全 文 ：收稿日期:2009-03-02
作者简介:蒋益花 (1965-), 女 , 浙江东阳人 , 高级讲师 , 本科 , 主要从事天然产物化学研究工作。
栀子花总黄酮的提取与测定
蒋益花
(浙江树人大学 生物与环境工程学院 , 浙江 杭州　310015)
　　摘　要:利用 L9 (34)正交试验设计和 Duncan法检验 , 分析了栀子花黄酮的最佳提取条件及其含量。结果
表明 , 采用 0.05 g·mL-1的 50%乙醇水溶液 , 提取温度为80 ℃, 提取时间为 1 h , 水栀子花黄酮的提取效率较好;
使用 0.10 g·mL-1的 50%乙醇水溶液 , 提取温度为70 ℃, 提取时间为 1 h , 大花栀子花黄酮的提取效率较好。水
栀子花的黄酮含量高于大花栀子。
关键词:栀子;花;总黄酮;提取工艺
中图分类号:S682.39　　　文献标识码:B　　　文章编号:0528-9017(2009)04-0839-03
　　栀子 (Gardenia jasminoides), 是茜草科常绿灌
木 , 叶色翠绿 , 花色雪白 , 清香四溢。栀子花原产
我国中部 , 现在全国各地广泛栽培 , 尤以长江流域
及以南地区分布最广 , 是道路绿化 、城市美化 、 庭
院香化的良好树种之一[ 1] 。在中医临床应用中 , 其
果实具有清热 、 泻火 , 凉血之功效 , 栀子的根 、
叶 、 花还有解毒 、祛风 、 清肺 、利尿等功效[ 2-3] 。
黄酮类化合物有明显的抗溃疡 、解痉 、 抗炎及
降血脂等生物活性[ 4] , 在医药和食品上应用广泛 。
文献记载有从玫瑰花 、桂花 、 金银花等植物中提取
黄酮类化合物等[ 5-7] 。但对于栀子 , 特别是栀子花
的黄酮类提取的相关研究鲜见报道 。我们以乙醇为
溶剂 , 以栀子的 2 个常见品种大花栀子 (G.
jasminoides var.grandiflora) 和 水 栀 子 (G.
radicans Thunb)的花为原料 , 对影响其黄酮提取的
主要因素用正交试验 , 以黄酮含量为指标 , 用方差
分析方法进行分析 , 从而优选并比较大花栀子与水
栀子的花黄酮的提取条件 , 测定其含量 , 为栀子资
源的合理利用提供科学依据。
1　材料与方法
1.1　试验材料和测定仪器
供试的大花栀子花和水栀子花采自丽水学院校
园。芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所。所
用试剂均为国产分析纯。所用测定仪器为北京瑞利
UV-9100型紫外可见光谱仪 , AL204型电子分析天
平 , 数显恒温水浴锅 HH-2。
1.2　测定方法
标准曲线的制备[ 8-9] 。精密称取芦丁对照品 20
mg , 置于100 mL 容量瓶中 , 加 80%乙醇溶液至刻
度 , 摇匀后即得对照品溶液。分别精密吸取上液
1.0 , 2.0 , 3.0 , 4.0 和 5.0 mL 置于 10 mL 比色管
中 , 各加 80%乙醇至 5 mL , 加 5%NaNO2 溶液 0.5
mL , 摇匀放置6 min , 再加 10%Al (NO 3)3溶液 0.5
mL , 摇匀 , 再放置 6 min , 加 4%NaOH 溶液 4 mL ,
摇匀放置 15 min , 在 510 nm 波长处 , 以同法配制
空白对照 , 测定吸光度值 , 得回归方程 C =
0.848 9A+0.006 905 , 其线性范围为0 ～ 0.5 mg , 相
关系数0.999 5。
样品处理及黄酮含量测定。黄酮提取 , 各精密
称取干燥的大花栀子和水栀子的花粉末1.000 0 g ,
置于锥形瓶中 , 按表 1 、 表 2选择的因素和水平进
行水浴加热提取 , 滤去残渣 , 用相应提取剂定容至
100 mL , 即得黄酮提取液 。
