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祖师麻熏洗液对兔膝骨关节炎模型细胞因子和关节软骨的影响



全 文 :NDP对多种移植性动物肿瘤均有抑瘤活性 , 并与顺铂和卡铂
的生命延长率和化疗指数进行比较 ,其疗效高于或等于顺铂 ,
明显高于卡铂 ,肾毒性低[3] 。本观察中 26 例患者应用国产长
春瑞滨联合奈达铂化疗 , 不良反应低 , 疗效提高 , 总有效率
89.2%。主要不良反应为骨髓抑制和浅静脉炎。骨髓抑制程
度低 , 3-4 度抑制占 34.6%, 及时予粒细胞集落刺激因子CSF 或 CM-CSF)支持能够按时完成化疗周期。联合奈达铂可
增加剂量强度 ,乳腺癌化疗剂量-反应曲线为线性关系 ,提高剂
量强度可增加疗效[ 4] 。长春瑞滨仅高浓度时才对轴索微管产
生影响 ,因而神经毒性很低。长春瑞滨易致静脉炎 , 可能为药
物刺激血管内皮细胞 、血小板导致组织胺和 5-HT 等介质释放
致血管红 、肿 、痛 、渗出及縻烂[ 5] 。临床应用中可采用外周静脉
PICC 置管后快速滴入 , 且应用长春瑞滨后立即予 NS 100mL
加地塞米松 5mg 快速静脉滴入 , 静脉炎的发生率明显降低。
长春瑞滨(NVB)联合奈达铂(NDP)化疗方案对乳腺癌肺转移
疗效较高 , 且经予 P ICC 置管及予 NVB 后即刻给予生理盐水
l00m L加地塞米松 5mg 静脉滴入 ,浅静脉炎发生率明显降低 ,
值得临床推广。
参考文献:
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·临床研究·
祖师麻熏洗液对兔膝骨关节炎模型细胞因子和关节软骨的影响
李建军 ,周 杰 ,陈立谷 ,陈晓勇 ,张培忠
(重庆市中医院骨科 400013)
  摘 要:目的 为观察祖师麻熏洗液对兔膝骨关节炎模型关节软骨及关节冲冼液中 IL-1β 和 TNF-α水平的影响。方法 以
参照 Vandman 法建立兔膝骨关节炎模型 ,随机分为模型对照组 ,扶他林软膏组 , 祖师麻熏洗液组 ,另取同龄正常兔为正常对照组。
正常和模型对照组于膝关节处用热水熏洗 ,其余各组以相应的药物熏洗和涂抹。未次熏洗后 24h ,参照毕胜等方法抽取各组动物
膝关节冲洗液 ,取上清液测 TNF-α、IL-1β;空气栓塞处死动物 , 取股骨内髁组织块 , HE 染色及 Safronin O-Fastg reen 染色 ,光镜观
察软骨的形态学变化。结果 祖师麻熏洗液能显著降低关节冲冼液中 TNF-α、IL-1β 水平(P <0.05 或 0.01),减轻关节软骨损
伤。结论 祖师麻熏洗液可通过抑制炎性细胞因子(IL-1β 、TNF-α)的水平 ,保护关节软骨而对骨关节炎起防治作用。
关键词:祖师麻熏洗液;骨关节炎;细胞因子;关节软骨
中图分类号:R684.3 , R681.3 文献标志码:A 文章编号:1671-8194(2008)14-061-04
  膝关节骨性关节炎(knee osteoarithitis , KOA)是多种病因
引起的关节退化 、关节软骨破坏 、膝关节周围软组织蜕变所致
的慢性关节炎 ,其主要症状是膝关节疼痛 、肿胀 、畸形和功能障
碍等 ,近年来随着人口老龄化趋势的发展 ,其发病率也明显上
升[ 1] 。在临床上应用重庆市中医院研制的祖师麻熏洗液外敷
治疗该病取得了满意的效果。因此 ,通过建立兔膝骨关节炎动
物模型 ,用祖师麻熏洗液外敷治疗 , 检测治疗后与骨关节炎密
切相关的炎性细胞因子的含量 ,观察祖师麻熏洗液对兔膝骨关
节炎模型关节冲冼液中细胞因子含量的影响 , 同时通过病理切
片检测 ,观察其对关节软骨的保护作用 , 探讨其对膝关节骨关
节炎炎性细胞因子及关节软骨的影响。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 成年新西兰兔 32 只 , 3 ~ 4 月龄 ,体重
