠骨髓染色体畸变率的影响( x±s)
组别 药物浓度(mg·kg-1) n 细胞个数(个) 畸变率(%)
空白对照组 - 10 100 21.4 ±4.38
环磷酰胺组 40 10 100 45.3 ±7.86
高剂量组 100 10 100 29.2 ±6.26＊＊
中剂量组 50 10 100 38.0 ±4.13＊
低剂量组 25 10 100 38.2 ±4.26＊
猪苓多糖剂量组 25 10 100 29.8 ±6.44＊＊
　　注:与环磷酰胺组比较 , ＊P<0.05;与环磷酰胺组比较 , ＊＊P<0.01。
3　讨论
采用评价细胞遗传学损伤的标准试验 ,小鼠骨髓
PCE微核试验和小鼠骨髓染色体畸变试验检测桦菌
芝多糖的抗突变作用 。骨髓嗜多染红细胞的微核是在
诱变剂(环磷酰胺)的作用下 ,中幼红细胞失核而形成
的 , 对于骨髓细胞中的染色体造成了 DNA的损伤 ,从
而导致了染色体的畸变。利用这一发病机理 ,在使用
诱变剂的同时 ,给予桦菌芝多糖 ,拟观察其抗诱变作
用 。结果表明 ,阴性对照组的微核率为 1.8‰,处于自
发突变的 1‰ ～ 3‰的范围内。桦菌芝多糖 3个剂量
组 ,与阳性对照组比较 , 具有抗突变的作用 (P<
0.05);对小鼠骨髓染色体畸变也有抑制作用 。其机
理可能是桦菌芝多糖通过提高机体的免疫功能 ,帮助
机体快速修复诱变剂引起的遗传损伤[ 6] 。但其具体
的机制还需要进一步的探讨。
参考文献:
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生物系.长白山植物药志 [ M] .长春:吉林人民出版社 , 1982:53-
55.
[ 2] 　中华本草编委会编.中华本草(第二册)[ M] .第 6卷.上海:上海
科学技术出版社 , 1999:902.
[ 3] 　郑敏.中药多糖抗肿瘤的药理学进展 [ J] .国外医学·中医中药分
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[ 4] 　江苏新乡医学院.中华大词典 [ M].上海:上海科学技术出版社 ,
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[ 5] 　曹军 ,孙巧红.实验生物化学导论 [ M] .哈尔滨:哈尔滨工程大学
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[ 6] 　宋高臣 ,郭新民 ,郭丽新 , 等.桦菌芝多糖的抗肿瘤作用及其免疫
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