样品测定。精密吸取黄酮提取液 1.0 mL于 10
mL比色管中 , 按各加 80%乙醇至 5 mL 起进行操
作 , 同时精密吸取黄酮提取液 1.0 mL 于 10 mL 比
色管中 , 加 80%乙醇至 5 mL , 再加 l mL 水 , 4 mL
4%NaOH 溶液 , 作样品空白测定吸光度值。按回
归方程计算样品液中的黄酮含量 。
提取条件优选 。根据预试验结果 , 采用正交试
验设计 , 应用 L9 (34)正交表 , 对提取剂 、 提取温
度 、提取时间 、提取剂用量 4因子在 3个水平进行
优选 (表 1)。结果采用直观分析和方差分析 , 影
　　2009年第 4期 839　
响黄酮提取因子的显著性检验采用 Duncan法[ 10] 。
表 1　正交试验的因素与水平
水平
因素
A提取剂
%
B提取剂用量
(g·mL-1)
C提取时间
min
D 提取温度
℃
1 50 0.10 1.0 60
2 60 0.05 1.5 70
3 70 0.03 2.0 80
　　水栀子 、大花栀子花总黄酮含量测定与比较 。
以正交优先的最佳条件提取总黄酮 , 分别按上述方
法进行黄酮含量测定 。
2　结果与讨论
2.1　最佳提取条件的筛选
各试验号根据具体给定的提取条件所得的提取
液 , 用相应提取剂分别定容于 100 mL 容量瓶中 ,
根据样品测定方法进行测定并计算黄酮含量 。由表
2可以看出 , 对于 2个品种的栀子花 , 正交试验的
4个因子影响显著性有相对一致性 , 以提取料液比
对提取率的影响最大 , 由极差数据可见 , 各因子对
提取率的影响依次为:提取料液比>提取温度>提
取剂>提取时间 。直观分析正交试验结果可知 , 水
栀子花黄酮提取的最佳工艺条件为 A3B2C1D3 , 即
提取剂用 70%乙醇溶液 , 用量 0.05 g·mL-1 , 提取
时间 1 h , 提取温度80 ℃;大花栀子花黄酮提取的
最佳工艺条件为 A1B2C2D2 , 即提取剂用 50%乙醇
溶液 , 用量0.05 g·mL-1 , 提取时间1.5 h , 提取温
度70 ℃。
表 2　各处理组合的黄酮含量
试验号 处理组合 黄酮含量 %水栀子 大花栀子
1 A1B1C1D1 6.580 1 3.583 5
2 A1B2C2D2 7.233 8 4.508 8
3 A1B3C3D3 7.361 1 3.668 4
4 A2B1C2D3 7.030 0 3.167 5
5 A2B2C3D1 7.276 2 4.220 2
6 A2B3C1D2 7.199 8 4.228 7
7 A3B1C3D2 6.563 1 3.974 0
8 A3B2C1D3 7.454 5 4.313 6
9 A3B3C2D1 7.131 9 4.109 8
　　由实验数据的方差分析结果可知 , 因子 B 、 D
为显著性因子 , 其它因子为不显著因子 , 可以综合
考虑确定 , 由后面 Duncan法检验后确定 。
表 3结果表明 , 2个品种的栀子花中 , 除提取
时间及提取剂外其它因素有显著性差异。其中水栀
子花中 , 用量 0.05 g·mL-1 、 0.03 g·mL-1间差异不
显著 , 而与 0.10 g·mL-1间差异显著 , 提取温度
80 ℃与其它水平差异皆显著;大花栀子花中 , 料
液比用量 0.10 g·mL-1 、 0.05 g·mL-1差异不显著 ,
但与 0.03 g·mL-1差异显著 , 提取温度70 ℃与其它
水平差异显著。考虑资源与能源的利用 , 综合分析
确定最佳工艺条件为:水栀子花黄酮提取的最佳工
艺条件为 A1B2C1D3 , 即提取剂用 50%乙醇溶液 ,
用量 0.05 g·mL-1 , 提取时间 1 h , 提取温度80 ℃;
大花栀子花黄酮提取的最佳工艺条件为A1B1C1D2 ,
表 3　各因素不同水平的黄酮含量比较
栀子