2.5 ~ 3kg ,雌雄各半 , 由成都中医药大学实验动物中心提供。
1.2 实验药物 祖师麻熏洗液 , 重庆市中医院经验方 ,由重庆
市中医院提供。
1.3 实验试剂 (1)IL-1β 、TNFα测试试剂盒均购于中国人民
解放军总医院科技开发中心放免研究所。(2)多聚赖氨酸购自
武汉博士德生物工程公司 ,其余试剂均为市售分析纯。
1.4 实验仪器 (1)FJ-2008P 自动放免测定仪。(2)TGL-
16G 高速冷冻离心机。(3)BP211D 电子天平(d=0.01mg)。
(4)奥林巴斯光学显微镜。(5)C.IMAGINGS YSTEMS 病理图
像分析系统。
1.5 实验方法 按体重随机选取 8 只动物作正常对照组 , 不
作任何处理 ,其余动物参照 Vandman 法[ 2] 将左膝关节用石膏
固定于伸直位。固定范围从兔踝关节上 3cm 至腹股沟下 1.
5cm ,固定时间 6周。制动满 6 周后 , 随机处死 2 只动物 , 取关
节软骨做病理检查以观察造模情况。造模成功后 , 去除固定 ,
剃毛。随机分为模型对照组 ,扶他林软膏组 , 祖师麻熏洗液组
(浓度为 0.84g 原生药/ mL)。正常和模型对照组以热水熏洗 ,
其余各组以相应的药物熏洗和涂抹 , 每天 1 次 , 每次 30min , 连
续 4 周。末次熏洗后 24h ,参照毕胜等[ 3]方法抽取各组动物膝
关节冲洗液 , 4℃ 3 000r/min离心 15min , 取上清液于-20℃低
温冰箱中保存待测。空气栓塞处死动物 , 打开左膝关节大体观
察后 ,以锐利刀片切取股骨内髁内侧带软骨下骨质的软骨标
本 ,使其呈约 0.5cm×0.8cm 全软骨组织块 ,置 4℃, 4%多聚甲
醛固定液中固定 24h , 然后置入 10%EDTA 液于 37°C 恒温箱
中脱钙 , 每周更换一次脱钙液 ,至手捏标本柔软有弹性并针灸
针能轻易穿过终止。流水冲洗 6h ,脱水 ,石蜡包埋。切片厚度
6μm , 裱于用多聚赖氨酸处理的载玻片上 , HE 染色及 Saf ronin
O-Fastgr een 染色 , 光镜观察软骨的形态学变化。由两个独立
的观察者按表 1 中 Mankins 评分标准为切片评分 , 取两者平
均值为最后的 Mankins得分。
1.6 观察指标
1.6.1 关节冲洗液中 IL-1β 、TNFα含量。
1.6.2 大体肉眼观察软骨表面情况;HE 染色及 Saf ronin O-
61中国医药指南 2008 年 7 月第 6 卷第 14期
DOI :10.15912/j.cnki.gocm.2008.14.042
Fastg reen 染色观察关节软骨的形态学变化并行 Mankins 评 分。
表 1  关节软骨 Mankins 评分标准表
软骨结构 软骨细胞 Saf ronin O-Fast green 潮线的完整性
a.光整如常 0 a.数量如常 0 a.正常 0 a.完整 0
b.表面出现不规则裂隙 1 b.数量弥漫性增多 1 b.染色轻度减退 1 b.多重潮线 1
c.裂隙深达移行层 2 c.出现大量簇集样细胞团 2 c.染色中度减退 2 c.软骨下血管入侵潮线 2
d.裂隙深达辐射层 3 d.数量明显减少 3 d.染色重度减退 3
e.裂隙深达钙化层 4 e.染色完全消失 4
f.软骨层脱落 5
1.7 统计学处理 采用 t或 t检验进行组间比较 , 检验水准α
=0.05。采用 PEMS2.1 统计软件进行统计计算。
1.8 TNFα测定方法 采用液相竞争法 , 标记 TNFα和待测
样品中的 TNFα竞争性的与特异性抗体结合 ,以 PR试剂作为
分离剂 ,采用γ计数器测定沉淀放射性 , 通过标准曲线计算出
样品中 TNFα值。具体步骤如下:TNFα抗血清(冻干品), 用
前加 PBS 10.5m L 溶解。125 I-TNFα(冻干品), 用前加 PBS 10.
