全 文 ：13 4中国实验动物学杂志 1 92年第 2卷第 3. 4期
兴安升麻对丝裂霉素C 诱发W s i ta r大鼠
微核的抑制作用
林 新 蔡有余怜 李文魁 肖培根
( 中国 玉学 科学反药用植物资原汗发 研究所 , 北京 )
摘要
抑制作用 .
异 .
关健词
应用w is 比 r 大鼠骨髓嗜多染红细胞微核法 , 观察了兴安升麻对丝裂霉素 c 的纸胞毒性的
结果表明兴安升麻可以明显抑制丝裂霉素 c 诱发的微核率 , 与对照组相比较 , 有显著差
兴安升麻 w i s 讯 r 大鼠 丝 裂曝索 c 微核 抗突变
兴安升麻 ( C i o J’c ij 叼 3 d 。 扒 : ic a ) 为毛食科植物 以根状茎入药 , 其 别 名 有 周升麻
( ( 本经 》 ) 、 周升麻 ( 《 别录 》 ) 、 鸡骨升麻 ( 《 陶宏景 》 ) 、 鬼脸升麻 ( ( 本 草纲 目 》 )
等 , 对温毒 、 火毒 、 疫毒和误食某些食物引起的中毒均有不同程度的解毒功效加〕 . 现代病理研
究表明兴安升麻具有较强的抗炎 〔“ 〕、 抗突变 〔“ 〕作用 。 为进一步从细胞染色体水平 阐明 其 抗
突变作用 , 在动物急性毒性试验的基础上 , 我们进行了骨髓嗜多染红细胞微核试验 , 现将方
` 法和结果报道如下 .
材·料与方法
1
提供 .
2
实验动物 w i s t : r 大鼠40 只 , 休重 2 2 。、 3。。 ; . 由中国医学科学院实 验 动物研究所
药品和试剂 兴安升麻总皂试由本所化学室从 兴安升 麻 ( C i o i 。 i fu 夕。 d ha “ : ica
的根状茎 中提得 。 提取方法为 : 将兴安升麻的水提取液用 D I O I大孔树脂吸附 , 先 用水洗脱
多次至水洗脱无色以除去杂质 , 弃去水洗液 , 用甲醇洗脱该树脂至洗脱液无皂贰显色反应 ,
合并甲醉洗脱液 , 回收甲醇 即得黄白色水溶性兴安升麻总皂贰固体 . 丝 裂 霉 素 c 为 日本
K y 。 w a H a k k 。 k o g y o 公司产品 。
3 方法
3
.
1 试验动物分组 将认 is t a r大鼠分为 3个给药组和 2个对照组 , 即 : 1/ ZL D 。 。高剂量 ·
组 、 2邝L D 。 。 中剂量组 、 1 / 3 2 L D 。 。低剂量组 、 丝裂霉素 。 阳性对照组 、 生理盐水阴 性 对照
组 。 试验动物随机分组 , 每组 8只 , 雌雄各半 , L D 。 。为 70 o m 只 / k g 。
3
.
2 给药 给药组灌胃给药共 2次 , 中间间隔 24 h , 第二 次给药后 , 阳性对 照 组 和 给
药组腹腔注射丝裂霉素 C ( 3 c m酬 k g ) , 再过 c五取骨髓 。
3
.
3 微核标本的制备〔` 〕将大 鼠断头法处死 , 剥离双侧股骨 , 除尽肌肉、 血污 , 剪断股
骨两侧骨饰 , 暴露骨髓后 , 用含小牛血清的注射器把骨髓细胞冲入锥形离心管内 , 在混合器
上振荡 3 、 s m in , 以 10 0 0 r p 二离心 10 m i 。 , 用毛细血管吸尽上清液 , 将沉淀制成浓 的 细 胞悬
. 中国医学科学院实脸动物研究所
13 5
液 , 涂片 , 风干后用甲醇固定。 、 I c二 in , 然后用 2 : S iC m s a 磷酸缓冲液 ( p H 7 . 2 ) 染 色 15
m in
, 用自来水冲洗掉残余染料 , 风干 。 于油镜下计数 10 0 个嗜多染红细胞中具微核的细胞
数。
结 果
结果见 附表和附图 。 可以看出 , 给药组微核率的变化随着给药剂量的增加而减少 , 经重
复试验 , 高剂量给药组 、 中剂量给 药组及低剂量给药组的微核率分别为 : 5 . 1 3 士 3 . 5 2 、 4 5 . 75
士 3 · 5 4 、 6 3 · 6 3 士 5 · 1 5 , 均比阳性对照组 ( 6李一7 5 士 4 · 0 6 ) 低 、 比阳性对照组 ( 2 · 5 土 1 · 19 )
高 , 给药剂量与微核率之间存在着一定的线性关系 , 经统计学处理 , 不同浓度的升麻总皂贰
与丝裂霉素 c诱发遗传损伤指标改变的关系可归纳为一线性方程 : Y 二 3 . 2 6 5 8 + o . 17 24 x ( r 一
。 . 96 6 1 ) , 其 中 Y 代表抑制率 ) < 1 0 、 X 代表给 药剂量 。
附表 兴安升麻拮抗M M C诱发W i s at r 大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率
升麻剂量
( m g /砍 )
计数细
胞总数
微核均数 (呱 )
(又土 S )
抑制率
(肠 、
高剂量组
中剂量组
低剂量组
阳性对照组
阴性对照组
3 5 0
8 7
。
5
2 1
。
8 8
1 00 0
1 0 0 0
1 0 0 0
10心习
1 0 0 0
2 5
.