A B C D
水平 黄酮含量 %
差异显著性
5% 1% 水平
黄酮含
量 %
差异显著性
5% 1% 水平
黄酮含
量 %
差异显著性
5% 1% 水平
黄酮含
量 %
差异显著性
5% 1%
水栀子 2 7.168 7 a A 2 7.321 5 a A 2 7.131 9 a A 3 7.281 9 a A
1 7.058 3 a A 3 7.230 9 a A 1 7.078 1 a A 2 6.998 9 b A
3 7.049 8 a A 1 6.724 4 b B 3 7.066 8 a A 1 6.996 1 b A
大花栀子 3 4.132 5 a A 1 4.347 5 a A 1 4.041 9 a A 2 4.237 1 a A
1 3.920 2 a A 2 4.002 3 a A 3 3.954 2 a A 1 3.971 2 b A
2 3.872 1 a A 3 3.575 0 b A 2 3.928 7 a A 3 3.716 5 b A
840　 　　2009年第 4期
即提取剂用50%乙醇溶液 , 用量 0.10 g·mL-1 , 提
取时间 1 h , 提取温度70 ℃。与直观分析 、 方差分
析基本一致。
2.2　水栀子 、 大花栀子花的总黄酮含量比较
以正交优先的最佳条件提取总黄酮 , 得出平均
总黄酮含量水栀子花为 7.38%、 大花栀子花的总
黄酮含量为 4.23%, 水栀子花黄酮含量较高 。测
定结果与原试验结果基本一致 。
3　小结与讨论
通过正交实验结果的直观分析和方差分析及
Duncan法检验得出 , 影响大花栀子 、 水栀子花黄
酮的提取因素的显著性是相同的。对黄酮的提取效
果影响最大的是的提取料液比 , 其次是提取温度 。
两者的最佳提取条件稍有差异 , 水栀子为提取剂用
50%乙醇溶液 , 用量 0.05 g·mL-1 , 提取时间 1 h ,
提取温度80 ℃。而对大花栀子花黄酮的最佳工艺
条件为 提取剂用 50%乙醇 溶液 , 用量 0.10
g·mL-1 , 提取时间 1 h , 提取温度70 ℃。在最佳提
取条件下 , 两者所得黄酮产率也不同 , 水栀子花黄
酮含量较高。在本试验条件下 , 水栀子 、大花栀子
的含量较高 , 得率在3.167 5%～ 7.454 5%。由此可
见 , 栀子花有很好的开发利用价值 。如果与提取栀
子花挥发性香味物质相结合进行综合开发则附加值
更高。
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(责任编辑:王家玉)
(上接第 821页)
率等因素造成的 。大肠杆菌出现耐药现象是由于猪
场长期滥用抗生素所致 , 耐药性通过染色体或质粒
在细菌间传播和扩散 , 致使细菌产生不同程度的耐
药性 。一些曾对大肠杆菌有效果的药物在有些地方
已经失去其应用价值 。定期对大肠杆菌的菌株进行
抗生素敏感性的监测 , 选取最有效的药物控制仔猪
大肠杆菌病。在治疗时最好选用 2种或 2种以上的
敏感药物交替进行 , 尽量减少或延缓抗药菌的产
生 , 治疗大肠杆菌最好不要长期过量使用同一种
药物 。
在本试验中 , 乳酸环丙沙星的敏感率高于其它
抗生素 , 达到 79.47%, 为了进一步提高药效以及
考虑到大肠杆菌易产生耐药性等因素 , 我们考虑到
辅以中草药 , 可能会减少抗生素的用量 , 提高抗生
素的疗效 。有资料报道大蒜油 、鱼腥草 、紫草等中
草药可消除大肠杆菌的耐药性 。从本次试验看 , 复
方乳酸环丙沙星对大肠杆菌的敏感率达到了
95.63%, 复方乳酸环丙沙星在防治大肠杆菌方面
具有自己独特的优势 。
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(责任编辑:王一成)
蒋益花:栀子花总黄酮的提取与测定 841