5mL 溶解。 TNFα标准品(冻干品)5 瓶 , 用前加 PBS 1mL 溶
解 ,浓度分别为 24.3、8.1、2.7 、0.9 、0.3ng/ mL 。缓冲液(PBS)
1 瓶 , 10mL , 用蒸馏水稀释至 50m L。取聚苯乙烯试管编号加
样 ,加入分离剂后充分混匀 , 放室温 20min , 4℃, 3 500r/min×
25min 离心 ,吸弃上清液 , 在自动γ计数器上测放射性。所有
计算均由自动γ计数器预先编制程序 , 直接给出有关参数 、标
准曲线及样品浓度。
1.9 IL-1β 测定方法 采用平衡法。具体步骤如下:(1)IL-1β
抗血清(冻干品),用前加 PBS 10.5mL 溶解。(2)125 I-IL-1β(冻
干品),用前加 PBS 10.5m L溶解。(3)IL-1β 标准品(冻干品)6
瓶 ,用前加 PBS 1mL 溶解 ,浓度分别为 0.03 、0.1、0.3 、0.9 、2.
7 、8.1ng/ mL。(4)取聚苯乙烯试管编号加样 ,加入分离剂后充
分混匀 , 放室温 20min , 4℃, 3 500r/ min×25min 离心 , 吸弃上
清液 ,在自动γ计数器上测各管沉淀部分的放射性(cpm)。所
有计算均由自动γ计数器预先编制程序 , 直接给出有关参数 、
标准曲线及样品浓度。
1.10 统计学处理 所有数据均用 x±s表示 ,采用 t或 t检验
进行组间两两比较 ,检验水准α=0.05 , 用 SAS 8.0 统计软件
进行分析。
2 结  果
2.1 对关节冲洗液中 IL-1β 、TNFα含量的影响 , 结果见表 2。
表 2  祖师麻熏洗液对兔膝骨关节炎模型关节冲冼液
 中 TNF-α、IL-1β 含量的影响(x±s)
组别 动物数(只)
剂量
(g/mL)
IL-1β
(ng/mL)
T NF-α
(ng/mL)
正常对照组 8 - 0.28±0.11**1.64±0.30**
模型对照组 8 - 0.52±0.07 2.83±0.37
祖师麻熏洗液组 8 0.84 0.34±0.07**2.19±0.21**
扶他林软膏组 8 0.45g 软膏 0.36±0.06**2.28±0.20**
  与模型对照组比较(t 检验或 t检验), *P<0.05 , **P<0.01。
  由表2 可知 , 正常对照组关节冲洗液中 TNF-α、IL-1β 含量
低于模型对照组 , 有显著性差异(P <0.01), 说明造模后兔左
膝关节液中炎性细胞因子增高。扶他林软膏组 、祖师麻熏洗液
组关节冲洗液中 TNF-α、IL-1β 含量比模型对照组低 , 有显著
性差异(P<0.01)。说明祖师麻熏洗液可降低关节冲洗液中
炎性细胞因子的水平。
2.2 对关节软骨形态学的影响
2.2.1 大体观察 正常对照组无明显关节积液及滑膜增生 ,
关节软骨面光滑 ,色泽明亮。模型组大部分出现关节积液及滑
膜增生 ,关节面以溃疡形成为主 。祖师麻熏洗液组及扶他林软
膏组部分动物出现关节积液及滑膜增生 , 软骨改变以糜烂粗糙
为主。
  示软骨表面光整 , 软骨四层结构清晰可见 ,基质 Saf ronin O-Fast-
g reen染色无减退。
图 1  正常对照组 Safronin O-Fastg reen 特染(×100)
  示软骨表面糜烂 ,表层中大量簇集样细胞团形成 ,基质 S af ronin O-
Fas tgreen染色明显减退。
图 2  模型对照组 Safronin O-Fastg reen 特染(×100)