1 3土 3 . 5 2*
4 5
.
7 5士 3 . 54*
6 3
.
6 3土 5 . 1 5冷 *
6 4
.
7 5土 4 . 0 6
2
.
5 土 1 . 1 9
6 1
.
1 9
2 9
.
3 4
1
。
7 3
* 与阳性对照组比较 P < 。 . 01
* * 与阳性对照组 比较 P > 。 . 05
与阴性对照组 比较 P ( 。 . 01
与阴性对照组 比较 P < 。 . 01
6 3
.
6 1 卜 Y 二 0 . I 7 X 十 3 . 2 7 卜 : t
e p : 。 . 。 5。。
/ /
x = o
·
0 0 0 0 / /` 一划的
!/
/ 、
徽核抑制率ǎ承)
3 5 0
。
0 0
升麻浓度 ( m : / k g )
附图 兴安升麻对M M C诱发W i s饭 r 大鼠骨髓嗜多染红细胞微核的抑制率
讨 论
七十年代初 , S c h m i d〔5〕首先提出染色体受损是形成微核的基础 。 在细胞 有丝分裂后期
丧失着丝粒的染色体或染色体片段到末期时被两个子细胞核所丢弃或排除 , 形成第三核块 ,
并游离于细胞质中 。 1 9 7 1年 M a 七t e r 〔“ 〕等建立了微核测定法 , 1 9 73 年 H e d d l e 〔7 〕推荐用微核方
3 1 6
法来衡量染 色体损伤 。
已有报道 , 丝裂霉素 c 是一个很强的诱变剂 , 可诱发微核 〔“ 〕及染色体 〔” 〕畸变 , 通过寻找
其拮抗剂来筛选具有抗突变作用的中草药是当今药用植物 资源开发研究的一个重要分支 。 兴
安升麻作为 中医临床的一种常用药 , 具有升阳止泻的功效 , 并对中医辩证时被定性为 “ 毒 ”
的症状有一定的疗效 。 通过本实验 , 我们观察到兴安升麻对丝裂霉素 。有 明显 的拮抗作用 ,
可以明显降低丝裂霉素 c诱发的微核率 。 剂量增大 , 作用增强 , 呈正相关 ( P < 0 . 0 1 ) , 当剂
量为 2 1 . 8 8 m g / k : 时 , 其微粒抑制率仅为 1 . 73 肠 , 当剂量增至 3 5 Om : / k g时 , 微核 抑 制 率上
升至 6 1 . 19 肠 。 但从标准曲线图可以看出 , 兴安升麻总皂 试在低剂量和高剂量时的单位 剂 量
微核抑制率不如中剂量组 , 可见兴安升麻总皂试对丝裂霉素 。诱发的微核的抑制率有一定的线
性范围 。 本实验提示升麻是一个很有开发价值的抗 突变剂 , 其机理可能与提高大鼠肝微粒体
解毒酶 ( G S T ) 的活性育关 〔 , “ 〕。
参 考 文 献
l 方药中 . 辽宁中区 杂志 l , 5 1 , ( 5 ) : 3 2
2 柴田丸 , 等 . 药学杂志 1盯 7 , ( s ) : 。 一1
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M u t a t R e s l勺了 3 ; ( 一8 ) : 1 8 了
了 黄建 , 等 . 癌变 · 畸变 · 突变 均 9 1 , 3 ( 4 ) ; 27
8 王亚平 , 等 。 癌变 · 畸变 · 突变 1 9 9。 , 2 ( 3 ) : 1