2.2.2 光镜观察 正常对照组软骨表面光整 , 软骨四层结构
清晰可见 ,基质 Saf ronin O-Fastg reen染色无减退;模型组大部
分标本软骨表面出现溃烂缺损 , 软骨细胞明显减少 , 多见坏死
崩解细胞 ,潮线紊乱甚至消失 , Safr onin O-Fastg reen 染色重度
减退;祖师麻熏洗液组 、扶他林软膏组软骨表 、中层细胞数弥漫
62 中国医药指南 2008 年 7月第 6卷第 14 期
性增多 ,并出现簇集样细胞团 , 部分标本软骨表面出现裂隙及
深达中层的糜烂 ,可见潮线紊乱 , 基质 Saf ronin O-Fastg reen 染
色不同程度减退。祖师麻熏洗液组病理改变与模型组相似 , 见
图 1~ 4。Mankins 评分见表 3。
  示软骨表层中大量簇集样细胞团形成 ,基质 Safronin O-Fas tg reen
染色减退。
图 3  扶他林软膏组 Safronin O-Fastg reen 特染(×100)
  示软骨表层中大量簇集样细胞团形成 ,基质 S af ronin O-Fast green
染色减退。
图 4  祖师麻熏洗液组 Safronin O-Fast g reen 特染(×100)
表 3  祖师麻熏洗液对兔膝骨关节炎模型关节
 软骨 Mankins 评分(x±s)
组别 动物数(只)剂量(g 原生药/mL) Mankins评分
正常对照组 8 - 2.32±1.08
模型对照组 8 - 9.33±1.72
祖师麻熏洗液组 8 0.84 6.21±1.34**
扶他林软膏组 8 0.45g 软膏 6.13±1.29**
由表 3 可知 ,正常对照组 M ankins 评分低于模型对照组 ,
有显著性差异(P <0.01)。扶他林软膏组 、祖师麻熏洗液组
Mankins 评分比模型对照组低 ,有显著性差异(P<0.01)。说
明祖师麻熏洗液可减轻关节软骨的病理损伤。
3 结  论
(1)祖师麻熏洗液可通过降低炎性细胞因子(IL-1β 、TNF-
α)的水平对兔膝骨关节炎起治疗作用。(2)祖师麻熏洗液能减
轻兔膝骨关节炎关节软骨的病理损伤 , 对关节软骨有保护作
用。(3)祖师麻熏洗液影响炎性细胞因子的具体途径及保护关
节软骨的作用机制尚有待进一步研究。
4 讨  论
膝骨关节炎以关节软骨的变性 、破坏及骨质增生为特征。
关节滑膜细胞分泌的 IL-1β 、TNF-α可部分解释 OA 的病理过
程 , IL-1β 、TNF-α的存在可能在炎症关节中起着重要作用 , 能
引发滑膜炎症和介导关节软骨的破坏[ 4] 。 本实验中实验对照
组 OA 膝关节液标本中 IL-1β 、TNF-α含量与模型对照组比较
差异有显著性(P<0.01)。这也证明 IL-1β 、TNF-α水平对 OA
的发生 、发展病变过程有意义。 TNF-α和 IL-1β 只有 3%的同
源性 , 但 TNF-α于靶组织的效应与 IL-1 在很大程度上类似 ,
TNF-α能诱导其他细胞因子 , 包括 IL-1β 的产生 ,而 IL-1β 能提
高 TNF-α的活性。体外实验证实 TNF-α与 IL-1β 有着协同作
用 ,能介导对关节组织的破坏[ 5] 。 OA 病因复杂并存在争议 ,
但该病总伴有不同程度的滑膜炎症。 目前认为滑膜炎在 OA
发病中起着重要的作用 ,它可加速软骨基质的分解代谢 , 加速
软骨蜕变。 IL-1是最经典的炎症调节剂 , 有 IL-1α和 IL-1β 两
种亚型。有学者报道培养膝关节滑膜细胞后 , 其上清液有 IL-1
主要以 IL-1β 为主 , IL-1β 是关节软骨破坏的最重要的一种炎
性细胞因子[ 6] ,能促进滑膜细胞的增殖和分化 , 促进滑膜细胞
和软骨细胞合成并释放 PGE2 和胶原酶 ,后者能导致滑膜炎症
反应和软骨基质的崩解。 TNF-α亦能促进 PGE2 和胶原酶的
合成及释放[ 7] ,还可引起骨和软骨的吸收及破坏 ,促进成纤维
细胞的增生。同时 , 上述 2 种炎性细胞因子还可诱导痛觉过
敏[ 8 ~ 10] 。
本方以祖师麻祛瘀止痛 、祛风除湿为君药 ,其性苦 , 辛 ,温 ,
有小毒 ,主要成分为祖师麻甲素 、7.8-二甲氧基豆素 、祖师麻乙
素 、祖师麻丙素 、瑞香素等 ,动物试验表明 , 祖师麻甲素 、7.8-二
甲氧基豆素有较强的镇痛作用 , 祖师麻 70%乙醇提取物 1.5g/
kg 抗感染效果与 0.5g/ kg 水杨酸钠近似[11] 。当归活血祛瘀
止痛 ,牛膝补肝强肾 , 白芍揉筋通络 ,桂枝散寒除湿通络止痛为
臣 ,当归提取物的镇痛作用是乙酰水杨酸钠的 1.7 倍[ 12] , 白芍
具有抗感染止痛作用 ,白芍甙可降低大鼠佐剂性关节炎的 IL-1
水平 ,具有显著抑制炎症的作用[ 8] 。肿节风消肿除湿 ,制乳没 、
见血清活血祛瘀止痛 , 杜仲强筋骨补肝强肾 , 细辛助桂枝散寒
除湿通络止痛 , 细辛挥发油具有局麻和镇痛作用[ 13] 。冰片引
药入经。共达活血通络 , 散寒止痛 , 补肝强肾之效。 本实验研
究表明 ,祖师麻熏洗液可通过降低炎性细胞因子(IL-1β 、TNF-
α)的水平对骨关节炎起治疗作用 ,同时还发现对关节软骨具有
保护作用 ,能减其病理损伤。关于祖师麻熏洗液影响炎性细胞
因子的具体途径及保护关节软骨的作用机制尚有待进一步研
究。
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·临床研究·
肝尾状叶的断面解剖与 CT
王重周1 ,周庭永2 ,韩景茹2 ,吕发金3
(1.重庆医药高等专科学校 400051;2.重庆医科大学解剖学教研室 400016;
3.重庆医科大学第一附属医院放射科 400016)
  摘 要:目的 为临床影像诊断肝尾状叶病变提供形态学依据。方法 采用 30 例成人横断面标本和 30 例成人腹部 CT , 各
选取肝尾状叶所在的 4 个连续横断面 ,观测尾状叶与脊柱的对应高度 、形态 、位置 、毗邻关系及有关径值。结果 尾状叶在 T 10 ~
L1 脊柱高度均可 100%显示;静脉韧带裂和下腔静脉分别居尾状叶的前 、后方 ,可作为各层面识别尾状叶的标志性结构;尾状叶的
横断面形态 ,头侧层面中以钩形多见 , 尾侧层面以舌形为主 , 断面标本和 CT 中尚有 7 例(23.33%)和 5 例(16.67%)乳头突与肝
分离。断面标本和 CT 肝尾状叶测值的对比 , 显示两者间无显著性差异(P>0.05)。结论 第 1 肝门层面肝尾状叶与肝右叶的最
大横径之间有相关关系。
关键词:肝尾状叶;断面解剖;CT
中图分类号:R657.3;R323.31 文献标志码:A 文章编号:1671-8194(2008)14-064-02
  肝尾状叶的位置特殊和毗邻关系复杂 ,故这一区域的病变
常使断层影像诊断时困惑和误诊。 为配合影像诊断和介入放
射学的需要 ,不少学者从断面解剖[ 1 ~ 4]和 C T[ 5 ,6]对肝尾状叶的
位置 、断面形态和与周围结构的解剖关系进行了研究。但对肝
尾状叶在断面上的定量研究甚少 , 为此本文利用断面标本和
C T 相结合 ,对肝尾状叶进行了观测 , 旨在为临床影像诊断和
介入放射学提供更为翔实的形态学资料。
1 材料与方法
利用 30 例成人整尸(男女各半)。经防腐固定 ,低温冰冻
后 ,用日本产 Katoman尸体切断器 ,按片厚 10mm 制成腹部连
续横断面 ,片间耗损 lmm。同时采用 30 例正常成人(男 20 , 女
10),用 PQ-5000 型螺旋 CT 腹部平扫 ,层厚 8mm ,进床为 1.5。
各选取肝尾状叶所在的四个连续断面 ,观测尾状叶出现和消失
平面与脊柱的对应高度 、断面中肝尾状叶的位置 、形态和毗邻
关系 ,以及各层面肝尾状叶的有关径值。以下腔静脉右缘至尾
状叶最突端为其长度 ,垂直于尾状叶长轴测量尾状叶的最大宽
度 ,再从下腔静脉右缘作平行矢状面的纵线 , 由此线向左 、右分
别测量尾状叶及右叶的最大横径。
2 结  果
2.1 层面 1 该层面与脊柱的对应高度集中于 T 10~ 11水平
(86.67.00%), 断面中识别肝尾状叶的标志结构为静脉韧带裂
和下腔静脉 ,在 CT 上亦可清晰地显示。肝尾状叶位居两者之
间 ,由右前向左后突起 , 其左前隔静脉韧带裂与肝左外叶相邻:
右后为下腔静脉;左侧邻近胃贲门 , 并于该处构成网膜囊上隐
窝的前壁和右壁:右侧与肝右叶相连。
2.2 层面 2 该层面与脊柱的对应高度多集中于 T 11~ 12水平
(90.00%),断面中肝尾状叶仍位居静脉韧带裂和下腔静脉之
间。其中静脉韧带裂向前与肝左纵沟相连 ,沟内可见肝门静脉
左支。下腔静脉位于肝右后缘腔静脉沟内 , 有时可见细小的尾
状叶静脉汇入其内。左侧为胃 ,可见由胃小弯侧伸入左纵沟内
的肝胃韧带 ,肝胃韧带和右膈脚之间的“ >”形区域为网膜囊上
隐窝;右侧与肝右叶相连。
2.3 层面 3 该层面与脊柱对应高度多集中于 T 12水平(93.
33%)。肝尾状叶突起方向较上两个层面略改变 , 为由右向左
突起 , 其前方的毗邻结构为肝门静脉左支脐部和静脉韧带裂;
后方为下腔静脉和右膈脚;左侧为网膜囊上隐窝所环绕;右侧
经门静脉和下腔静脉之间的尾状突与肝右叶相连。
2.4 层面 4 该层面系第 1 肝门层面 , 与脊柱的对应高度多
集中于 T 12 ~ L1 水平(90.00%)。断面中肝尾状叶由右后向左
前突起 , 其前方为横沟和静脉韧带裂;后方为下腔静脉和右膈
脚;左侧突起部系肝尾状叶的乳头突 , 突入在肝胃韧带与右膈
脚之间的网膜囊上隐窝内。右侧经肝门静脉与下腔静脉之间
狭细的尾状突与肝右后叶相连。
2.5 在本组 30 例横断面标本和 30 例 CT 中 , 肝尾状叶在各
层面上的断面形态多变 ,观测结果见表 1。
在断面标本和 C T 中分别有 7 例(23.33%)和 5 例(16.
67%)肝尾状叶的乳头突与肝右叶并不相连 , 而成分离状态 , 这
种完全分离的肝尾状叶乳头突通常出现在第一肝门平面的上 、
下断面中。
有关肝尾状叶在横断面标本和 CT 各层面的测值及肝右
叶的测值见表 2。
  并就横断面标本和 CT 同层面肝尾状叶测值进行了对照
分析 ,其 t检验P 值均大于 0.05。在同层面中 ,尾状叶与肝右
叶最大横径的相关关系统计处理表明:第一 、二 、三层面无显著
性相关 ,而第四层面 , 即肝门层面其相关系数为 0.39 , P 值为
0.04。
64 中国医药指南 2008 年 7月第 6卷第 14 期